王 晟，劉興態(tài)，秦 軍，李樹璽

(三峽大學(xué)第三臨床醫(yī)學(xué)院·國藥葛洲壩中心醫(yī)院檢驗(yàn)科，湖北 宜昌 443002)

新型冠狀病毒肺炎(簡稱新冠肺炎)是2019年12月在武漢首先發(fā)現(xiàn)的一種新傳染病[1]，經(jīng)實(shí)驗(yàn)室基因檢測和病毒分離確定為新型冠狀病毒[2](severe acute respiratory syndrome coronavirus 2，SARS-CoV-2)[3]感染所致。主要經(jīng)呼吸道飛沫傳播和接觸傳播，人群普遍易感[4]，全球已有100多個(gè)國家和地區(qū)發(fā)現(xiàn)確診病例。目前認(rèn)為，新冠肺炎傳染源主要是新冠肺炎患者，且隱性感染者(即無癥狀感染者)也可能成為傳染源[5]。為了解新冠肺炎病例密切接觸者感染情況，同時(shí)避免疫情進(jìn)一步擴(kuò)散，特對(duì)本地區(qū)738例醫(yī)學(xué)觀察人員進(jìn)行了血常規(guī)和鼻咽拭子的新型冠狀病毒核酸檢測(簡稱核酸檢測)，現(xiàn)將結(jié)果報(bào)告如下。

1 資料與方法

1.1 資料來源 選取2020年2月11—23日某定點(diǎn)隔離酒店內(nèi)738例新冠肺炎病例密切接觸且無明顯臨床癥狀的醫(yī)學(xué)觀察人員，以新冠肺炎病例家庭成員為主，其中男性376例，女性362例。年齡為7個(gè)月～91歲。

1.2 儀器與試劑 核酸檢測使用中山大學(xué)達(dá)安基因的Smart32型核酸提取儀和配套的擴(kuò)增試劑，以及杭州安杰思醫(yī)學(xué)科技股份有限公司的AFD4800型實(shí)時(shí)熒光定量分析儀；血常規(guī)檢測使用希森美康XN-1000型全自動(dòng)血液分析儀及原廠試劑、校準(zhǔn)品和質(zhì)控品。

1.3 方法

1.3.1 采樣方法 醫(yī)學(xué)觀察人員均為單間隔離，于酒店獨(dú)立房間內(nèi)采集觀察人員血常規(guī)及鼻咽拭子標(biāo)本。鼻咽拭子采樣時(shí)，采樣人員一手輕扶被采集人員的頭部，一手執(zhí)拭子，拭子貼鼻孔進(jìn)入，沿下鼻道的底部向后緩緩深入，由于鼻道呈弧形，不可用力過猛，以免發(fā)生外傷出血。待拭子頂端到達(dá)鼻咽腔后壁時(shí)，輕輕旋轉(zhuǎn)一周(如遇反射性咳嗽，應(yīng)停留片刻)，然后緩緩取出拭子，將拭子頭浸入裝有2 mL裂解液(與核酸提取試劑盒中裂解液相同)的標(biāo)本采集管或含RNA酶抑制劑的細(xì)胞保存液中，插入拭子后在靠近頂端處折斷無菌拭子桿，旋緊管蓋并用封口膜封閉[6-7]。

1.3.2 檢測方法 鼻咽拭子標(biāo)本進(jìn)行核酸檢測，嚴(yán)格依照儀器、試劑說明書要求進(jìn)行；血常規(guī)使用自動(dòng)進(jìn)樣模式進(jìn)行檢測。

1.3.3 核酸檢測結(jié)果判讀 (1)當(dāng)ORF1ab和N基因同時(shí)呈陽性時(shí)，或者若僅ORF1ab或N基因其中之一的檢測結(jié)果呈陽性時(shí)，需重新提取原標(biāo)本的核酸進(jìn)行復(fù)查，復(fù)查后ORF1ab或N基因仍顯示為陽性時(shí)[8]，則可判定為陽性。(2)當(dāng)出現(xiàn)以下兩種情況時(shí)為“可疑”：①2個(gè)位點(diǎn)的Ct值位于陽性Ct值和陰性Ct值之間或其中1個(gè)位點(diǎn)判讀為陽性，另1個(gè)位點(diǎn)的Ct值位于陽性Ct值和陰性Ct值之間(具體請(qǐng)參考試劑盒說明書)；②2個(gè)位點(diǎn)中的1個(gè)位點(diǎn)為陰性，另1個(gè)位點(diǎn)的Ct值位于陽性Ct值和陰性Ct值之間。對(duì)于“可疑”陽性結(jié)果，建議重新對(duì)標(biāo)本進(jìn)行核酸提取，并與該標(biāo)本前一次提取的核酸同時(shí)擴(kuò)增檢測，結(jié)合兩次檢測，2個(gè)位點(diǎn)可判斷為“陽性”則可報(bào)告“陽性”，否則應(yīng)報(bào)告“可疑”[7]。(3)當(dāng)兩個(gè)位點(diǎn)擴(kuò)增結(jié)果無反應(yīng)，可報(bào)告“陰性”，并對(duì)結(jié)果進(jìn)行解釋，此情況可能是病毒載量低于陽性限，應(yīng)結(jié)合臨床分析[7]。

1.3.4 復(fù)檢要求 核酸檢測結(jié)果可疑者需隔日重新采樣復(fù)測。

1.3.5 分析方法 對(duì)所有血常規(guī)和核酸檢測結(jié)果進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，計(jì)算無癥狀感染者比例及血常規(guī)結(jié)果符合新冠肺炎發(fā)病早期特點(diǎn)占比。

2 結(jié)果

2.1 核酸檢測結(jié)果 738例新冠肺炎病例密切接觸醫(yī)學(xué)觀察者核酸檢測陽性70例(9.49%)，陰性664例(89.97%)，可疑4例(0.54%)。各年齡段陽性率為7個(gè)月～6歲12.50%(2/16)，7～14歲10.34%(3/29)，15～40歲9.00%(19/211)，41～60歲8.09%(25/309)，>61歲12.14%(21/173)。陽性結(jié)果來源于23個(gè)家庭，家庭內(nèi)核酸檢測陽性者1～6例，中位數(shù)為3例，主要呈家庭聚集性分布。核酸檢測結(jié)果見表1。

表1 醫(yī)學(xué)觀察者首次核酸檢測及可疑者隔日復(fù)測結(jié)果

Table 1 Results of the initial nucleic acid test of medical observed persons and the retest of suspected persons the next day

結(jié)果首次檢測例數(shù)比例(%)可疑者隔日檢測例數(shù)比例(%)陽性527.05 1864.29可疑283.79414.28陰性65889.16621.43合計(jì)738100.00 28100.00

2.2 血常規(guī)檢測結(jié)果 738例醫(yī)學(xué)觀察者血常規(guī)檢測，白細(xì)胞計(jì)數(shù)減少者(<3.5×109/L)2例，淋巴細(xì)胞計(jì)數(shù)減少者(<1.1×109/L)21例，核酸檢測結(jié)果陽性及可疑醫(yī)學(xué)觀察者血標(biāo)本白細(xì)胞計(jì)數(shù)均正常，僅2例淋巴細(xì)胞計(jì)數(shù)減少。無癥狀感染者血常規(guī)結(jié)果符合新冠肺炎發(fā)病早期特點(diǎn)者僅占2.70%(2/74，包含4例仍可疑者)。

2.3 發(fā)病情況 70例核酸檢測結(jié)果陽性者，42.86%(30例)于14 d觀察期內(nèi)出現(xiàn)發(fā)熱、咳嗽、氣促、呼吸困難等癥狀，被列為確診病例轉(zhuǎn)至定點(diǎn)醫(yī)院。后續(xù)對(duì)余下40例送至指定隔離點(diǎn)繼續(xù)觀察，超過14 d后有2例發(fā)病，余下38例全部轉(zhuǎn)陰。664例核酸檢測陰性者，1.51%(10例)于14 d觀察期內(nèi)出現(xiàn)癥狀，并被臨床確診(未在本院再次進(jìn)行核酸檢測)，余下陰性觀察者至14 d期滿均無發(fā)病情況，且第二次核酸檢測也均為陰性。4例可疑醫(yī)學(xué)觀察者平穩(wěn)度過14 d觀察期，隨后送至指定隔離點(diǎn)繼續(xù)觀察，后續(xù)全部轉(zhuǎn)陰。14天內(nèi)發(fā)病率為5.42%(40/738)，繼續(xù)觀察期發(fā)病率為4.55%(2/44)，整個(gè)集中隔離期發(fā)病率為5.69%(42/738)。

3 討論

新冠肺炎已證實(shí)可以在人際間傳播[9]，且人群普遍易感，導(dǎo)致目前感染病例仍在增長，已出現(xiàn)家庭聚集性發(fā)病[10]，并形成全球蔓延態(tài)勢。世界衛(wèi)生組織于2020年1月31日宣布新冠肺炎疫情暴發(fā)構(gòu)成“國際關(guān)注的突發(fā)公共衛(wèi)生事件(public health emergency of international concern，PHEIC)”[11-12]。當(dāng)前研究表明，無癥狀新型冠狀病毒感染者可能造成疾病傳播[13]，故早期識(shí)別對(duì)控制疾病的流行與傳播極為重要[14]。

對(duì)738例以新冠肺炎病例家庭成員為主的無癥狀醫(yī)學(xué)觀察人員進(jìn)行核酸檢測篩查，陽性率高達(dá)9.49%，考慮到實(shí)際感染患者的核酸檢測不一定為陽性，本研究中核酸檢測呈陰性的受檢者在觀察期內(nèi)也有發(fā)病的情況，實(shí)際感染的比例應(yīng)該更高。70例核酸檢測陽性但暫無癥狀者，45.71%在30 d內(nèi)轉(zhuǎn)化為確診病例，這些轉(zhuǎn)化病例在檢測核酸時(shí)病毒已侵入體內(nèi)，只是尚未引起全身免疫性反應(yīng)，但也可能具有一定的傳染性。因此，盡早發(fā)現(xiàn)無癥狀感染者有利于提前干預(yù)，避免或縮短病程，減輕癥狀，也有助于疫情防控[15]。

研究發(fā)現(xiàn)，部分新冠肺炎潛伏期>14 d[16]，故將14 d內(nèi)未發(fā)病的核酸檢測陽性和可疑醫(yī)學(xué)觀察者轉(zhuǎn)移至特定隔離點(diǎn)繼續(xù)觀察，后續(xù)確有發(fā)病的情況；其他觀察者在整個(gè)醫(yī)學(xué)觀察期均未發(fā)病，目前已全部轉(zhuǎn)陰并解除集中隔離(集中隔離時(shí)間最長者為27 d)。

各項(xiàng)規(guī)范、指南、專家共識(shí)明確指出，核酸檢測陰性，并不能排除被新型冠狀病毒感染的可能。本研究中有核酸檢測呈陰性的醫(yī)學(xué)觀察者在14 d觀察期內(nèi)出現(xiàn)臨床癥狀而被臨床確診的情況。而余下核酸檢測陰性醫(yī)學(xué)觀察者則平穩(wěn)度過了14 d的隔離觀察期，并在第二次核酸檢測中仍呈陰性，隨即解除定點(diǎn)隔離，并囑咐不適隨診(至截稿日尚未接到任何不適消息報(bào)告)。因此，依據(jù)本研究檢測結(jié)果，隔離14 d后核酸檢測仍呈陰性的密切接觸者基本可排除被新型冠狀病毒感染的可能。

為做好疫情的排查，國家衛(wèi)生健康委員會(huì)指出無癥狀感染者主要來源有：(1)新冠肺炎病例的密切接觸者；(2)聚集疫情調(diào)查中的主動(dòng)檢測；(3)新冠肺炎病例傳染源追蹤過程中發(fā)現(xiàn)暴露人群；(4)有新冠肺炎病例、持續(xù)傳播地區(qū)旅游史和居住史的人群。本研究僅以新冠肺炎病例的密切接觸者為研究對(duì)象，目前尚未涉及其他3種無癥狀感染者，后期根據(jù)情況再做相應(yīng)報(bào)道。