丁建平，侯遠沛

（1.東臺市中醫(yī)院檢驗科，江蘇 東臺 224200；2.徐州市傳染病醫(yī)院檢驗科，江蘇 徐州 221004）

水平傳播的乙型肝炎病毒侵入人體后，95%的感染者自身的免疫系統(tǒng)會將其清除,形成T細胞及抗體介導的長期免疫力[1]，僅有少部分患者發(fā)展為慢性乙型肝炎、肝硬化甚至肝癌。有研究表明,HB V慢性感染者以適應性免疫應答減弱為特征,表現(xiàn)為CD4+、CD8+T淋巴細胞數(shù)量上的減少和質量上的失效[2],以往大多以CD4+、CD8+T淋巴細胞的百分數(shù)和比值進行粗略統(tǒng)計[3,4],隨著流式細胞檢測技術的發(fā)展,研發(fā)出更為精確的以熒光微球為參照的免疫細胞絕對計數(shù)法,現(xiàn)將本院乙型肝炎患者免疫細胞的絕對數(shù)進行統(tǒng)計分析,探討其臨床應用價值。

1 資料與方法

1.1 病例選擇 選取2016年1月-10月于本院確診為乙型肝炎患者173例,其中慢性乙型肝炎患者106例（輕度52例，中度38例，重度16例），肝硬化患者67例，所有慢性乙型肝炎診斷均符合2010版《慢性乙型肝炎防治指南》的診斷標準[5]，排除甲、丙、戊型肝炎混合感染，無合并糖尿病、艾滋病以及營養(yǎng)不良患者，最近半年未使用免疫調節(jié)劑治療。女性49例，男性124例，年齡24～84歲,平均年齡46.89±12.93歲；40例健康對照者年齡20～75歲,平均年齡45.62±14.23歲。按照患病與否、ALT、HBeAg含量的多少將乙型肝炎患者分為3組，各組間年齡均無統(tǒng)計學差異，見表1。

表1 3組患者年齡的比較

1.2 儀器與方法 所有患者入院當日空腹抽取靜脈血送檢,外周血免疫細胞采用Beckman Coulter FC500型流式細胞儀檢測，加入該公司配套的熒光微球作為參照品，計算免疫細胞的絕對數(shù)；ALT采用速率法，由日立公司生產(chǎn)的7180型全自動生化分析儀檢測，HBeAg采用時間分辨免疫熒光法，由蘇州新波生物有限公司生產(chǎn)的EasyCuta MiNi全自動免疫檢測儀檢測，HBeAg＞0.50 PEIU/ml為陽性，試劑為各公司配套試劑，嚴格按照SOP文件操作，各檢測項目以室內質控品進行質量控制，確保檢測結果準確可靠。

1.3 統(tǒng)計學方法 采用PEMS 3.1醫(yī)學統(tǒng)計軟件進行統(tǒng)計分析，率的比較采用χ2檢驗，兩組均數(shù)的比較采用t檢驗，P＜0.05為差異有統(tǒng)計學意義。

2 結果

2.1 173例乙型肝炎患者與40例健康對照者相比除B淋巴細胞無顯著性差異外 (t=1.81,P=0.07),CD 4+、CD8+、NK 細胞的表達均顯著降低 （t=4.47,4.21,2.72；P=0.00，0.00,0.01），乙型肝炎患者與健康對照者免疫細胞表達水平的比較見表2。

2.2 年齡≥56歲的老年乙型肝炎患者與≤35歲的年輕患者相比 CD4+、CD8+T淋巴細胞的表達水平顯著降低（t=2.30,3.38；P=0.02,0.00），B、NK 細胞差異無統(tǒng)計學意義 （t=0.87,0.71；P=0.38，0.48）；與36～55歲的乙型肝炎患者相比，除CD8+T淋巴細胞顯著性降低（t=2.53,P=0.01）外，CD4+、B 淋巴細胞、NK細胞的表達均無顯著性差異（t=1.71,0.71,0.97；P=0.09,0.48，0.33），36～55 歲的乙型肝炎與≤35 歲的年輕患者相比 CD4+、CD8+、B、NK 細胞的表達水平均無統(tǒng)計學差異 （t=1.39,1.81,0.29,0.18;P=0.17,0.07,0.77,0.86），173例乙型肝炎患者免疫細胞的表達水平與年齡的關系見表3。

2.3 ALT≥200μ/L的乙型肝炎患者與＜200μ/L的患者相比 CD4+、CD8+T淋巴細胞的表達顯著增加（t=2.49,2.36；P=0.01,0.02），B、NK 細胞差異不明顯（t=0.59,0.18；P=0.56，0.86），173 例乙型肝炎患者免疫細胞的表達水平與ALT的關系見表4。

2.4 60例HBeAg陽性的乙型肝炎患者與113例HBeAg陰性的患者相比 CD4+、CD8+T淋巴細胞的表達顯著增加（t=2.13,2.17；P=0.03,0.03），B、NK 細胞差異不明顯（t=1.30,0.49；P=0.19，0.63），173 例乙型肝炎患者免疫細胞的表達水平與HBeAg的關系見表5。

表2 173例乙型肝炎患者與40例健康對照者免疫細胞表達水平的比較

表3 173例乙型肝炎患者免疫細胞的表達水平與年齡的關系

表4 173例乙型肝炎患者免疫細胞的表達水平與ALT的關系

表5 173例乙型肝炎患者免疫細胞的表達水平與HBeAg的關系

3 討論

我國乙型肝炎病毒感染率較高，據(jù)報道2006年中國15～59歲人群HBsAg的感染率為8.12%[6]。HBV侵入人體后，體內的固有免疫和適應性免疫對病毒的清除發(fā)揮重要的作用。以NK細胞為代表的固有免疫可以直接殺傷HBV感染的肝細胞，也可通過ADCC效應、釋放多種細胞因子等方式共同發(fā)揮抗HBV效應，研究表明，乙型肝炎肝硬化患者外周血中NK細胞不僅表現(xiàn)為數(shù)量的減少，其分泌細胞因子的功能也減弱[7],導致HBV病毒在體內持續(xù)復制[8]；另外HBV病毒為胞內病毒，以T淋巴細胞為主的適應性免疫發(fā)揮關鍵作用[9]，表2資料提示HBV感染者NK、CD4+、CD8+細胞的表達水平顯著低于健康對照者,由于主要用于清除HBV感染的免疫細胞數(shù)量減少，導致機體對HBV的清除力下降，使得HBV在肝臟內長期存在，造成不同程度的肝損傷。研究表明，監(jiān)測HBV感染者淋巴細胞亞群對于評估其免疫功能具有重要的應用價值[10]。

表3資料顯示,老年乙型肝炎患者CD4+、CD8+淋巴細胞的表達水平顯著低于年輕患者,而細胞免疫對HBV的清除起著關鍵性的作用，因此老年患者清除體內HBV的能力相對較弱。有研究表明老年重度CHB和肝炎后肝硬化患者CD4+、CD8+T淋巴細胞下降更為顯著,下降幅度與疾病的嚴重程度有關[11],因此老年乙型肝炎患者在抗病毒治療的同時應注重對其免疫紊亂及免疫抑制情況的糾正[12]，以便達到最佳療效。

表4資料提示當肝細胞嚴重受損時，CD4+、CD8+T淋巴細胞表達數(shù)量顯著增高，細胞因子的分泌量也會隨之增加，免疫反應更加活躍，導致肝組織的損傷更為嚴重。研究表明，肝細胞的損傷主要來源于殺傷性T細胞清理HBV感染的過程[13]，因此在治療肝細胞嚴重受損的乙型肝炎患者時應注重其免疫功能的調節(jié)，防止過度的免疫反應造成肝組織損傷。

表5資料提示HBeAg陽性的乙型肝炎患者CD4+、CD8+T淋巴細胞的表達量顯著高于HBeAg陰性患者，表明HBeAg的表達可促進CD4+、CD8+T淋巴細胞的增殖,同時也說明細胞免疫對HBV的清除起主導作用。活化的CD4+T淋巴細胞可通過分泌細胞因子，活化CD8+、B淋巴細胞等方式激活機體的體液免疫和細胞免疫系統(tǒng)清除體內HBV[14]；CD8+T淋巴細胞活化為CTL細胞起主要清除HBV病毒作用，特異性CTL的數(shù)量及活性與病毒感染是否持續(xù)密切相關[15]。

綜上所述，HBV感染者免疫細胞的數(shù)量表現(xiàn)為不同程度的降低，HBeAg的表達可促進CD4+、CD8+T淋巴細胞的增殖,老年乙型肝炎患者以及肝細胞嚴重受損的患者在抗病毒治療的同時應關注其免疫功能的調節(jié)，以便達到最佳療效。