張 杰 何 艷

湘南學(xué)院藥學(xué)院，湖南 郴州 423000

傷風(fēng)停膠囊由麻黃、荊芥、白芷、蒼術(shù)(炒)、陳皮和甘草組成的復(fù)方制劑，現(xiàn)行質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)收載于《衛(wèi)生部藥品標(biāo)準(zhǔn)》中藥成方制劑第十三冊中，具有發(fā)散風(fēng)寒之功效，用于外感風(fēng)寒、頭痛、鼻塞肢體酸重等癥狀。方中白芷具解表散寒、宣鼻通竅之功效，主治風(fēng)寒表證、頭痛、痹痛、鼻塞不通等癥；歐前胡素是白芷中含有的主要香豆素類成分，具抗炎、抗菌、鎮(zhèn)痛等藥理作用[1-3]?！吨袊幍洹?015年版一部收載的白芷質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)中采用HPLC法測定歐前胡素作為評價指標(biāo)[4]，而傷風(fēng)停膠囊現(xiàn)行質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)[5]中白芷藥材的質(zhì)量控制僅采用薄層鑒別，無含量測定項，無法有效控制其質(zhì)量。為此，本實驗建立HPLC法測定傷風(fēng)停膠囊中歐前胡素含量的方法，此法結(jié)果準(zhǔn)確，重現(xiàn)性好，為有效控制該制劑的質(zhì)量提供科學(xué)依據(jù)。

1 儀器與試藥

1.1 儀器 Agilent 1260高效液相色譜儀(美國Agilent公司)，AUW-220D電子天平(島津公司，感量：0.01 mg)，電熱恒溫水浴鍋(北京市永明醫(yī)療儀器有限公司)，超聲清洗器(昆山超聲儀器有限公司)。

1.2 試藥 傷風(fēng)停膠囊(云南A廠家，批號：WXCC1802、WXFA1705和WXEC1805)，歐前胡素對照品(中國食品藥品鑒定研究院，批號：110862-201616，純度：99.6%)。甲醇、乙腈為色譜純，其余試劑、試藥均為分析純，水為超純水。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件 色譜柱為Thermo Hypersil Gold-C18(4.6 mm×250 mm，5 μm)；流動相為乙腈- 0.1%磷酸(50∶50)，檢測波長300 nm；流速1.0 mL·min-1，柱溫35 ℃，進(jìn)樣量10 μL。在上述色譜條件下，歐前胡素與其他色譜峰分離較好，且陰性樣品無干擾。結(jié)果如圖1所示。

2.2 對照品溶液的制備 精密稱取歐前胡素對照品適量，置100 mL量瓶中，用70%甲醇溶液定容至刻度，得歐前胡素對照品儲備溶液(17.44 μg·mL-1)。

2.3 供試品溶液的制備 取傷風(fēng)停膠囊樣品適量，研細(xì)，取約1 g，精密稱定，置錐形瓶中，精密加入70%甲醇溶液50 mL，稱定重量，超聲提取40 min，放冷至室溫，再稱定重量，用70%甲醇補(bǔ)足減失的重量，搖勻，濾過，即得。

2.4 陰性樣品溶液的制備 取按處方工藝制成不含白芷的陰性樣品適量，研細(xì)，按“2.3”項下方法制成缺白芷的陰性樣品溶液。

2.5 線性關(guān)系考察 精密量取“2.2”項下的對照品溶液0.5、1.0、2.0、4.0、5.0、6.0 mL，分別置于10 mL容量瓶中，用甲醇稀釋至刻度，搖勻，精密吸取10 μL，注入高效液相色譜儀中，按“2.1”項下色譜條件測定其峰面積，以進(jìn)樣質(zhì)量濃度(μg·mL-1)為橫坐標(biāo)(X)，峰面積(A)為縱坐標(biāo)(Y)，進(jìn)行線性回歸。歐前胡素在0.87～10.64 μg·mL-1范圍內(nèi)線性關(guān)系良好，回歸方程為Y=25.762X+0.181，r=0.9999。

2.6 精密度試驗 精密吸取歐前胡素對照品溶液10 μL，注入液相色譜儀中，連續(xù)進(jìn)樣6次，測得其峰面積并計算，歐前胡素峰面積的RSD為0.65%，結(jié)果表明儀器的精密度良好。

2.7 穩(wěn)定性試驗 精密吸取同一供試品(批號：WXCC1802)溶液10 μL，分別在0、2、4、6、10、18 h依次進(jìn)樣，測定其峰面積并計算，歐前胡素峰面積的RSD為0.70%，結(jié)果表明供試品溶液在18 h內(nèi)穩(wěn)定性良好。

2.8 重復(fù)性試驗 精密稱取同一批樣品(批號：WXCC1802)6份，照“2.3”項下制備，得供試品溶液，進(jìn)樣10 μL依法測定峰面積，歐前胡素含量為0.1339 mg·g-1，RSD為1.14%(n=6)，表明該方法重復(fù)性較好。

2.9 加樣回收率試驗 取已知含量的樣品(批號：WXCC1802)6份，各約0.5 g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，加入50 mL含歐前胡素(1.308 μg·mL-1)對照品溶液，按“2.3”項下方法，制備供試品液，進(jìn)樣10 μL，測定歐前胡素含量，計算回收率，結(jié)果歐前胡素平均回收率102.42%，RSD= 1.11%。結(jié)果見表1。

表1 歐前胡素加樣回收率試驗結(jié)果 (n=6)

2.10 含量測定 取不同批號的樣品，研細(xì)，約1 g，精密稱定，按“2.3”項下方法制備供試品溶液，分別吸取供試品溶液各10 μL，依法測定峰面積，計算含量。結(jié)果顯示3批傷風(fēng)停膠囊中歐前胡素的含量分別為0.1339 mg·g-1、0.1607 mg·g-1和0.3809 mg·g-1。

3 討論

3.1 測定波長的選擇 采用二極管陣列檢測器在波長190～400 nm對歐前胡素照品溶液進(jìn)行紫外掃描，其在248 nm和300 nm附近具有最大吸收峰，參考《中華人民共和國藥典》2015年版一部“白芷”項下歐前胡素的檢測波長[3]，故本實驗選用300 nm作為檢測波長。

3.2 洗脫系統(tǒng)的選擇 依據(jù)文獻(xiàn)方法[6-7]，本實驗比較了甲醇-0.1%磷酸溶液、甲醇-水溶液、乙腈-0.1%磷酸溶液作為流動相，實驗結(jié)果表明，采用乙腈-0.1%磷酸溶液為流動相，歐前胡素的分離效果較好，干擾成分少，分離度達(dá)到要求。

3.3 供試品制備方法的選擇 本實驗比較了不同溶劑(乙醇、70%乙醇、甲醇、70%甲醇)進(jìn)行超聲和加熱回流提取，結(jié)果顯示，采用70%甲醇超聲提取時，歐前胡素提取率高，且干擾少；同時考察了超聲提取30、40、50、60 min，試驗結(jié)果表明超聲提取40 min時，歐前胡素基本提取完全，故選擇超聲提取40 min。

3.4 含量測定結(jié)果的分析 3批傷風(fēng)停膠囊樣品含量測定結(jié)果表明，該制劑中歐前胡素的含量相差約3倍，其原因可能是不同批次原藥材的差異所致，因此生產(chǎn)廠家應(yīng)予以重視。

綜上所述，所建立的高效液相方法簡單易行，專屬性好，為提高傷風(fēng)停膠囊質(zhì)量控制提供科學(xué)依據(jù)。