周美蘭 許 景 闞永軍 趙 立 胡 娟,3*

1.福建省中醫(yī)藥研究院，福建 福州 350003；2. 福建省宏盛閩侯酒業(yè)有限公司，福建 福州 350108；3. 福建中醫(yī)藥大學(xué)附屬第二人民醫(yī)院，福建 福州 350003

青紅酒，是以福建獨(dú)有的古田紅曲做為糖化發(fā)酵劑，選用上好的糯米，配以秘制藥白曲，精釀而成，色呈琥珀，口感柔順綿長(zhǎng)。青紅酒，被譽(yù)為閩派黃酒的正宗，含有豐富的葡萄糖、糊精、氨基酸、維生素和多種酯類(lèi)物組成；酒精度為13%左右，刺激性小，適量常飲，有促進(jìn)食欲、舒筋活絡(luò)、生津補(bǔ)血、調(diào)養(yǎng)身體、解除疲乏的功效，是一種老少皆宜的飲用酒。

立足于福建紅曲和道地藥材綜合利用，以中華老字號(hào)企業(yè)的百年釀造經(jīng)驗(yàn)，采用閉合式生產(chǎn)模式。以黃精等藥食同源中藥為原料，選用道地多花黃精，有機(jī)圓糯米及古田紅曲、秘制藥白曲，由國(guó)家級(jí)高級(jí)釀酒師、中醫(yī)藥專(zhuān)家組成的團(tuán)隊(duì)精心配方研制。在保留傳統(tǒng)釀造工藝基礎(chǔ)上，優(yōu)化本產(chǎn)品工藝，萃取原料之精華發(fā)酵而成。酒色橙黃清亮，酒味醇厚，香氣雅致，口感柔和甘甜，酒與黃精完美融合，有補(bǔ)氣養(yǎng)陰、健脾、潤(rùn)肺，益腎之功效。產(chǎn)品上市獲得消費(fèi)者贊譽(yù)。青紅酒樣品圖片見(jiàn)圖1。

糖類(lèi)是黃精化學(xué)組成中含量最多的重要活性部分，黃精多糖含量最大，約占11.74%；黃酮具有較高的藥用價(jià)值，并且為黃精屬植物的活性成分之一[1]。多糖是一類(lèi)非特異性免疫增強(qiáng)劑，而且有降血糖、降血脂、降血清過(guò)氧化脂質(zhì)和降低膽固醇濃度、抗血凝等作用[2-4]；黃酮具有消除疲勞、降血脂、降血糖、保護(hù)血管、防動(dòng)脈粥樣硬化、擴(kuò)張毛細(xì)血管、抗衰老和抗菌作用、活化大腦細(xì)胞和其他臟器細(xì)胞的功能等多種功效[5]。

本文采用醇沉提取酒中多糖、以D-葡萄糖為對(duì)照品，苯酚一硫酸顯色，490 nm波長(zhǎng)處測(cè)定黃精青紅酒中粗多糖含量[6]；采用聚酰胺層析法提取酒中黃酮[7]，以蘆丁為對(duì)照品，360nm波長(zhǎng)下測(cè)定吸光度，計(jì)算總黃酮含量。為產(chǎn)品配方及工藝的質(zhì)量控制奠定基礎(chǔ)。

1 儀器與材料

1.1 儀器 紫外分光光度計(jì)(上海美譜達(dá)儀器有限公司，型號(hào)：UV-3200)；水浴鍋(上海精宏實(shí)驗(yàn)設(shè)備有限公司，型號(hào)：DK420S)；離心機(jī)(湖南液儀實(shí)驗(yàn)室YI儀器開(kāi)發(fā)有限公司，型號(hào)：L-530低速離心機(jī))；電子天平(梅特勒-特利多，型號(hào)：AE240S)

1.2 材料與試劑 無(wú)水乙醇(西隴化工有限公司，批號(hào)16010902)；苯酚(國(guó)藥，20150716)；D-無(wú)水葡萄糖(成都曼思特生物科技有限公司，MUST-11020603)。聚酰胺粉(國(guó)藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司，批號(hào)20150924，規(guī)格：100-200目500 g)；蘆丁(成都曼思特生物科技有限公司,規(guī)格：對(duì)照品 A0103-20 mg)；乙醇(西隴化工有限公司，批號(hào)16010902，規(guī)格：AR500 mL)；甲醇(國(guó)藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司，批號(hào)20150824，規(guī)格：AR5 L)；苯(西隴化工有限公司，批號(hào)1601131，規(guī)格：AR500 mL)。

供試品：1號(hào)黃精青紅酒，將黃精浸泡于青紅酒中；2號(hào)黃精青紅酒，將黃精與紅曲米一起投料發(fā)酵。同一工藝，同一批次取3個(gè)樣品。

2 方法與結(jié)果

2.1 供試品中粗多糖測(cè)定

2.1.1 試劑 配制取無(wú)水葡萄糖對(duì)照品2.57 mg于25 mL量瓶中，加水溶解并稀釋至刻度，得濃度為0.103 mg/mL的對(duì)照品溶液。取苯酚2.50 g加50 ml純水溶解即得5%的苯酚溶液。

2.1.2 吸收曲線(xiàn)的繪制 對(duì)濃度10 μg/mL葡萄糖對(duì)照品溶液，在200-800 nm波長(zhǎng)范圍進(jìn)行全波長(zhǎng)掃描。以波長(zhǎng)為橫坐標(biāo)，以吸光度為縱坐標(biāo)作圖，繪制出曲線(xiàn)，此曲線(xiàn)即為葡萄糖的吸收光譜曲線(xiàn)。葡萄糖最大吸收波長(zhǎng)為490 nm，如圖2所示。

2.1.3 標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)的繪制 精密量取對(duì)照品溶液0.3 mL、0.4 mL、0.6 mL、0.8 mL、1.0 mL，分別置15 mL具塞試管中，各加水補(bǔ)至2.0 mL，精密加入5%苯酚溶液l.0 mL，搖勻，再精密加濃硫酸5.0 mL，搖勻，置沸水浴中加熱2 min，取出，流水冷卻到室溫，以相應(yīng)試劑為空白，采用紫外-可見(jiàn)分光光度法，在490 nm的波長(zhǎng)處測(cè)定吸光度，結(jié)果見(jiàn)表1。以吸光度為縱坐標(biāo)，濃度為橫坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)，回歸方程為y=53.32x-0.021，r=0.9984。

表1 無(wú)水葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)溶液濃度和吸光度的關(guān)系

2.1.4 黃精青紅酒中粗多糖測(cè)定 取10 mL受試樣品加無(wú)水乙醇35 ml，置于4℃冰箱中靜置4 h，離心(4000r/ 10min)，倒去上清液，收集沉淀，加純水5 mL溶解，加無(wú)水乙醇20 mL，反復(fù)溶解沉淀3次。收集沉淀，將沉淀用水溶于200 mL容量瓶中，搖勻，即得供試溶液。

精密量取黃精青紅酒供試溶液0.5 mL，加水補(bǔ)至2 mL，置于具塞試管中，按標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)的制備項(xiàng)下的方法，自“2.1.1項(xiàng)下，精密加入5%苯酚試液1.0 mL”起，依照測(cè)定吸光度，以葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)計(jì)算試樣中總多糖的含量。結(jié)果見(jiàn)表2。

表2 黃精青紅酒中粗多糖測(cè)定結(jié)果

2.2 供試品中總黃酮測(cè)定

2.2.1 對(duì)照品溶液配制 稱(chēng)取2.52 mg蘆丁，加甲醇溶解并定容至50 mL，即得50.4 μg/mL的蘆丁標(biāo)準(zhǔn)溶液。

2.2.2 吸收曲線(xiàn)的繪制 對(duì)濃度10 μg/mL蘆丁對(duì)照品溶液，在200～800 nm波長(zhǎng)范圍進(jìn)行全波長(zhǎng)掃描。以波長(zhǎng)為橫坐標(biāo)，吸光度為縱坐標(biāo)作圖，繪制出曲線(xiàn)，此曲線(xiàn)即為蘆丁的吸收光譜曲線(xiàn)。蘆丁在紫外光區(qū)最大吸收波長(zhǎng)為360 nm，如圖3所示。

2.2.3 標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)的繪制 吸取0、1.5、2.0、3.0、4.0、4.5 mL蘆丁標(biāo)準(zhǔn)溶液于10 mL容量瓶中，加甲醇定容至刻度，于360 nm測(cè)定吸光度值,見(jiàn)表3。以濃度為橫坐標(biāo)，以吸光度為縱坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)，回歸方程為：y= 0.0328x+ 0.0171，r=0.9983。

2.2.4 黃精青紅酒中總黃酮測(cè)定量取試樣50 mL各3份，置于蒸發(fā)皿中70℃濃縮至約10 mL，轉(zhuǎn)移至25 mL容量瓶，加無(wú)水乙醇定容至刻度，搖勻后，超聲提取20 min，離心(4000 r/min,10 min)，吸取上清液2.0 mL，于蒸發(fā)皿中，加1 g聚酰胺粉吸附，于水浴上揮去乙醇，然后轉(zhuǎn)入層析柱(1 cm×25 cm)。先用20 mL苯洗，棄去苯液，然后用甲醇洗脫黃酮，定容至25 mL。取上述溶液離心，于波長(zhǎng)360 nm測(cè)定吸光度值。依照測(cè)定吸光度，以蘆丁標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)計(jì)算試樣中總黃酮的含量。結(jié)果見(jiàn)表4。

表3 蘆丁標(biāo)準(zhǔn)溶液濃度和吸光度的關(guān)系

表4 黃精青紅酒中總黃酮測(cè)定結(jié)果

3 討論

由表3可以看出，兩種不同工藝制備的黃精青紅酒，1號(hào)供試品浸泡黃精酒每100 mL粗多糖平均含量為14.89 mg，2號(hào)供試品發(fā)酵黃精酒每100 mL粗多糖平均含量為76.28 mg，是1號(hào)樣品的5.1倍；由表4可以看出，1號(hào)供試品浸泡黃精酒每100 mL總黃酮平均含量為16.28 mg，2號(hào)供試品發(fā)酵黃精酒每100 mL總黃酮平均含量為72.16 mg，是1號(hào)樣品的4.4倍。

發(fā)酵黃精酒中的多糖和黃酮均高于浸泡黃精酒，同時(shí)發(fā)酵黃精酒的口感和色澤均優(yōu)于浸泡黃精酒。因此無(wú)論是從功效成分，還是從外觀和味道，發(fā)酵黃精酒工藝均優(yōu)于浸泡黃精酒工藝。

4 結(jié)論

本文采用醇沉法提取多糖簡(jiǎn)單易行，聚酰胺柱層析法已廣泛用于黃酮類(lèi)成分分離純化，以提高提取物黃酮成分的含量；兩種提取分離方法的應(yīng)用，可避免酒干擾色對(duì)測(cè)定的影響。通過(guò)測(cè)定青紅酒中粗多糖和總黃酮等功效成分含量，有利于對(duì)產(chǎn)品配方及工藝進(jìn)行質(zhì)量控制。