孔繁慧

【摘 要】分析并研究DNA微陣列芯片法檢測(cè)耐藥結(jié)核分枝桿菌的臨床應(yīng)用價(jià)值。方法：本次實(shí)驗(yàn)共有60例患者結(jié)核分枝桿菌陽(yáng)性樣本參與實(shí)驗(yàn)。本次實(shí)驗(yàn)使用DNA微陣列芯片法對(duì)藥結(jié)核分枝桿菌利福平和異煙肼的耐藥性進(jìn)行檢驗(yàn)，研究DNA微陣列芯片法和傳統(tǒng)檢驗(yàn)方法的一致性。結(jié)果：兩種方法對(duì)核分枝桿菌利福平的耐藥性的檢測(cè)結(jié)果具有一致性，一致性=（6+53）/60=98.33%;兩種方法對(duì)核分枝桿菌異煙肼的耐藥性的檢測(cè)結(jié)果具有一致性，一致性=（4+55）/60=98.33%;。結(jié)論：使用DNA微陣列芯片法檢測(cè)結(jié)核分枝桿菌的耐藥性和傳統(tǒng)方法具有一致性，可以快速、簡(jiǎn)便、準(zhǔn)確的檢測(cè)出結(jié)核分枝桿菌的耐藥性，值得在臨床醫(yī)學(xué)中大力推廣使用。

【關(guān)鍵詞】DNA微陣列芯片法;結(jié)核分枝桿菌;利福平;異煙肼;檢測(cè)

【中圖分類號(hào)】R446.5【文獻(xiàn)標(biāo)志碼】A【文章編號(hào)】1005-0019（2020）07-078-01

我國(guó)結(jié)核流行病的普查研究表明，我國(guó)的肺結(jié)核患者耐藥性嚴(yán)重，通常治療結(jié)核分枝桿菌的方法是使用利福平和異煙肼，但是由于利福平和異煙肼的泛濫，導(dǎo)致結(jié)核分枝桿菌的耐藥性上升[1]。

1 資料與方法

1.1 一般資料

本次實(shí)驗(yàn)共有60例患者結(jié)核分枝桿菌陽(yáng)性樣本參與實(shí)驗(yàn)，所有患者結(jié)核分枝桿菌樣本均來(lái)自于我院2018年11月至2019年11月收治的結(jié)核分枝桿菌患者。其中共有患者60例，男性患者32例，女性患者28例;年齡分布為14-65歲，平均年齡為（40.19±12.57）歲。

1.2 實(shí)驗(yàn)方法

本次實(shí)驗(yàn)使用改良的羅氏培養(yǎng)法，使用對(duì)硝基苯甲酸記性菌種的鑒定，然后對(duì)鑒定為陽(yáng)性的菌株使用濃度法進(jìn)行測(cè)驗(yàn)。DNA微陣列芯片法使用的是北京博奧生物有限公司的藥物敏感檢測(cè)試劑盒，具體操作應(yīng)嚴(yán)格說(shuō)明書(shū)進(jìn)行檢測(cè)。關(guān)于核酸的提取應(yīng)該在試管中加入80（l的核酸提取液，然后再使用無(wú)菌技術(shù)加入一個(gè)結(jié)核分枝桿菌落，對(duì)試管使用Extractor 36 核酸快速提取儀依次進(jìn)行為期5min的震蕩、5min的90度水浴和1min的5000r/min離心[2]。然后進(jìn)行過(guò)PCR擴(kuò)增，其中每個(gè)樣品需要設(shè)置3個(gè)孔，在其中分別加入18（lPCR擴(kuò)增試劑1、18（lPCR擴(kuò)增試劑2、18（lPCR擴(kuò)增試劑3，分別命名PCR產(chǎn)物1、PCR產(chǎn)物2、PCR產(chǎn)物3，然后依次進(jìn)行擴(kuò)增[3]。最后進(jìn)行芯片雜交，具體方法為：加熱雜交緩沖液至50度，然后在兩支試管中分別加入9（l的雜交緩沖液，將3（lPCR產(chǎn)物1和3（lPCR產(chǎn)物2進(jìn)行混合，取名為A;將3（lPCR產(chǎn)物1和3（lPCR產(chǎn)物3進(jìn)行混合，取名為B;在95度的環(huán)境中將雜交反應(yīng)的混合物加熱5min，然后進(jìn)行3min的冰浴。將13.5（l的雜交反應(yīng)的混合物中加入物質(zhì)A，最后在50度恒溫水浴中進(jìn)行120min的培養(yǎng)[4]。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

本次實(shí)驗(yàn)使用統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件SPSS 21.0進(jìn)行相關(guān)的統(tǒng)計(jì)學(xué)數(shù)據(jù)處理。

2 結(jié)果

2.1 兩種方法檢測(cè)結(jié)核分枝桿菌利福平的耐藥性

通過(guò)本次實(shí)驗(yàn)可得，兩種方法對(duì)核分枝桿菌利福平的耐藥性的檢測(cè)結(jié)果具有一致性，一致性=（6+53）/60=98.33%;DNA微陣列芯片法檢驗(yàn)核分枝桿菌利福平的靈敏度=6/7=85.71%，特異度=53/53=100%，詳見(jiàn)表1。

2.2 兩種方法檢測(cè)結(jié)核分枝桿菌異煙肼的耐藥性

通過(guò)本次實(shí)驗(yàn)可得，兩種方法對(duì)核分枝桿菌異煙肼的耐藥性的檢測(cè)結(jié)果具有一致性，一致性=（4+55）/60=98.33%;DNA微陣列芯片法檢驗(yàn)核分枝桿菌異煙肼的靈敏度=4/5=80.00%;特異度=55/55=100%，詳見(jiàn)表2。

3 討論

針對(duì)核分枝桿菌耐藥性，通常使用的耐藥性檢測(cè)方法是使用培養(yǎng)法為基礎(chǔ)的絕對(duì)濃度法或比例法，但是這兩種方法通常需要進(jìn)行2-3個(gè)月的培養(yǎng)才能夠得出結(jié)果，嚴(yán)重延誤患者的用藥，對(duì)患者的生命健康具有消極意義，本次實(shí)驗(yàn)使用的DNA微陣列芯片法通常可以在2-4周內(nèi)對(duì)對(duì)藥物的敏感性完成測(cè)試。同時(shí)DNA微陣列芯片法的特點(diǎn)是操作簡(jiǎn)便、短暫快捷、準(zhǔn)確性高。目前快速檢驗(yàn)的方法通常是利用分子生物學(xué)，WTO推薦使用線性探針，而DNA微陣列芯片法和線性探針很相似，均是通過(guò)檢測(cè)兩種抗結(jié)核一線藥物進(jìn)行研究是否耐藥的，分別為利福平的rpoB位點(diǎn)和異煙肼的KatG和inhA基因位點(diǎn)[5]。

通過(guò)本次實(shí)驗(yàn)可得，兩種方法對(duì)核分枝桿菌利福平的耐藥性的檢測(cè)結(jié)果具有一致性，一致性=（6+53）/60=98.33%;DNA微陣列芯片法檢驗(yàn)核分枝桿菌利福平的靈敏度=6/7=85.71%，特異度=53/53=100%;兩種方法對(duì)核分枝桿菌異煙肼的耐藥性的檢測(cè)結(jié)果具有一致性，一致性=（4+55）/60=98.33%;DNA微陣列芯片法檢驗(yàn)核分枝桿菌異煙肼的靈敏度=4/5=80.00%;特異度=55/55=100%。

綜上所述，使用DNA微陣列芯片法檢測(cè)結(jié)核分枝桿菌的耐藥性和傳統(tǒng)方法具有一致性，可以快速、簡(jiǎn)便、準(zhǔn)確的檢測(cè)出結(jié)核分枝桿菌的耐藥性，值得在臨床醫(yī)學(xué)中大力推廣使用。

參考文獻(xiàn)

[1]陳蕾， 王鳳平， 徐俊馳， et al. 非結(jié)核分枝桿菌病實(shí)驗(yàn)室診斷方法分析及臨床應(yīng)用[J]. 中國(guó)實(shí)驗(yàn)診斷學(xué)， 2019（6）：935-939.

[2]何進(jìn)偉， 張燕飛， 汪明星， et al. 利用基因芯片檢測(cè)結(jié)核分枝桿菌及其利福平耐藥性的研究[J]. 遼寧醫(yī)學(xué)雜志， 2017（6）：25-27.

[3]楊敏， 于潞， 吳長(zhǎng)新， et al. 高分辨率熔解曲線檢測(cè)結(jié)核分枝桿菌對(duì)利福平耐藥性研究[J]. 中國(guó)預(yù)防醫(yī)學(xué)雜志， 2019（3）：161-164.

[4]羅晶晶， 于霞， 馬異峰，等. 高強(qiáng)度熒光分枝桿菌噬菌體Φ2GFP10檢測(cè)結(jié)核分枝桿菌對(duì)抗結(jié)核藥物耐藥性的價(jià)值[J]. 中華結(jié)核和呼吸雜志， 2017， 40（10）：755-759.

[5]翁繩鳳， 李寧， 邢俊蓬， et al. Xpert MTB/RIF檢測(cè)結(jié)核分枝桿菌及利福平耐藥性的應(yīng)用價(jià)值研究[J]. 分子診斷與治療雜志， 2019（3）：229-232.