佘雪花 潘 馨

福建中醫(yī)藥大學(xué)藥學(xué)院，福建 福州 350122

參麥地黃丸始載于清代張秉成《成方便讀》，是補(bǔ)益劑中補(bǔ)陰劑的代表方，由熟地黃、山藥、山茱萸、澤瀉、茯苓、牡丹皮、麥冬、北沙參八味中藥組成[1]。參麥地黃丸具有養(yǎng)陰潤(rùn)肺之功效，臨床上主要用于肺腎兩虛、咳嗽氣喘、咽干口燥[2-3]。其中，熟地黃滋腎填精為主藥，毛蕊花糖苷常被作為熟地黃質(zhì)量控制的指標(biāo)性成分，具有抗氧化、增強(qiáng)免疫功能等作用[4-5]。目前參麥地黃丸質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)僅有丸劑的常規(guī)制劑檢查項(xiàng)，缺少有效成分的含量控制[1]。為更好控制參麥地黃丸的質(zhì)量，本研究建立了HPLC法測(cè)定其毛蕊花糖苷含量，以期進(jìn)一步提高參麥地黃丸的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)。

1 儀器與材料

1.1 儀器 日本島晶LC-20AT高效液相色譜儀；在線脫氣機(jī)、四元泵、自動(dòng)進(jìn)樣器、柱溫箱、DAD檢測(cè)器、LCsolution工作站(島晶制造)；數(shù)控超聲波清洗器KQ-500DE型(昆山市超聲儀器有限公司)；OHAUS型萬(wàn)分之一電子分析天平(奧豪斯儀器(常州)有限公司)；Milli-Q超純水系統(tǒng)(美國(guó)，Millipore公司)。

1.2 材料 參麥地黃丸由福州海王金象中藥制藥有限公司生產(chǎn)提供(批號(hào)：1905071、1905072、1904162、1905081、1904152)；毛蕊花糖苷對(duì)照品(批號(hào)：AF8051802)，購(gòu)自成都埃法生物科技有限公司；乙腈為色譜純(天津市福晨化學(xué)試劑廠)，冰醋酸為分析純(天津市福晨化學(xué)試劑廠)，水為自制超純水，其余試劑均為分析純(天津市福晨化學(xué)試劑廠)。

2 方法與結(jié)果

2.1 溶液的制備

2.1.1 對(duì)照品溶液的制備 精密稱取毛蕊花糖苷2.66 mg,置于25 mL容量瓶中，加流動(dòng)相溶解并稀釋至刻度，搖勻，即得對(duì)照品儲(chǔ)備液。再精密量取1 mL置10 mL容量瓶中，加流動(dòng)相定容至刻度，配制成10.64 μg/mL對(duì)照品溶液。

2.1.2 供試品溶液的制備 取本品細(xì)粉約10 g,精密稱定，置圓底燒瓶中，精密加入甲醇100 mL，稱定重量，加熱回流30min,放冷，用甲醇定容，再稱定重量，用甲醇補(bǔ)足減失的重量，搖勻，濾過(guò)，精密量取續(xù)濾液50 mL，減壓回收溶劑近干,殘?jiān)昧鲃?dòng)相溶解,轉(zhuǎn)移至10 ml量瓶中，加流動(dòng)相至刻度，搖勻，濾過(guò)，取續(xù)濾液，即得。

2.1.3 陰性對(duì)照溶液的制備 按處方比例稱取參麥地黃丸處方飲片(除熟地外)，按照制備工藝制成參麥地黃丸缺熟地的陰性樣品，并按上述供試品溶液制備方法，制成陰性對(duì)照溶液。

2.2 色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn) 色譜柱：Chrom CoreTMC18 (5 μm,4.6×250 mm)；流動(dòng)相：乙腈-0.1%冰醋酸溶液 (14∶86)；流速：1.0 mL/min；柱溫：30 ℃。檢測(cè)波長(zhǎng)：334 nm；進(jìn)樣量：20 μL。理論塔板數(shù)按毛蕊花糖苷峰計(jì)算應(yīng)不低于5000[6]。

2.3 專屬性試驗(yàn) 分別取對(duì)照品溶液、供試品溶液、陰性對(duì)照溶液按“2.2”項(xiàng)下方法進(jìn)樣分析，在該色譜條件下，供試品中毛蕊花糖苷與對(duì)照品色譜峰保留時(shí)間一致，與相鄰峰的分離度大于1.5，陰性對(duì)照品溶液未見該峰，說(shuō)明陰性無(wú)干擾。色譜圖見圖1。

2.4 線性關(guān)系考察 分別精密量取“2.1.1”項(xiàng)下對(duì)照品儲(chǔ)備液0.2 mL、1 mL、4 mL、6 mL、8 mL置10 mL容量瓶，用流動(dòng)相稀釋至刻度，配制成2.13 μg/mL、10.64 μg/mL、42.56 μg/mL、63.84 μg/mL、85.12 μg/mL的濃度。按“2.2”項(xiàng)下方法測(cè)定，以峰面積(mAU)為縱坐標(biāo)，相應(yīng)的毛蕊花糖苷對(duì)照品濃度(μg/mL)為橫坐標(biāo)進(jìn)行線性回歸，得回歸方程：y=30347x+135606，r=0.9992。毛蕊花糖苷在2.13～106.4 μg/mL范圍呈線性關(guān)系。

2.5 精密度試驗(yàn) 取對(duì)照品溶液，連續(xù)進(jìn)樣6次，按“2.2”項(xiàng)下色譜條件測(cè)定，測(cè)得毛蕊花糖苷峰面積的RSD為1.47%，表明儀器精密度良好。

2.6 穩(wěn)定性試驗(yàn) 取同一批號(hào)參麥地黃丸供試品溶液室溫下放置，分別于0，2，4，8，12，24 h，按“2.2”項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣，測(cè)定毛蕊花糖苷峰面積，計(jì)算RSD為1.77%。表明供試品溶液中毛蕊花糖苷在24 h內(nèi)穩(wěn)定。

2.7 重復(fù)性試驗(yàn) 取同一批號(hào)參麥地黃丸(201904152)，稱取5份，每份約10 g，精密稱定，按“2.1.2”項(xiàng)下方法制備供試品溶液，按“2.2”項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣。測(cè)得毛蕊花糖苷平均含量為0.0474 mg/g，RSD為1.56%。表明該方法重復(fù)性良好。

2.8 加樣回收率試驗(yàn) 取已知含量的同一批號(hào)參麥地黃丸(201904152)，采用加樣回收試驗(yàn)，精密加入一定量毛蕊花糖苷對(duì)照品，按“2.1.2”項(xiàng)下方法制備供試品溶液，按“2.2”項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣測(cè)定，計(jì)算回收率。結(jié)果毛蕊花糖苷平均回收率(n=6)為97.63%，RSD為0.63%。表明本法具有較好的加樣回收率。見表1。

表1 回收率試驗(yàn)結(jié)果

2.9 樣品含量測(cè)定 取5批樣品(批號(hào)：1905071、1905072、1904162、1905081、1904152)，按“2.1.2”項(xiàng)下方法制備供試品溶液，按“2.2”項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣測(cè)定，并計(jì)算含量，樣品含量測(cè)定結(jié)果見表2。

表2 參麥地黃丸樣品測(cè)定結(jié)果

3 討論

熟地黃為參麥地黃丸的主藥，熟地黃中有效成分含量直接關(guān)系到藥品的療效。2015版《中國(guó)藥典》將毛蕊花糖苷作為評(píng)價(jià)熟地黃的指標(biāo)性成分，規(guī)定其含量不少于0.020%[7]。故本實(shí)驗(yàn)通過(guò)建立HPLC法測(cè)定參麥地黃丸中毛蕊花糖苷含量。在對(duì)毛蕊花糖苷的分離試驗(yàn)中，考察了乙腈—水、乙腈-磷酸溶液、乙腈-冰醋酸溶液為流動(dòng)相進(jìn)行測(cè)定，發(fā)現(xiàn)流動(dòng)相為乙腈-0.1%冰醋酸溶液(14∶86)，分離效果較好。對(duì)毛蕊花糖苷對(duì)照品溶液進(jìn)行掃描，在334 nm波長(zhǎng)處有最大吸收，故以334 nm為檢測(cè)波長(zhǎng)。本研究通過(guò)測(cè)定參麥地黃丸中毛蕊花糖苷的含量，為本制劑的質(zhì)量控制提供依據(jù)，后期課題組將繼續(xù)研究其他成分含量測(cè)定，以不斷提高參麥地黃不同制劑的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)。