馬 賽，安 峰*，劉振麗，張 璇，劉 博，張 慧

(1.河北北方學(xué)院附屬第一醫(yī)院口腔科，河北 張家口 075000；2.河北北方學(xué)院附屬第一醫(yī)院病理科，河北 張家口 075000)

涎腺黏液表皮樣癌(mucoepidermoid carcinoma，MEC)是口腔頜面外科常見的一類惡性腫瘤，在我國北方地區(qū)發(fā)病率在口腔頜面部惡性腫瘤中位居第二[1]。癌胚抗原相關(guān)細胞黏附分子 5(carcinoembryonic antigenrelated cell adhesion molecule 5，CEACAM 5)是一種存在于哺乳動物細胞表面和細胞膜上的跨膜糖蛋白。CEACAM 1、CEACAM 6等癌胚抗原家族成員均參與惡性腫瘤的發(fā)生、發(fā)展，其表達水平直接影響腫瘤的生物學(xué)行為[2]。增殖細胞核抗原(proliferating cell nuclear antigen，PCNA)能夠反映脫氧核糖核酸生成的情況，評價細胞增殖速度，故普遍認為PCNA可以用來評價細胞的增殖活性[3]。故本研究采用免疫組織化學(xué)鏈霉菌抗生物素-過氧化物酶連接(streptavidin-perosidase，SP)法檢測不同臨床病理特征涎腺MEC組織中CEACAM 5、PCNA的表達情況及其對臨床預(yù)后的影響，以期進一步提高臨床對涎腺MEC的認識。報告如下。

1 資料與方法

1.1一般資料 收集2004年5月—2015 年9月河北北方學(xué)院附屬第一醫(yī)院收治的涎腺MEC患者石蠟標本55例為MEC組，男性27例，女性28例，年齡15～80歲，中位年齡56歲。所有病例均有病理確診并臨床及隨訪資料完整。治療方式均為擴大切除原發(fā)灶手術(shù)，有頸淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移者行頸淋巴結(jié)清掃術(shù)；所有病例術(shù)前均未接受放療、化療及免疫治療等。病理標本均由2名資深病理科醫(yī)師分別按照WHO 2005年涎腺腫瘤組織分類法進行診斷確認。另選取與手術(shù)同期切取的涎腺多形性腺瘤(salivary pleomorphic adenoma，SPA)組織30例作為SPA組，癌旁正常涎腺組織30例作為對照組。SPA組男性13例，女性17例，年齡22～67歲，中位年齡55歲。對照組男性14例，女性16例，年齡20～73歲，中位年齡56 歲。 3組性別、年齡差異均無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)，具有可比性。

本研究經(jīng)醫(yī)院醫(yī)學(xué)倫理委員會批準通過。

1.2標本處理及檢測方法 所有石蠟標本均嚴格按照免疫組織化學(xué)SP法處理。鼠抗人CEACAM 5單克隆抗體購于PTG公司，鼠抗人PCNA單克隆抗體購自R&D公司，SP試劑盒及DAB顯色劑均購自福州邁新生物技術(shù)有限公司。

1.3結(jié)果判定 細胞質(zhì)內(nèi)或細胞膜上出現(xiàn)棕黃色顆粒為CEACAM 5表達陽性，細胞核內(nèi)出現(xiàn)黃色或棕色顆粒為PCNA表達陽性。參考相關(guān)文獻，并結(jié)合以往經(jīng)驗，本研究以細胞染色程度及染色細胞百分率來對標本做出評定[4-5]。染色程度：基本無著色為0分，著色淡為1分，著色適中為2分，著色深為3分；染色細胞百分率：無為0分，<25%為1分，25%～50%為2分，>50%為3分。染色程度得分與染色細胞百分率得分相乘：0～1分為陰性(-)，2～3分為弱陽性(+)，4～6分為陽性(++)，6分以上為強陽性(+++)，將陰性和弱陽性表達定義為陰性組，陽性和強陽性表達定義為陽性組。

1.4隨訪及預(yù)后 所有患者的隨訪時間均以術(shù)后第2天開始統(tǒng)計，患者出院時均被告知定期來醫(yī)院復(fù)查，以便記錄隨訪結(jié)果，對于未能按時復(fù)診的患者采取電話隨訪的方式了解患者情況。失訪患者的最后觀察時間按最后一次來院復(fù)查時間為準。本研究最后觀察日期為2019年6月。

1.5統(tǒng)計學(xué)方法 應(yīng)用SPSS 17.0統(tǒng)計軟件分析數(shù)據(jù)。計數(shù)資料比較采用χ2檢驗，相關(guān)性采用Spearmen檢驗，采用Kaplan-Meier分析并繪制生存曲線，應(yīng)用Log-rank檢驗差異性。P<0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié) 果

2.13組CEACAM 5與PCNA表達情況比較 在MEC組、SPA組及對照組中，CEACAM 5與PCNA分別呈棕黃色顆粒狀表達于細胞胞質(zhì)和細胞核中(圖1～6)。MEC組CEACAM 5、PCNA表達陽性率明顯高于SPA組和對照組，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.01)。見表1。

表1 3組CEACAM 5與PCNA表達陽性率比較Table 1 Comparison of the positive expression of CEACAM 5 and PCNA among three groups (例數(shù)，%)

*P值<0.05與MEC組比較(χ2檢驗)

圖1 CEACAM 5在MEC組織中的表達(SP ×200)

Figure 1 Expression of CEACAM 5 in mucoepidermoid carcinoma(SP ×200)

圖2 CEACAM 5在SPA組織中的表達(SP ×200)

Figure 2 Expression of CEACAM 5 in salivary pleomorphic adenoma(SP ×200)

圖3 CEACAM 5在正常涎腺組織中的表達(SP ×200)

Figure 3 Expression of CEACAM 5 in normal salivary gland(SP ×200)

圖4 PCNA在MEC組織中的表達(SP ×200)

Figure 4 Expression of PCNA in mucoepidermoid carcinoma(SP ×200)

圖5 PCNA在SPA組織中的表達(SP ×200)

Figure 5 Expression of PCNA in salivary pleomorphic adenoma(SP ×200)

圖6 PCNA在正常涎腺組織中的表達(SP ×200)

Figure 6 Expression of PCNA in normal salivary gland(SP ×200)

2.2不同臨床病理特征涎腺MEC組織中CEACAM 5與PCNA的表達情況比較 病理分級Ⅲ級涎腺MEC組織中CEACAM 5、PCNA表達陽性率均明顯高于病理分級Ⅰ+Ⅱ級，TNM 分期Ⅲ+Ⅳ期涎腺MEC組織中CEACAM 5、PCNA表達陽性率均明顯高于TNM 分期Ⅰ+Ⅱ期，有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移涎腺MEC組織中CEACAM 5、PCNA表達陽性率均明顯高于無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移者,差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.01)；不同性別、年齡、部位涎腺MEC組織中CEACAM 5、PCNA表達陽性率差異均無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)。見表2。

表2 不同臨床病理特征涎腺MEC中CEACAM 5、PCNA的表達情況比較Table 2 Comparison of CEACAM 5 and PCNA expression and clinicopathological characteritics in MEC of salivary glands (例數(shù)，%)

2.3涎腺MEC組織中CEACAM 5和PCNA表達的相關(guān)性 涎腺MEC組織中CEACAM 5和PCNA的表達呈正相關(guān)(P<0.05)。見表3。

表3 在涎腺MEC組織中CEACAM 5和PCNA 表達的相關(guān)性Table 3 Correlation of the expression of CEACAM 5 and PCNA in mucoepidermoid carcinoma of salivary glands (n=55,例數(shù))

2.4涎腺MEC組織中CEACAM 5、PCNA的表達對臨床預(yù)后的影響 55例涎腺MEC患者隨訪時間為42～121個月，平均隨訪時間79個月，失訪9例，其中因MEC因素死亡14例，死于其他原因3例。所有隨訪患者的病理標本中CEACAM 5、PCNA表達陽性者術(shù)后的平均生存時間分別為(78.921±3.090)個月、(78.762±3.239)個月，中位生存時間分別為(81.000±5.552)個月、(77.000±6.422)個月，CEACAM 5、PCNA表達陰性者術(shù)后的平均生存時間分別為(94.773±1.813)個月、(94.391±1.801)個月，中位生存時間為(95.000±1.868)個月、(95.000±2.377)個月，CEACAM 5與PCNA表達陰性者的生存時間均明顯長于表達陽性者(P<0.05)。見圖7，8。

圖7 CEACAM 5表達陽性/陰性組生存曲線

Figure 7 The survival curve of the positive/negative expression groups of CEACAM 5

圖8 PCNA表達陽性/陰性組生存曲線

Figure 8 The survival curve of the positive/negative expression groups of PCNA

3 討 論

CEACAM 5基因又稱為CD66e，其表達產(chǎn)物為CEACAM 5蛋白。CEACAM 5蛋白是一種黏附在細胞膜表面的跨膜糖蛋白分子。在正常組織內(nèi)，細胞間黏附分子表達水平的改變可使細胞與細胞之間的緊密連接關(guān)系發(fā)生變化，而在惡性腫瘤組織內(nèi)這種變化通過其抗失巢凋亡的功能影響著惡性腫瘤的分化和侵襲[6]。在胃腸、胰腺等部位惡性腫瘤的研究中發(fā)現(xiàn)，CEACAM 5參與了多種惡性腫瘤的惡性化進程，腫瘤組織中CEACAM 5的表達水平與患者的生存時間密切相關(guān)[7-9]；另外，CEACAM 5在腫瘤細胞內(nèi)表達于細胞膜時對良、惡性腫瘤的鑒別意義更大，而當CEACAM 5表達于細胞質(zhì)內(nèi)時對腫瘤的浸潤和轉(zhuǎn)移有較強的指向作用。為了了解CEACAM 5在涎腺MEC的診斷與預(yù)后評估方面是否也能發(fā)揮作用，本研究檢測了CEACAM 5在涎腺MEC組織中的表達情況，結(jié)果證實涎腺MEC組織中CEACAM 5的表達水平明顯高于SPA組和對照組，其表達水平高標志著腫瘤的惡性程度高、浸潤性強、轉(zhuǎn)移的潛能強。通過分析CEACAM 5蛋白的表達情況與患者生存時間的關(guān)系，證實了CEACAM 5蛋白低表達患者的預(yù)后明顯好于高表達患者。說明在涎腺MEC組織中CEACAM 5基因同樣發(fā)揮著促癌基因的作用。

惡性腫瘤的增殖活性能夠反映其惡性程度，故細胞的增殖活性評估是臨床對惡性腫瘤組織學(xué)分級的重要依據(jù)。PCNA是一種只存在于增殖期細胞內(nèi)的多肽，PCNA的表達水平可以反映細胞增殖能力和所處的細胞周期。因此，臨床病理學(xué)中把檢測PCNA的表達水平作為評價惡性腫瘤惡性程度和增殖潛能的重要手段[10-13]。本研究檢測了PCNA在涎腺MEC組織中的表達情況，結(jié)果證實涎腺MEC組織中PCNA的表達水平明顯高于SPA組和對照組，其表達水平與MEC的惡性程度、浸潤性、轉(zhuǎn)移潛能呈正比。已有研究顯示，PCNA在卵巢癌癌、肺癌、骨肉瘤等腫瘤組織內(nèi)的表達水平越高，患者的臨床預(yù)后越差，生存時間越短[14-15]。本研究分析了PCNA表達與涎腺MEC患者生存時間的關(guān)系，研究結(jié)果與以往結(jié)果一致。通過分析CEACAM 5與PCNA表達的相關(guān)性發(fā)現(xiàn)，在涎腺MEC中CEACAM 5與PCNA的表達呈正相關(guān)，對腫瘤的增殖起到協(xié)同作用，說明調(diào)節(jié)細胞增殖是CEACAM 5影響涎腺MEC生物學(xué)行為的方式之一。

綜上所述，涎腺MEC組織中CEACAM 5、PCNA高表達預(yù)示腫瘤惡性程度高、侵襲性強、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移率高、預(yù)后差。進一步研究CEACAM 5與PCNA在涎腺MEC組織中發(fā)揮作用的具體機制及方式，有望為涎腺MEC的治療、預(yù)防其轉(zhuǎn)移及改善預(yù)后提供可靠的基因靶位，為腫瘤的精準化治療提供科學(xué)依據(jù)。