譚翔勻 周 和 王世俊 馮 華 王 奧

1.遵義市食品藥品檢驗(yàn)所，貴州 遵義 563002；2.遵義市產(chǎn)品質(zhì)量檢驗(yàn)檢測(cè)院，貴州 遵義 563002

盆炎凈膠囊由忍冬藤、蒲公英、狗脊、赤芍、車(chē)前草等八味中藥材組成[1-2]，具有清熱利濕、和血通絡(luò)、調(diào)經(jīng)止帶之功效，用于濕熱下注、白帶過(guò)多等癥狀[2]。作為中藥復(fù)方制劑具有藥味較多，現(xiàn)有標(biāo)準(zhǔn)對(duì)忍冬藤藥材只做忍冬藤對(duì)照藥材定性鑒別。因此，筆者對(duì)忍冬藤藥材中馬錢(qián)苷成分進(jìn)行定性與定量分析研究，并進(jìn)行方法學(xué)考察，建立質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)，可作為盆炎凈膠囊中忍冬藤藥材質(zhì)量?jī)?nèi)控標(biāo)準(zhǔn)。

1 儀器與材料

1.1 儀器 美國(guó)Agilent LC-1260高效液相色譜議(包括四元泵，二極管矩陣檢測(cè)器，柱溫箱，自動(dòng)進(jìn)樣器，Agilent工作站和處理軟件)，WatersT3 C18(250 mm×4.6 mm，5 μm)柱；AB204-S型梅特勒電子天平(北京中恒日鑫科技有限公司)，KQ-500DV型數(shù)控超聲波清洗機(jī)(昆山市超聲儀器有限公司)。

1.2 材料 忍冬藤對(duì)照藥材、馬錢(qián)苷對(duì)照品(批號(hào)：111640-201808) 購(gòu)于中國(guó)食品藥品檢定研究院，乙睛為色譜純，水為娃娃哈純凈水，其他試劑均為分析純，3批盆炎凈膠囊(批號(hào)：170401、170402、170403)遵義華衛(wèi)制藥提供，陰性樣品自制。

2 方法與結(jié)果

2.1 薄層鑒別[3-4]取本品粉末約2.0 g，加乙醇15 mL，超聲40 min，濾過(guò)，濾液濃縮近1 mL，作為供試品溶液。另取忍冬藤對(duì)照藥材1 g，同法制成對(duì)照藥材溶液，再取馬錢(qián)苷對(duì)照品，加乙醇制成每1 mL含0.3 mg的溶液，作為對(duì)照品溶液。按照薄層色譜法2015年版《中國(guó)藥典》四部通則0502試驗(yàn)，吸取上述三種溶液各10 μL，分別點(diǎn)于同一硅膠G板上，以乙酸乙酯-冰醋酸-水(12∶3∶5)上層溶液為展開(kāi)劑，展開(kāi)，取出，晾干，噴以10%硫酸乙醇溶液，加熱至斑點(diǎn)清晰，供試品色譜中，在與對(duì)照藥材和對(duì)照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點(diǎn)。結(jié)果表明，分離度好，斑點(diǎn)顯色清晰，而陰性無(wú)干擾。如圖1所示。

2.2 含量測(cè)定

2.2.1 色譜條件[5-9]WatersT3C18(4.6 mm×250 mm，5 μm)為色譜柱，乙睛-0.5%醋酸水溶液(13∶87)為流動(dòng)相，流速1.0 mL/min，檢測(cè)波長(zhǎng)為235 nm，柱溫25 ℃。進(jìn)樣量10 μL，相連兩峰分離度為達(dá)4.4，理論塔板數(shù)按馬錢(qián)苷計(jì)，應(yīng)不低于3000。

2.2.2 對(duì)照品溶液的制備 精密稱(chēng)取馬錢(qián)苷照品適量，加甲醇溶解制成馬錢(qián)苷18.28 μg/mL對(duì)照品溶液，搖勻，用0.45 μm的微孔濾膜濾過(guò)，即得。

2.2.3 供試品溶液制備 取內(nèi)容物約2.0 g(批號(hào)：170401)，精密稱(chēng)定，置具塞錐形瓶中，精密加甲醇25 mL，超聲處理50 min，取出，放冷，用甲醇補(bǔ)足重量，濾過(guò)，取續(xù)濾液，即得。

2.2.4 陰性溶液制備 取缺忍冬藤藥材處方下自制陰性樣品，按“2.2.3”項(xiàng)下供試品溶液制備方法制備成陰性對(duì)照溶液。精密吸取10 μL注入高效液相色譜儀，按照色譜條件下測(cè)定，結(jié)果表明陰性對(duì)照的色譜圖在馬錢(qián)苷相應(yīng)的保留時(shí)間無(wú)干擾峰，詳見(jiàn)色譜圖2、圖3、圖4。

2.2.5 線性關(guān)系的考察 精密吸取對(duì)照品混合溶液2、6、10、14、18 μL，注入高效液相色譜儀，測(cè)定峰面積，以馬錢(qián)苷濃度(μg)為橫坐標(biāo)，峰面積積分值(A)為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，計(jì)算回歸方程，回歸方程為：Y=26.864X+0.9979，R=0.9998，在3.66～32.90 mg/mL范圍內(nèi)呈良好的線性關(guān)系。

2.2.6 精密度試驗(yàn) 精密吸對(duì)照品溶液10 μL，注入高效液相色譜儀中，連續(xù)測(cè)定6次，記錄峰面積，結(jié)果馬錢(qián)苷峰面積的RSD為0.16%，結(jié)果表明儀器精密度良好。

2.2.7 穩(wěn)定性試驗(yàn) 分別吸取(批號(hào)：170401)同一供試品溶液于0、2、4、8、12 h精密吸(批號(hào)：170401)樣品制備的供試品溶液10 μL進(jìn)樣，測(cè)得峰面積，RSD均值為1.10%，表明在12 h內(nèi)穩(wěn)定。

2.2.8 重復(fù)性試驗(yàn) 取同一批樣品(批號(hào)：170401)6份，精密稱(chēng)定，按照“2.2.3”項(xiàng)下方法制備成供試品溶液。測(cè)定峰面積，計(jì)算馬錢(qián)苷平均含量為350.27 μg/g，RSD為1.16%，結(jié)果表明重復(fù)性好。

2.2.9 加樣回收試驗(yàn) 取已知含量(含馬錢(qián)苷350.27 μg/g)的樣品6份，每份約1.0 g，精密稱(chēng)定，精密馬錢(qián)苷對(duì)照品適量，按“2.2.3”項(xiàng)下的方法操作，計(jì)算回收率,馬錢(qián)苷平均回收率為100.08%，RSD為0.22%，詳見(jiàn)表1。

2.2.10 含量測(cè)定 3批樣品結(jié)果詳見(jiàn)表2。

表1 加樣回收試驗(yàn)結(jié)果

表2 盆炎凈膠囊3批樣品含量測(cè)定結(jié)果 (n=3)

3 討論

通過(guò)盆炎凈膠囊中忍冬藤的研究，筆者增加忍冬藤藥材中馬錢(qián)苷作為對(duì)照，進(jìn)行定性與定量分析。在TLC中以乙酸乙酯-冰醋酸-水(12∶3∶5)上層溶液為展開(kāi)劑，展開(kāi)效果好，與各斑點(diǎn)均能有效分離，斑點(diǎn)顯色清晰，且陰性無(wú)干擾；采用HPLC法測(cè)定處方中忍冬藤藥材有效成分馬錢(qián)苷，供試品色譜中，在與對(duì)照品色譜相應(yīng)保留時(shí)間陰性無(wú)干擾。

對(duì)甲醇-水、甲醇-醋酸溶液、乙睛—水、乙睛-醋酸溶液4個(gè)系統(tǒng)的流動(dòng)相考察結(jié)果表明，乙睛-0.5%醋酸溶液梯度洗脫效果最好。同時(shí)采用DAD檢測(cè)器進(jìn)行紫外區(qū)全波長(zhǎng)掃描，在2235 nm、325 nm波長(zhǎng)下有最大吸收，根據(jù)所測(cè)目標(biāo)峰在235 nm波長(zhǎng)下檢測(cè)，分離好，峰面積較大，因此選擇235 nm為本實(shí)驗(yàn)的檢測(cè)波長(zhǎng)。

綜上所述，TLC法以乙酸乙酯-冰醋酸-水(12∶3∶5)上層溶液為展開(kāi)劑，各斑點(diǎn)能有效的分離，斑點(diǎn)顯色清晰，陰性無(wú)干擾；HPLC法測(cè)定處方中有效成分馬錢(qián)苷的含量，以乙睛-0.5%醋酸溶液(13∶87)為流動(dòng)相，其馬錢(qián)苷分離效果好，干擾成分少，基線平穩(wěn)；樣品處理簡(jiǎn)單，分析速度快，數(shù)據(jù)準(zhǔn)確，結(jié)果可靠，可作為盆炎凈膠囊中忍冬藤藥材質(zhì)量?jī)?nèi)控提供依據(jù)。