關(guān)浩，李海濤，李偉佳

（南陽醫(yī)學(xué)高等?？茖W(xué)校第一附屬醫(yī)院兒二科，河南 南陽473000）

流行病學(xué)研究表明,兒童癲癇的發(fā)病率可達(dá)284～596/1萬人左右[1]。臨床上兒童癲癇的發(fā)生，可能增加患者生活學(xué)習(xí)壓力,或?qū)е禄純哼h(yuǎn)期病死率和致殘率風(fēng)險(xiǎn)的上升[2,3]。

在探討兒童癲癇的病情進(jìn)展機(jī)制的過程中,可以發(fā)現(xiàn)不同的細(xì)胞因子或者生物學(xué)因子的表達(dá)，能夠通過影響到神經(jīng)元纖維的損傷,提高神經(jīng)纖維的異常放電的頻率，進(jìn)而促進(jìn)兒童癲癇的發(fā)生。高遷移率族蛋白1（HMGB1）的表達(dá)能通過提高炎癥性細(xì)胞的浸潤(rùn)程度,促進(jìn)神經(jīng)元纖維的炎癥性損傷,加劇補(bǔ)體成熟對(duì)神經(jīng)纖維的變性作用[4]；白細(xì)胞介素-2（IL-2）、IL-6的表達(dá)，能夠通過提高下游炎癥信號(hào)通路的激活,促進(jìn)相關(guān)炎癥性效應(yīng)因子對(duì)于神經(jīng)鞘膜完整性的破壞,促進(jìn)異常放電的發(fā)生[5]；神經(jīng)元特異性烯醇化酶（NSE）是存在于神經(jīng)纖維內(nèi)的保守性蛋白,在神經(jīng)纖維損傷的過程中，NSE可以釋放入血腦屏障中,并透過血腦屏障進(jìn)而進(jìn)入外周血中[6]。 為了揭示 HMGB1、IL-2、IL-6及 NSE 的表達(dá)與兒童癲癇的關(guān)系,從而為臨床上癲癇患兒的病情評(píng)估提供參考,選取2015年1月至2017年3月我院確診的癲癇患兒120例,探討HMGB1、IL-2、IL-6及NSE的表達(dá)及其與患兒病情的關(guān)系，報(bào)告如下。

1 資料與方法

1.1 臨床資料 選取2015年1月至2017年3月于我院確診的癲癇患兒120例為癲癇組,男性66例，女性 54例，年齡 6個(gè)月～3歲，平均（1.7±0.6）歲，根據(jù)發(fā)作頻率及持續(xù)時(shí)間將120例患兒分為：癲癇1組（癲癇頻發(fā)，癲癇發(fā)作每日＞3次）34例,癲癇2組27例 [癲癇持續(xù)狀態(tài)，癲癇發(fā)作持續(xù)時(shí)間30min以上和（或）短期內(nèi)連續(xù)間斷發(fā)作時(shí)間超過30min）]，癲癇3組24例（癲癇頻發(fā)，同時(shí)伴有癲癇持續(xù)狀態(tài)），癲癇4組35例（非癲癇頻發(fā)或持續(xù)狀態(tài)）。同期健康兒童60例為對(duì)照組。對(duì)照組，男性32例，女性 28例，年齡 6個(gè)月～3歲，平均（1.6±0.8）歲。癲癇組與對(duì)照組患兒的年齡、性別比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。

納入標(biāo)準(zhǔn)：⑴癲癇患兒的診斷標(biāo)準(zhǔn)參考2010年國際抗癲癇聯(lián)盟、國際癲癇局制定的癲癇發(fā)作、癲癇綜合征診斷指南中的標(biāo)準(zhǔn)，且均為首診；⑵患兒至少出現(xiàn)一次非誘發(fā)性癲癇發(fā)作、經(jīng)視頻腦電圖檢查證實(shí)；⑶患兒年齡范圍6個(gè)月～3歲；⑷本研究獲得患者的知情同意,獲得醫(yī)學(xué)倫理委員會(huì)的批準(zhǔn)。

排除標(biāo)準(zhǔn)：⑴惡性腫瘤;⑵凝血系統(tǒng)疾??；⑶精神疾病及認(rèn)知功能疾?。虎雀文I功能疾?。虎擅庖呦到y(tǒng)疾病、結(jié)締組織疾病；⑹甲狀腺功能疾病;⑺先心病或染色體疾病。

1.2 指標(biāo)檢測(cè)方法 采用ELISA法檢測(cè)HMGB1、IL-2、IL-6及NSE的表達(dá),患兒入院即刻采集肘部靜脈血4ml，1500r/min離心15min，收集上清液，于每個(gè)聚苯乙烯板中加入上述液體0.1ml,4℃過夜孵育,加入磷酸鹽緩沖液(PBS）洗滌3次,每次3min,在每個(gè)聚苯乙烯板孔中加入HMGB1、IL-2、IL-6及NSE蛋白抗體（1：800購自南京伯斯金生物公司），37℃孵育30min，加入磷酸鹽緩沖液（PBS）洗滌3次,每次3min,每孔中加入TMB溶液底物0.1 ml,37℃20min,加入2M硫酸0.05ml終止反應(yīng)，采用DG5033A酶標(biāo)儀(南京華東電子科技公司)進(jìn)行OD值檢測(cè)。

1.3 MDI、PDI測(cè)定 精神運(yùn)動(dòng)發(fā)育指數(shù)（PDI）重點(diǎn)評(píng)價(jià)粗大運(yùn)動(dòng)的發(fā)展以及運(yùn)動(dòng)協(xié)調(diào)能力和手的精細(xì)動(dòng)作；智力發(fā)育指數(shù)（MDI）主要對(duì)患兒的記憶、語言、簡(jiǎn)單解決問題以及對(duì)外界作出反應(yīng)的能力。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 計(jì)量數(shù)據(jù)表述采用（x±s）表示，兩組間比較采用兩組獨(dú)立樣本的t檢驗(yàn)、多組間計(jì)量資料比較采用單因素方差分析,組間兩兩比較采用LSD-t檢驗(yàn)；計(jì)數(shù)資料組間比較采用χ2檢驗(yàn)；P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義,統(tǒng)計(jì)軟件采用SPSS 16.0版本。

2 結(jié)果

2.1 癲癇組和對(duì)照組的血清 HMGB1、IL-2、IL-6及NSE水平比較 癲癇組患兒的血清HMGB1、IL-2、IL-6及NSE水平顯著高于對(duì)照組,差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）；見表 1。

表1 癲癇組和對(duì)照組的血清HMGB1、IL-2、IL-6及NSE 水平比較（x±s）

2.2 癲癇組和對(duì)照組的MDI評(píng)分、PDI評(píng)分比較癲癇組患兒的MDI評(píng)分、PDI評(píng)分顯著低于對(duì)照組，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）；見表2。

2.3 不同發(fā)作情況的癲癇組患兒血清HMGB1、IL-2、IL-6及NSE水平比較 癲癇1、2、3組患兒的血清HMGB1、IL-2、IL-6及NSE水平顯著高于癲癇4組,癲癇3組患兒各指標(biāo)均顯著高于癲癇1組和2組，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）；癲癇1組和2組患兒的各指標(biāo)比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）；見表3。

表2 癲癇組和對(duì)照組的MDI評(píng)分、PDI評(píng)分比較（x±s，分）

表3 不同發(fā)作情況的癲癇組患兒血清HMGB1、IL-2、IL-6 及 NSE 水平比較（x±s）

2.4 相關(guān)性分析 癲癇組患兒的血清HMGB1、IL-2、IL-6及NSE水平與MDI評(píng)分、PDI評(píng)分均呈顯著的負(fù)相關(guān)（P<0.05）；見表 4。

表4 相關(guān)性分析

3 討論

自身免疫性的損傷、家族性精神系統(tǒng)的遺傳性疾病,均能夠增加兒童癲癇的發(fā)生風(fēng)險(xiǎn),特別是在合并有腦組織缺氧缺血性損傷的患兒中,兒童癲癇的發(fā)生率持續(xù)上升[7]。臨床上兒童癲癇的發(fā)生,能夠?qū)е禄純哼h(yuǎn)期中樞系統(tǒng)并發(fā)癥的發(fā)生,并能夠增加短期內(nèi)患兒的病死率[8]。臨床上通過兒童的腦電圖檢查,雖然能夠評(píng)估兒童癲癇腦組織的異常電活動(dòng)情況,但兒童癲癇腦電圖檢查的配合程度較低,同時(shí)部分腦電圖檢查對(duì)于異常腦電活動(dòng)的捕捉陽性率較低。腦脊液穿刺雖然能夠輔助診斷或者評(píng)估兒童癲癇的病情,但腦脊液檢查的創(chuàng)傷較大,家長(zhǎng)及患兒的接受程度較低。而本次研究對(duì)于兒童癲癇體內(nèi)的HMGB1、IL-2、IL-6及NSE的分析研究,旨在為臨床上兒童癲癇的病情評(píng)估提供參考。

HMGB1是趨化因子家族成員，其能夠通過誘導(dǎo)趨化因子和補(bǔ)體成分的富集,從而促進(jìn)相關(guān)因子對(duì)于神經(jīng)纖維的損傷和變性,影響到了神經(jīng)元神經(jīng)電沖動(dòng)傳遞的穩(wěn)定性。基礎(chǔ)方面的研究認(rèn)為,HMG B1的表達(dá)還能夠提高巨噬細(xì)胞和單核細(xì)胞的激活程度，促進(jìn)相關(guān)炎癥性細(xì)胞對(duì)于腦組織的損傷，從而促進(jìn)癲癇的病情進(jìn)展[9]；IL-2、IL-6的表達(dá)能夠通過誘導(dǎo)MAPK或者NF-KB信號(hào)通路的激活，加劇免疫炎癥性損傷,從而促進(jìn)星形膠質(zhì)細(xì)胞的功能障礙[10]；NSE是高度保守性的神經(jīng)相關(guān)蛋白,其主要存在在神經(jīng)纖維、角質(zhì)細(xì)胞或者神經(jīng)內(nèi)分泌細(xì)胞中，在中毒、缺氧、炎癥等病理性改變的過程中，NSE的表達(dá)可顯著上升[11]。

本次研究對(duì)于癲癇患者中相關(guān)指標(biāo)的分析研究可見,在病例組患者中，HMGB1、IL-2、IL-6 及NSE的表達(dá)濃度均明顯上升,提示相關(guān)指標(biāo)的異常表達(dá)均能夠參與到兒童癲癇的病情進(jìn)展過程。通過匯集相關(guān)文獻(xiàn),筆者認(rèn)為這主要由于HMGB1、IL-2、IL-6及NSE的下列幾個(gè)方面的病理性作用有關(guān)[12-15]：⑴HMGB1的表達(dá)上升能夠促進(jìn)神經(jīng)纖維的蛋白變性,導(dǎo)致神經(jīng)纖維的電荷穩(wěn)定性的下降;⑵IL-2、IL-6的表達(dá)不僅能夠誘導(dǎo)炎癥性損傷，同時(shí)還能夠?qū)е驴乖岢始?xì)胞的功能障礙,導(dǎo)致自然殺傷性T淋巴細(xì)胞的激活,促進(jìn)了其對(duì)于神經(jīng)元的損傷;⑶NSE主要作為癲癇患者腦組織損傷的反應(yīng)性標(biāo)志物而明顯上升,不同病理性因素導(dǎo)致的神經(jīng)元膜完整性的破壞，均能夠促進(jìn)NSE的上升。郝偉紅等[6]研究者也認(rèn)為，在癲癇患者中，NSE的表達(dá)濃度可平均上升40%以上,在合并有明顯的腦功能障礙或者持續(xù)性放電的患者中，NSE的表達(dá)濃度可持續(xù)上升。精神運(yùn)動(dòng)發(fā)育指數(shù)（PDI）、智力發(fā)育指數(shù)（MDI）是評(píng)估患者腦功能狀態(tài)的指標(biāo)，病例組患者的相關(guān)評(píng)分均明顯下降,腦功能障礙較為明顯,這主要由于神經(jīng)元異常放電導(dǎo)致腦組織正常神經(jīng)電沖動(dòng)傳遞的障礙有關(guān)。癲癇頻發(fā)、癲癇持續(xù)狀態(tài)及二者兼有的患兒的血清HMGB1、IL-2、IL-6及NSE水平顯著的高于非頻發(fā)或非持續(xù)狀態(tài)者，這可能與患兒的癲癇頻發(fā)次數(shù)越多、持續(xù)性發(fā)作狀態(tài)越明顯,而此時(shí)相關(guān)神經(jīng)元的病理性改變程度就越高，而導(dǎo)致HMGB1、IL-2、IL-6及NSE的合成和釋放速度加快有關(guān)。但部分研究者并不認(rèn)為NSE的表達(dá)與癲癇的病情狀態(tài)存在關(guān)系,這與本次研究結(jié)論存在出入,主要考慮與NSE檢測(cè)方式的不同或者檢測(cè)時(shí)間節(jié)點(diǎn)的不同有關(guān)。最后本次研究發(fā)現(xiàn)，HMGB1、IL-2、IL-6及 NSE 水平與 MDI評(píng)分、PDI評(píng)分均呈顯著的負(fù)相關(guān),進(jìn)一步提示了相關(guān)細(xì)胞因子與癲癇患者的病情密切關(guān)系。

綜上所述，在兒童癲癇患者中，HMGB1、IL-2、IL-6的表達(dá)均明顯上升,同時(shí)相關(guān)指標(biāo)的表達(dá)與患者的病情狀態(tài)或者腦功能評(píng)分密切相關(guān)。