萬(wàn)愛(ài)紅，張連琴，張華

（鄭州大學(xué)第一附屬醫(yī)院婦科門(mén)診，河南 鄭州 450052）

流行病學(xué)研究證實(shí),我國(guó)2010-2017年部分地區(qū)宮頸癌的平均發(fā)病率可達(dá)283~593/10萬(wàn)人左右[1]。臨床上宮頸癌的發(fā)生能夠?qū)е禄颊呱钯|(zhì)量的下降，影響患者的生存預(yù)后水平[2]。在探討宮頸癌的發(fā)病機(jī)制過(guò)程中,可以發(fā)現(xiàn)腫瘤相關(guān)生化因子的改變,能夠通過(guò)影響到癌細(xì)胞的生物學(xué)特征，提高癌細(xì)胞的自我擴(kuò)增速度,進(jìn)而促進(jìn)生殖系統(tǒng)惡性腫瘤的發(fā)生。轉(zhuǎn)錄相關(guān)蛋白（Foxm1）的表達(dá)能夠通過(guò)誘導(dǎo)新生血管內(nèi)皮的形成,提高惡性腫瘤病灶組織的血流灌注水平,從而促進(jìn)了惡性腫瘤的發(fā)生和進(jìn)展[3]；低氧誘導(dǎo)因子-1(hypoxia inducible factor-1,HIF-1)能夠通過(guò)誘導(dǎo)缺氧環(huán)境,促進(jìn)上皮細(xì)胞的D NA損傷,增加異常DNA的突變和增殖的風(fēng)險(xiǎn)[4]；環(huán)氧酶(cyclo-oxygen-ase,COX)能夠通過(guò)參與到花生四烯酸的代謝導(dǎo)致氧化性損傷,提高癌細(xì)胞的侵襲和轉(zhuǎn)移能力[5]。部分研究者探討了Foxm1等指標(biāo)在卵巢癌患者中的表達(dá),認(rèn)為Foxm1等的表達(dá)陽(yáng)性率的上升,能夠顯著促進(jìn)卵巢癌的增殖能力的提升,加劇卵巢癌的侵襲轉(zhuǎn)移過(guò)程[6],但關(guān)于Foxm1、HIF-1α與COX-2在宮頸癌患者中的探討不足。為了深入揭示Foxm1、HIF-1α與COX-2的表達(dá)與宮頸癌患者的病情關(guān)系,從而為臨床上宮頸癌患者的臨床診療提供理論基礎(chǔ)，本次研究選取2016年2月-2018年2月在我院接受治療的宮頸癌患者為研究對(duì)象,探討了Foxm1、HIF-1α與COX-2免疫組化結(jié)果,并分析了其與宮頸癌患者臨床病理特征的關(guān)系。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選取2016年2月-2018年2月在我院接受治療的宮頸癌患者為研究對(duì)象。納入標(biāo)準(zhǔn)：⑴成年女性；⑵經(jīng)病理檢查確診為宮頸癌者；⑶無(wú)其他生殖系統(tǒng)腫瘤者；排除標(biāo)準(zhǔn)：⑴臨床資料不全者；⑵合并嚴(yán)重基礎(chǔ)疾病者。根據(jù)納入排除標(biāo)準(zhǔn)共納入病例數(shù)100例,年齡42~78歲,平均59.78±4.12歲,其中臨床分期為Ⅰ+Ⅱ期者58例，Ⅲ期者42例，有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移者40例，無(wú)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移者60例；對(duì)照組納入排除標(biāo)準(zhǔn)：成年女性，無(wú)嚴(yán)重基礎(chǔ)疾病者,根據(jù)納入排除標(biāo)準(zhǔn)共納入100例,年齡45~78歲，平均59.80±4.16歲。兩組研究對(duì)象年齡等一般資料比較無(wú)差別，具有可比性。本項(xiàng)研究經(jīng)醫(yī)院倫理委員會(huì)評(píng)審?fù)ㄟ^(guò)。

1.2 檢測(cè)方法 所有組織標(biāo)本經(jīng)石蠟包埋后作連續(xù)切片，厚度約為4mm，采用免疫組化鏈霉卵白素一生物素復(fù)合體法 (strep avidin—biotin complex，SABC法)染色，二氨基聯(lián)苯胺(diamionben zidene，DAB)顯色。 Foxm1、HIF-1α 與 COX-2蛋白通用型二抗以及SP試劑盒和DAB顯色盒均購(gòu)自北京中杉金橋生物技術(shù)開(kāi)發(fā)公司。以陽(yáng)性片及PBS代替一抗分別作為陽(yáng)性及陰性對(duì)照,高倍顯微鏡下觀察Foxm1、HIF-1α與COX-2蛋白的表達(dá)情況,具體染色步驟嚴(yán)格按照SP試劑盒說(shuō)明書(shū)進(jìn)行操作。

1.3 評(píng)價(jià)指標(biāo) 觀察兩組研究對(duì)象Foxm1蛋白、HIF-1α與COX-2蛋白表達(dá)情況,比較不同特征宮頸癌患者Foxm1蛋白、HIF-1α與COX-2蛋白表達(dá)情況，分析影響宮頸癌患者Foxm1蛋白、HIF-1α與COX-2蛋白表達(dá)情況的因素。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 數(shù)據(jù)錄入后,采用SPSS 11.5軟件進(jìn)行分析。兩組研究對(duì)象、不同特征宮頸癌患者Foxm1蛋白、HIF-1α與COX-2蛋白表達(dá)的比較采用卡方檢驗(yàn)進(jìn)行分析，采用Logistic回歸分析法分析影響宮頸癌患者Foxm1蛋白、HIF-1α與COX-2蛋白表達(dá)情況的因素。P<0.05：差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

表1 兩組研究對(duì)象Foxm1蛋白、HIF-1α與COX-2蛋白表達(dá)情況的比較

2 結(jié)果

2.1 兩組研究對(duì)象Foxm1蛋白、HIF-1α與COX-2蛋白表達(dá)情況的比較 宮頸癌組患者的Foxm1、HIF-1α與COX-2蛋白陽(yáng)性表達(dá)率均高于對(duì)照組,見(jiàn)表1。

2.2 不同特征宮頸癌患者Foxm1蛋白、HIF-1α與COX-2蛋白表達(dá)情況的比較 臨床分期為Ⅲ期、組織學(xué)分級(jí)為中、低分化、有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、有HPV感染的宮頸癌患者的Foxm1、HIF-1α與COX-2蛋白陽(yáng)性表達(dá)率較高,而不同年齡的患者Foxm1、HIF-1α與COX-2蛋白陽(yáng)性表達(dá)率無(wú)明顯差別,見(jiàn)表2。

2.3 影響宮頸癌患者 Foxm1蛋白、HIF-1α與COX-2蛋白表達(dá)情況的因素分析 將單因素分析有意義的因素（TNM分期、組織學(xué)分級(jí)、有無(wú)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、有HPV感染）作為自變量，以患者Foxm1、HIF-1α與COX-2蛋白表達(dá)情況作為因變量，進(jìn)行回歸分析。結(jié)果TNM分期、組織學(xué)分級(jí)進(jìn)入回歸方程。見(jiàn)表3。

表2 不同特征宮頸癌患者Foxm1蛋白、HIF-1α與COX-2蛋白表達(dá)情況的比較

3 討論

高危型HPV病毒感染能夠顯著促進(jìn)宮頸柱狀上皮細(xì)胞的病變，增加宮頸癌的發(fā)生風(fēng)險(xiǎn)[7]，特別是在合并有HPV16、HPV18或者HPV52等感染的患者中,高級(jí)別宮頸上皮內(nèi)瘤變或者宮頸癌的發(fā)生風(fēng)險(xiǎn)可進(jìn)一步的上升[8]。現(xiàn)階段臨床上主要通過(guò)手術(shù)治療宮頸癌，但包括手術(shù)及術(shù)后放療治療后，宮頸癌患者的臨床病情緩解率仍然較低,治療后的患者無(wú)進(jìn)展生存期仍然無(wú)明顯的改善[9]。而免疫靶向性治療,能夠在宮頸癌患者的輔助治療過(guò)程中發(fā)揮重要作用,本次研究對(duì)于宮頸癌患者體內(nèi)的Foxm 1、HIF-1α與COX-2的表達(dá)分析研究,不僅有助于深入揭示宮頸癌的發(fā)生機(jī)理,同時(shí)還能夠?yàn)閷m頸癌患者的免疫靶向性治療提供參考靶點(diǎn)。

表3 影響宮頸癌患者Foxm1蛋白、HIF-1α與COX-2蛋白表達(dá)情況的因素分析

Foxm1是轉(zhuǎn)錄調(diào)控家族因子，主要存在于細(xì)胞質(zhì)和細(xì)胞核周邊,其表達(dá)濃度的上升能夠通過(guò)提高癌細(xì)胞上游轉(zhuǎn)錄活性,進(jìn)而提高癌細(xì)胞紡錘體的復(fù)制和分裂速度,促進(jìn)癌細(xì)胞的持續(xù)性自我擴(kuò)增。Foxm1還能夠通過(guò)對(duì)于誘導(dǎo)凋亡因子的調(diào)控，導(dǎo)致癌細(xì)胞的分化障礙,促進(jìn)癌細(xì)胞中低分化或者低分化的發(fā)生[10]；HIF-1α能夠造成局部缺氧性環(huán)境，加劇癌細(xì)胞的DNA的斷裂和癌基因的突變，提高了癌細(xì)胞內(nèi)腫瘤相關(guān)信號(hào)通路的激活程度,從而促進(jìn)了宮頸柱狀上皮細(xì)胞的惡性病變風(fēng)險(xiǎn)[11]；COX-2是調(diào)控花生四烯酸生成的前列腺素酶,其能夠促進(jìn)血管內(nèi)皮因子激活的同時(shí),增加腫瘤新生微血管的數(shù)量，提高腫瘤細(xì)胞的侵襲能力?；A(chǔ)方面的研究還認(rèn)為，COX-2的表達(dá)上升還能夠?qū)е轮鶢钌掀ぜ?xì)胞突破基底膜能力的增強(qiáng),增加了癌細(xì)胞的轉(zhuǎn)移風(fēng)險(xiǎn)[12]。

免疫組化的結(jié)果分析研究可見(jiàn),在宮頸癌患者病灶組織中，F(xiàn)oxm1、HIF-1α與COX-2的表達(dá)陽(yáng)性率均明顯的上升，高于宮頸良性組織，差異較為明顯,提示了Foxm1、HIF-1α與COX-2的高表達(dá)均能夠促進(jìn)宮頸癌的發(fā)生過(guò)程。通過(guò)匯集不同的相關(guān)文獻(xiàn)，筆者認(rèn)為這主要由于Foxm1、HIF-1α與COX-2的下列幾個(gè)方面的作用有關(guān)[13]：⑴Foxm1的表達(dá)上升能夠提高癌基因的轉(zhuǎn)錄活性，促進(jìn)柱狀上皮細(xì)胞的持續(xù)性浸潤(rùn)和增殖過(guò)程；⑵HIF-1α誘導(dǎo)的缺氧性環(huán)境,能夠?qū)е掳┘?xì)胞生物學(xué)特征的明顯改變,提高了癌細(xì)胞內(nèi)AKT或者M(jìn)APK信號(hào)通路的激活；⑶COX-2對(duì)于體內(nèi)環(huán)氧化物的激活作用，能夠促進(jìn)癌細(xì)胞間質(zhì)成分的分解，促進(jìn)癌細(xì)胞的粘附和轉(zhuǎn)移過(guò)程。 楊建敏等[14]研究者也認(rèn)為，在宮頸癌病灶組織中，F(xiàn)oxm1蛋白的陽(yáng)性表達(dá)率可平均上升40%以上,特別是在合并有明顯的宮旁組織浸潤(rùn)的患者中，F(xiàn)oxm1蛋白的表達(dá)陽(yáng)性率可進(jìn)一步的上升。在探討Foxm1、HIF-1α與COX-2的表達(dá)與宮頸癌患者臨床病理特征的關(guān)系過(guò)程中發(fā)現(xiàn)，在發(fā)生了淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、臨床分期較晚或者癌細(xì)胞分化程度較差的患者中，F(xiàn)oxm1、HIF-1α與CO X-2的表達(dá)陽(yáng)性率可進(jìn)一步的上升，提示了相關(guān)指標(biāo)能夠顯著促進(jìn)宮頸癌患者臨床病理特征的進(jìn)展,這主要由于 Foxm1、HIF-1α與 COX-2的表達(dá)上升，能夠促進(jìn)宮頸癌患者癌細(xì)胞分化成熟障礙，導(dǎo)致癌細(xì)胞粘附盆腔內(nèi)淋巴結(jié)內(nèi)皮能力的上升。在合并有HPV感染的宮頸癌患者中，F(xiàn)oxm1、HIF-1α與COX-2的表達(dá)也明顯的上調(diào)，提示了HPV感染與相關(guān)因子的關(guān)系，HVP感染導(dǎo)致的柱狀上皮細(xì)胞的病毒整合作用，能夠?yàn)槟[瘤相關(guān)因子病理性作用的發(fā)揮提供前提[15]。多因素的回歸分析研究顯示，TNM分期、組織學(xué)分級(jí)是影響到Foxm1、HIF-1α與COX-2表達(dá)的風(fēng)險(xiǎn)性因素,進(jìn)一步提示了Foxm1、HIF-1α與COX-2與宮頸癌患者病情的緊密關(guān)系。

綜上所述,在宮頸癌患者中，F(xiàn)oxm1、HIF-1α 與COX-2的表達(dá)陽(yáng)性率明顯的上升,同時(shí)Foxm1、HIF-1α與COX-2的表達(dá)能夠促進(jìn)宮頸癌患者臨床分期的進(jìn)展和淋巴結(jié)的轉(zhuǎn)移等,加劇患者臨床病理特征的進(jìn)展。