陳依春 李 捷 姚 歡 阿 多 白瑪央金 旦增次仁 洛桑桑旦 丹增色珍 孫芳云

西藏民族大學(xué)基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)院生命科學(xué)基礎(chǔ)研究實(shí)驗(yàn)室、藏藥篩選實(shí)驗(yàn)室，陜西 咸陽 712082

檀香，豆科植物青龍木 Pterocarpus indicus Willd．的干燥心材。原產(chǎn)于印度至東南亞各地，我國云南、海南等地亦有栽培，別名：薔薇木、青龍木、赤血樹，是一種集藥用、香料、工藝雕刻材料于一身的經(jīng)濟(jì)植物[1]。系藏醫(yī)常用藥材，味辛、性溫，歸脾、胃、心、肺經(jīng)，具有行氣溫中、開胃止痛之功效[2]。主要用于寒凝氣滯、胸膈不舒、胸痹心痛、脘腹疼痛、嘔吐食少等病癥[3]。

多年來，國內(nèi)外學(xué)者對檀香的引種栽培、主要成分及其藥理作用等方面作了大量研究，有研究顯示，黃酮類化合物是檀香的主要有效成分之一[4-6]，黃酮類化合物有抗氧化、抗炎、鎮(zhèn)痛、調(diào)節(jié)免疫、抗衰老、降血脂作用[7]。但目前對于檀香黃酮類化合物的藥理作用研究較少，本研究旨在為市售檀香建立一種可操作性強(qiáng)的總黃酮含量測定方法，為進(jìn)一步研究檀香藥材的藥理作用提供依據(jù)。

1.儀器與試劑

1.1 儀器 Lambda25紫外分光光度計(jì)(美國PE)；超聲提取儀：HAD-SY-800，長春樂璞科技有限公司；搖擺式中草藥粉碎機(jī)：DFY-200，大德藥機(jī)；

1.2 試劑 蘆丁對照品：中國食品藥品檢定研究院提供(100080-201610，供含量測定用，100mg/支)；檀香對照藥材：批號121310-201302 (ID:H9WL-8HQ5)，中國食品藥品檢定研究院提供。三氯化鋁、亞硝酸鈉、氫氧化鈉、無水乙醇等均為分析純。

1.3 樣品 購自廣東、澳大利亞、馬來西亞、印度，拉薩(樣品依次為1，2，3，4，5)等地的市售檀香(批號20170625；20170717；20170728；20170812；20170815)，由西藏拉薩甘露藏藥廠鑒定為正品。

2 方法與結(jié)果

2.1 總黃酮含量測定

2.1.1 供試品及對照品溶液的制備 精密稱取市售檀香藥材粉末0.1 g, 置25 mL錐形瓶中, 加入50%乙醇15 mL，搖勻，密塞，超聲振蕩30 min，放冷，過濾，濾液收集于25 mL容量瓶中，即得。精密稱取在120℃減壓干燥至恒重的蘆丁對照品28.66 mg，置25 mL容量瓶中, 用無水乙醇定容。精密量取10.00 mL蘆丁對照品溶液于50 mL容量瓶, 用無水乙醇稀釋、定容，搖勻即得蘆丁對照品溶液(0.22928 mg/mL)。

2.1.2 測定波長的選擇 精密移取對照品溶液2.00 mL置25 mL容量瓶中,按順序依次加入5%NaNO2溶液1 mL，搖勻,放置6 min,加10% AlCl3溶液1 mL搖勻,放置6 min,再加入4% NaOH溶液10 mL,加蒸餾水稀釋至刻度,搖勻，放置15 min。精密移取蒸餾水2.00 mL，同法配制25 mL混合溶液作為空白對照,在400～700 nm范圍內(nèi)進(jìn)行掃描,確定蘆丁顯色液的最大吸收波長為508 nm。

2.1.3 線性試驗(yàn) 精密移取蘆丁對照品溶液1.00 mL、2.00 mL、3.00 mL、 4.00 mL、5.00 mL、6.00 mL,分別置于25 mL容量瓶中，按順序依次加入5%NaNO2溶液1 mL，搖勻,放置6 min,加10% AlCl3溶液1 mL搖勻,放置6 min,再加入4% NaOH溶液10 mL,并加蒸餾水稀釋至刻度,搖勻，放置15 min。

在波長為508 nm處進(jìn)行檢測，然后以吸光度為縱坐標(biāo),濃度為橫坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，最小二乘法直線回歸，得蘆丁回歸方程為:A=11.714·C+0.0503，A 為吸光度，C為質(zhì)量濃度，r=0.9995，n=5。實(shí)驗(yàn)表明蘆丁在9.17～55.0 μg/mL范圍內(nèi)呈良好的線性關(guān)系。結(jié)果見表1。

表1 線性試驗(yàn)結(jié)果

2.1.4 方法學(xué)考察

2.1.4.1 精密度試驗(yàn) 取樣品1檀香藥材粉末0.1 g，按2.1.1項(xiàng)下方法制備樣品溶液。精密量取2.00 mL，其余同2.1.3項(xiàng)下操作,測定吸光度，重復(fù)測定6次，其吸光度的平均值為0.331，RSD=0.8%，說明該方法精密度良好。

2.1.4.2 穩(wěn)定性試驗(yàn) 將樣品1檀香藥液樣品依2.1.3項(xiàng)下方法顯色，分別于顯色后的0、15、30、45、60、75、90 min時(shí)測定吸光度，RSD=1.83%，結(jié)果表明樣品顯色后在90 min內(nèi)穩(wěn)定。

2.1.4.3 重復(fù)性試驗(yàn) 平行取樣品1檀香藥材粉末1 g各6份，按2.1.1項(xiàng)下方法制備樣品溶液。精密量取2.00 mL，其余同2.1.3項(xiàng)下操作，測得其平均含量為5.55%，RSD=1.99%，表明該方法重復(fù)性良好。

2.1.4.4 樣品含量測定 取檀香藥材粉末0.1 g制備樣品溶液。精密移取2.00 mL，其余按2.1.3項(xiàng)下方法測定吸光度，代入回歸方程中，樣品中總黃酮的含量測定結(jié)果見表2，結(jié)果顯示拉薩檀香中的總黃酮含量較高，可進(jìn)一步開發(fā)。

表2 樣品含量測定結(jié)果 (n=5)

2.1.4.5 回收率試驗(yàn) 精密吸取蘆丁溶液(濃度為0.1 mg/mL)1.0 mL、 2.0 mL、3.0 mL各2份，置25 mL容量瓶中，分別加入已知含量的檀香藥液(已測得其總黃酮含量為0.1999 mg/mL)樣品溶液3.00 mL，其余按2.1.3項(xiàng)下進(jìn)行測定，結(jié)果見表3，回收率為98.11%，RSD=1.03%，表明該方法科學(xué)合理。

回收率試驗(yàn)計(jì)算公式：

總黃酮增加量/mg=(C-0.0240mg/mL)·25mL

表3 樣品的回收率試驗(yàn)

3 討論

黃酮類化合物是一類廣泛存在于蔬菜、水果和中草藥中的化合物, 是植物的次級代謝產(chǎn)物。根據(jù)文獻(xiàn)報(bào)道，黃酮的提取方法有水煎煮法、醇提取法、微波提取法、超聲波法等。本實(shí)驗(yàn)采用超聲提取法，以蘆丁標(biāo)準(zhǔn)品為對照，在波長為508 nm處進(jìn)行檢測，然后以吸光度為縱坐標(biāo),濃度為橫坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，在9.17～55.0 μg/mL范圍呈良好的線性關(guān)系，得蘆丁回歸方程為:A=11.714·C+0.0503，A為吸光度，C為質(zhì)量濃度，R2=0.9995，n=5。本研究采用紫外分光光度法回對市售檀香心材中總黃酮含量進(jìn)行測定，經(jīng)考察，該方法精密度高，重復(fù)性好，回收率也符合定量分析要求，操作簡便，可作為檀香總黃酮含量測定的一種方法，可用于檀香的日常分析及質(zhì)量控制。