宋青山 賈芳

[摘? ? ? ? ? ?要]? 從臨床分離得到439株MDR菌株，得到38株XDR菌株。訶子鞣質(zhì)對敏感株的抑菌濃度為50μg/mL～100μg/mL， 訶子鞣質(zhì)對MDR、XDR菌株的抑菌濃度為50μg/mL～200μg/mL。訶子鞣質(zhì)與三種一線抗結(jié)核藥物中任意一種聯(lián)合作用于MDR的協(xié)同效果顯著高于XDR。訶子鞣質(zhì)與三種二線抗結(jié)核藥物中任意一種聯(lián)合作用于MDR的協(xié)同效果顯著高于XDR。

[關(guān)? ? 鍵? ?詞]? 訶子鞣質(zhì);結(jié)核分枝桿菌;抗結(jié)核藥物

[中圖分類號]? R52? ? ? ? ? ? ? ?[文獻標志碼]? A? ? ? ? ? ?[文章編號]? 2096-0603（2020）44-0086-03

結(jié)核病仍然是一個世界公共衛(wèi)生問題，全世界每年大約有900萬新增病例[1]。

尤其是廣泛耐藥結(jié)核?。╔DR-TB）的出現(xiàn)，給全球結(jié)核病控制帶來了極大的挑戰(zhàn)。

研究報道中藥或中藥提取物或中藥制劑聯(lián)合標準化抗結(jié)核化療治療耐多藥結(jié)核分枝桿菌取得了一定進展，在茜草素聯(lián)合標準抗結(jié)核化療方案治療耐多藥肺結(jié)核協(xié)同作用的研究中發(fā)現(xiàn)，茜草素對人型結(jié)核分枝桿菌標準菌株（H37RV）最低抑菌濃度為80ug/mL，聯(lián)合西藥時顯示出對耐藥菌株抑殺作用，而又不表現(xiàn)出傷肝的缺點[2]。訶子（Terminalia chebula Retz）是君子科植物訶子成熟的果實，是蒙藥、藏藥中的最常用藥[3]。本研究為進一步研究訶子鞣質(zhì)抗結(jié)核分枝桿菌活性提供試驗數(shù)據(jù)，在臨床治療耐藥結(jié)核病中提供理論指導(dǎo)。

一、材料與方法

（一）藥物

一線二線抗結(jié)核藥物購于銀科醫(yī)學(xué)工程股份有限公司。訶子鞣質(zhì)購于中國標準物質(zhì)。

（二）菌株

菌株分離于2016年11月—2017年7月北京胸科醫(yī)院國家結(jié)核病臨床實驗室確診的住院結(jié)核分枝桿菌培陽的結(jié)核患者痰液。

（三）方法

1.單獨藥敏試驗

藥敏試驗按照中國防癆協(xié)會《結(jié)核病檢驗細菌學(xué)檢驗規(guī)程》，采用WHO推薦的微孔板法，進行16種（包括抗結(jié)核一線和二線藥物）抗結(jié)核菌藥敏實驗組套。接種菌懸液的制備：挑取一菌環(huán)菌體于Middlebrook 7H9液體培養(yǎng)基中并研磨，1：20稀釋后使用。用MABA法（阿爾馬蘭法）與Middlebrook 7H9液體培養(yǎng)基二倍稀釋法測定訶子鞣質(zhì)或者抗生素類藥物對人型結(jié)核分枝桿菌標準菌株（H37RV）、敏感株、MDR、XDR菌株的最低抑菌濃度[4]。判定方法為粉紅色記錄為陽性生長孔。最低抑菌濃度（MIC）定義為阻止顏色變?yōu)榉奂t色的最低藥物濃度。

2.聯(lián)合藥敏試驗

聯(lián)合藥用的方法采用棋盤法。利用部分抑菌濃度指數(shù)（fractional? inhibitory concentration index，F(xiàn)ICI） 判定聯(lián)合用藥效果，F(xiàn)ICI=（MICa聯(lián)合/MICa單獨）+（MICb聯(lián)合/MICb單獨），F(xiàn)ICI≤0.5，兩者協(xié)同;0.5﹤FIC≤1，兩者不相關(guān);FIC>1，兩者拮抗。

（四）統(tǒng)計方法

針對XDR-TB患者一線二線抗結(jié)核藥物耐藥情況各組分間的差異用卡方檢驗或Fisher′確切值檢驗，P<0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

二、結(jié)果

（一）敏感株、MDR、XDR菌株的篩選

在此次藥敏試驗中一共收集到敏感株2494株，MDR菌株439株，XDR菌株38株。其中XDR菌株中耐藥卡那霉素有13例，卷曲霉素有10例，阿米卡星有16例，里面包括同時耐卡那霉素和卷曲霉素5例，同時耐卡那霉素、卷曲霉素和阿米卡星2例。

（二）訶子鞣質(zhì)對敏感株、MDR、XDR菌株的敏感性

訶子鞣質(zhì)對敏感株的抑菌濃度為50μg/mL～100μg/mL，訶子鞣質(zhì)對MDR、XDR菌株的抑菌濃度為50μg/mL～200μg/mL。

（三）訶子鞣質(zhì)聯(lián)合一線抗結(jié)核藥物藥敏分析

訶子鞣質(zhì)聯(lián)合INH、RFP和SM作用于結(jié)核分枝桿菌標準株H37Rv（ATCC 27294）和8株MDR、XDR的體外協(xié)同抗菌活性作用效果（見表2）。訶子鞣質(zhì)聯(lián)合INH、RFP和SM作用于4株MDR均具有協(xié)同作用，且MIC值顯著下降。與訶子鞣質(zhì)聯(lián)合后，INH的MIC值下降8～32倍（FICIs 0.250-0.375）、RFP的MIC值下降1～4倍（FICIs 0.240-0.375）、SM的MIC值下降1～4倍（FICIs 0.165-0.275）。訶子鞣質(zhì)對結(jié)核分枝桿菌標準株H37Rv和XDR的聯(lián)合藥敏結(jié)果表明，它們之間不相關(guān)，F(xiàn)ICIs為0.562～1.063。研究發(fā)現(xiàn)，當訶子鞣質(zhì)與三種抗結(jié)核藥物中任意一種聯(lián)合作用于MDR的協(xié)同效果顯著高于XDR。

（四）訶子鞣質(zhì)聯(lián)合二線抗結(jié)核藥物藥敏分析

訶子鞣質(zhì)聯(lián)合Km、Cm和Am作用于結(jié)核分枝桿菌標準株H37Rv（ATCC 27294）和8株MDR、XDR的體外協(xié)同抗菌活性作用效果（見表2）。訶子鞣質(zhì)聯(lián)合Km、Cm和Am作用于4株MDR均具有協(xié)同作用，且MIC值顯著下降。與訶子鞣質(zhì)聯(lián)合后，INH的MIC值下降4～16倍（FICIs 0.250～0.375）、RFP的MIC值下降2～4倍（FICIs 0.281～0.375）、SM的MIC值下降1～2倍（FICIs 0.253～0.321）。訶子鞣質(zhì)對結(jié)核分枝桿菌標準株H37Rv和XDR的聯(lián)合藥敏結(jié)果表明，它們之間不相關(guān)，F(xiàn)ICIs為0.562～1.063。研究發(fā)現(xiàn)，當訶子鞣質(zhì)與三種抗結(jié)核藥物中任意一種聯(lián)合作用于MDR的協(xié)同效果顯著高于XDR。

三、討論

結(jié)核病也是我國重點控制的慢性呼吸道傳染病之一。經(jīng)過短程督導(dǎo)治療大多數(shù)肺結(jié)核患者是可以治愈，但是耐多藥的結(jié)核菌出現(xiàn)給臨床的治療帶來了極大的困難。耐多藥結(jié)核?。∕DR-TB）是至少同時耐利福平和異煙肼的結(jié)核病[5];對于MDR-TB患者還需要使用二線抗結(jié)核藥物，但近年來，在MDR-TB的基礎(chǔ)上，又出現(xiàn)了對氟喹諾酮類藥物和至少對包括（卡那霉素、卷曲霉素、阿米卡星）三種二線抗結(jié)核注射類藥物一種耐藥的廣泛耐藥結(jié)核?。╔DR-TB）[6]。然而XDR-TB的出現(xiàn)給全球結(jié)核病控制帶來了極大的挑戰(zhàn)。訶子在蒙藥中的應(yīng)用比例最大，功用最廣泛，被稱為“蒙藥之王”。訶子對革蘭陽性和革蘭陰性細菌均有抑制作用。訶子的乙醇提取物對耐甲氧嘧啶（SXT）/磺胺甲唑（TMP）的大腸桿菌的抗菌活性效果很好[7];訶子的果實提取物沒食子酸及其乙酯對耐甲氧西林的金黃色葡萄球菌具有很強的抑制作用，訶子的酸性乙醚提取物和乙醇提取物均具有一定的抗真菌活性[8]，對生物被膜的形成也有抑制作用[9];訶子在體內(nèi)、外均能抑制阿昔洛韋耐藥的單純性皰疹病毒;同時，訶子具有一定的抗瘧原蟲和抗阿米巴原蟲活性[10]?？梢?，訶子及其提取物對細菌、真菌、寄生蟲及其病毒均有抵抗作用。中藥訶子鞣質(zhì)與INH、RFP和SM聯(lián)合發(fā)現(xiàn)有較好抗結(jié)核分枝桿菌藥理活性，且在MDR中能發(fā)揮出兩者聯(lián)用的協(xié)同作用。

參考文獻：

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◎編輯 曾彥慧