潘少霞，陳冬蓮，劉艷晨，章青英，陳曉英，劉首明

（廣東省清遠市中醫(yī)院檢驗中心，清遠511500）

糖化血紅蛋白（HemoglobinA1c，HbA1c）是臨床評價糖尿病患者長期血糖控制的常用生化指標[1-4]。已知，血紅蛋白病和地中海貧血等血液系統(tǒng)疾病對多種HbA1c檢測方法（免疫抑制比濁和親和層析法等）構成不同程度的干擾[5,6]。廣東省清遠市是血紅蛋白病和地中海貧血等血液系統(tǒng)疾病的高發(fā)地區(qū)，以Hb E、Hb G-Taipei、Hb Newyork及Hb J-Bangkok等β鏈上的異常血紅蛋白類型為主[7-9]。目前，本地區(qū)常見血紅蛋白變異體對IE-HPLC檢測HbA1c的干擾尚未明確，容易被臨床醫(yī)生和患者忽視。為此，廣東清遠中醫(yī)院開展本項檢測，旨在探討常見血紅蛋白變異體對IE-HPLC檢測HbA1c的干擾程度和干擾因素，為IE-HPLC檢測HbA1c提供明確的警告提示信息，確保HbA1c的實驗室檢查能準確可靠地服務于臨床。

1 資料與方法

1.1 一般資料 回顧性分析2017年1月-2019年6月廣東清遠市中醫(yī)院二型糖尿病患者行IEHPLC測定HbA1c的水平、已糖激酶法測定血漿葡萄糖的水平、毛細管電泳法分析血紅蛋白性質(zhì)和雙脫氧鏈終止法進行血紅蛋白基因測序的40例體檢者的診斷學資料。其中，性別：男20例，女20例；年齡26～67周歲，平均（52.86±5.34）周歲；疾病類型：2型糖尿病患者30例，妊娠期糖尿病10例。納入標準：具有完整病歷資料；IE-HPLC檢測HbA1c圖譜出現(xiàn)變異峰。排除標準：血液系統(tǒng)疾病患者；近期服用過保泰松及阿司匹林等具有骨髓抑制作用的藥物的人群。

1.2 方法 抽取受試者清晨空腹狀態(tài)下的肘靜脈血4 ml，置于生化分離管當中，以3000r/min轉(zhuǎn)速對血液標本進行5min的離心，靜置后分離血清，放置在-80℃血清儲存箱中保存，待檢。采用對離子交換高效液相色譜法（IE-HPLC）測定HbA1c的水平，儀器為全自動HbA1c分析儀（生產(chǎn)單位：美國伯樂公司，型號：BIO-RAD VAKIANTⅡ），糖化血紅蛋白AIC試劑盒購自美國伯樂生物科技有限公司；采用葡萄糖氧化酶法測定血清葡萄糖的水平，儀器為全自動生化分析儀（生產(chǎn)單位：貝克曼庫爾特商貿(mào)有限公司，型號：BECKMAN COULTER AU5800），試劑盒購自美康生物科技股份有限公司；采用毛細管電泳法分析血紅蛋白性質(zhì)，儀器為全自動毛細管蛋白電泳分析儀（生產(chǎn)單位：海倫娜生物科技公司，型號：V8），試劑盒購海倫娜生物科技公司；采用雙脫氧鏈終止法進行血紅蛋白基因測序，交廣州金域檢驗實驗室進行實驗。所有試驗操作嚴格按照試驗說明書及實驗室標準操作進行。

1.3 統(tǒng)計學方法 所有數(shù)據(jù)均經(jīng)SPSS 20.00統(tǒng)計學軟件進行統(tǒng)計學處理，采用描述性統(tǒng)計分析，實驗數(shù)據(jù)進行直線偏差百分比分析。

2 結果

2.1 表型結果 40例體檢者HbA1c測定結果與血糖檢測結果均出現(xiàn)明顯偏差，均超出IE-HPLC的定量分析范圍，詳見表1。檢測圖譜顯示：40例體檢者的檢測圖譜均出現(xiàn)變異峰；序號1、3及6體檢者，HbA和HbA1c出峰時間提前；序號4及7體檢者，HbA1c出峰時間滯后，變異峰分別占總面積53.74%、55.16%；序號8體檢者，HbA1c出現(xiàn)變異峰，占總面積92.34%，具體見表1。

表1 體檢者表型檢測結果

2.2 毛細管蛋白電泳結果 毛細管蛋白電泳結果顯示，40例體檢者均出現(xiàn)的異常血紅蛋白區(qū)帶。檢測圖譜顯示：序號1、3及6體檢者，HbA變異峰分別占總面積1.56%、1.08%和2.49%，HbA2變異峰分別占總面積5.01%、5.91%和7.91%，HbA1c變異峰分別占總面積1.04%、1.22%和2.07%；序號2及5體檢者，HbA變異峰分別占總面積40.76%和40.70%，HbA2變異峰分別占總面積2.66%和2.77%，HbA1c變異峰分別占總面積1.95%和2.35%；序號4及7體檢者，HbA變異峰分別占總面積70.18%和70.27%，HbA2變異峰分別占總面積3.59%和3.69%，HbA1c變異峰分別占總面積21.82%和27.25%；序號8體檢者，HbA變異峰占總面積50.38%，HbA2變異峰占總面積3.01%，HbA1c變異峰占總面積62.99%，具體見表2。

表2 毛細管蛋白電泳結果

2.3 基因測序結果 基因測序結果顯示，40例體檢者的血紅蛋白β鏈均發(fā)生突變基因，詳見表3。

3 討論

HbA1c是血清中的糖類與紅細胞中的血紅蛋白相結合化合物，其反應過程緩慢、持續(xù)且不可逆，能夠反映了紅細胞生命周期內(nèi)的平均血糖水平[10]。由于，血紅蛋白變異體廣泛出現(xiàn)在血紅蛋白病和地中海貧血等血液系統(tǒng)疾病，而正常血紅蛋白與異常血紅蛋白的理化性質(zhì)存在差異[11]。IEHPLC檢測HbA1c的工作原理決定了其有可能被血紅蛋白變異體干擾，導致HbA1c測定結果存在過大偏倚。若HbA1c測定結果存在過大偏倚會誤導臨床對疾病的評估和治療，不利于改善患者預后，甚至增加醫(yī)療不良事件的風險[12]。因此，了解本地區(qū)常見血紅蛋白變異體對IE-HPLC檢測HbA1c是否存在干擾及其干擾程度和干擾因素，有助于提高HbA1c的實驗室檢查的準確性。

表型結果顯示，本組40例體檢者HbA1c測定結果與血糖檢測結果均出現(xiàn)明顯偏差，均超出IEHPLC的定量分析范圍。毛細管蛋白電泳結果顯示,本組40例體檢者均出現(xiàn)的異常血紅蛋白區(qū)帶，其變異峰有不同的表達。提示，本組40例體檢者均存在血紅蛋白變異體,血紅蛋白變異體對IE-HPLC檢測HbA1c構成不同程度干擾?；驕y序結果進一步顯示，本組40例體檢者的血紅蛋白β鏈均發(fā)生突變基因，突變點位有GGC→GAC、GAG→AAG和GAA→GGA，血紅蛋白基因型有β41-42/βJBangkok、βN/βJ-Bangkok、βN/βE和βN/βG-Taipe。與溫冬梅等[13]研究者報道結果一致，提示Hb E、Hb G-Taipei、Hb Newyork及Hb J-Bangkok等血紅蛋白變異體對IE-HPLC檢測HbA1c構成不同程度干擾。

表3 基因測序結果

IE-HPLC測定HbA1c受到血紅蛋白變異體干擾的可能機制為：⑴序號1、3及6體檢者的血紅蛋白基因型均為β41-42/βJ-Bangkok，HbA1c測定結果偏低可能是因為珠蛋白鏈Gly替換為Asp，變異體的糖化速率低于HbA的糖化速率，HbA1c又作為變異體糖化產(chǎn)物,導致變異體糖化產(chǎn)物不能準確反映血糖水平；HbA和HbA1c出峰時間提前可能是因為珠蛋白鏈Gly替換為Asp，增加了負電荷的數(shù)量[14]。⑵序號2及5體檢者的血紅蛋白基因型均為βN/βJ-Bangkok，由于β41-42/βJ-Bangkok與βN/βJ-Bangkok理化性質(zhì)類似，因此其HbA1c測定結果偏低的可能機制與β41-42/βJ-Bangkok一致[15]。⑶序號4及7體檢者的血紅蛋白基因型均為βN/βE，HbA1c測定結果假性增高可能是因為Glu替換為Lvs，HbA1c出峰時間滯后,導致HbA被誤讀為Variant Window峰，Hb E被誤讀為HbA[16]。⑷序號8體檢者的血紅蛋白基因型為βN/βGTaipe，HbA1c測定結果假性增高可能是因為Glu替換為Gly，雜合子的峰形不能完全分離，未能正確讀取HbA[17,18]。

綜上所述,本研究探討了常見血紅蛋白變異體對IE-HPLC檢測HbA1c的干擾程度和干擾因素；本地區(qū)作為血紅蛋白病和地中海貧血等血液系統(tǒng)疾病的高發(fā)地區(qū)，選擇IE-HPLC檢測HbA1c時應更為謹慎；對于血紅蛋白病和地中海貧血等血液系統(tǒng)疾病可選擇果糖胺和（或）糖化血清蛋白等指標代替HbA1c評估患者的血糖水平。