韓瑜

(濟(jì)源市人民醫(yī)院腫瘤科，河南 濟(jì)源459000)

肝細(xì)胞癌 （Hepatocellular carcinoma，HCC）占原發(fā)性肝癌的70%~80%，是肝硬化患者死亡的主要原因,5年生存率不到10%,是威脅人類健康的惡性腫瘤之一,但其早期發(fā)現(xiàn)、早期診斷和早期治療，可使其5年生存率達(dá)70%左右，故對(duì)HCC的早期診治尤為重要[1]。 盡管近年來,甲胎蛋白（AFP）、甲胎蛋白異質(zhì)體（AFP-L3）和異常凝血酶原（DCP）三聯(lián)檢、腹部B超、CT等技術(shù)手段明顯提高了HCC的早期診斷率[2,3]，但對(duì)HCC的診斷和預(yù)后判斷仍存在誤診和漏診等局限性。有研究表明谷氨酸脫氫酶（glutamate dehydrogenase，GLDH）水平在肝癌患者中升高,升高程度與肝損傷程度呈正相關(guān)[4]。但關(guān)于血清25-羥維生素D-3（25(OH)D3）在HCC早期診斷和預(yù)后判斷中的研究報(bào)道甚少。故本研究通過檢測(cè)25(OH)D3和GLDH在HCC患者中水平的變化以及其與HCC臨床分期的關(guān)系,分析二者對(duì)HCC的診斷價(jià)值，探討二者在HCC患者中的相關(guān)性，以期為HCC的早期診斷和病情評(píng)估以及尋找新的治療靶點(diǎn)提供一定的理論依據(jù)。

1 資料和方法

1.1 一般資料 選擇80例2015年6月-2017年6月在本院經(jīng)組織病理學(xué)確診為初診HCC患者為觀察組，其中男性45例，女性35例，年齡45～75歲，平均年齡（61.35±11.48）歲。所有患者均經(jīng)過手術(shù)病理組織學(xué)確診且術(shù)前未接受過化療、放療治療。遵循美國(guó)癌癥聯(lián)合委員會(huì)（AJCC）制定的第八版肝細(xì)胞癌TNM分期標(biāo)準(zhǔn)[5],觀察組中Ⅰ期患者21例、Ⅱ期患者18例、Ⅲ期患者26例及Ⅳ期患者15例。另選擇80例本院健康體檢者作為對(duì)照組，其中男性42例，女性38例，年齡44～75歲，平均年齡（62.27±12.86）歲。兩組對(duì)象的年齡、性別等數(shù)據(jù)比較無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05），具備可比性。所有觀察對(duì)象均簽署知情同意書以及本實(shí)驗(yàn)獲得醫(yī)院倫理委員會(huì)的批準(zhǔn)。

1.2 納入與排除標(biāo)準(zhǔn) 觀察組納入標(biāo)準(zhǔn)：⑴所有患者均為初診并經(jīng)病理組織學(xué)確診;⑵所有患者術(shù)前均未進(jìn)行藥物、化療和（或）放療等治療；⑶所有患者的臨床病歷資料完整。排除標(biāo)準(zhǔn)：⑴患有膽囊癌、結(jié)腸癌、胃癌、胰腺癌等其他惡性腫瘤和其他腫瘤并發(fā)肝臟轉(zhuǎn)移者；⑵心、肺、肝、腎功能、血脂、血糖異常者；⑶患有自身免疫性疾病者、甲狀腺疾病和妊娠者；⑷病理資料和病歷資料不完善者。

1.3 研究方法 所有觀察對(duì)象于空腹時(shí)采集靜脈血5ml，3000r/min離心10min后收集上清,存放于-80℃冰箱以便檢測(cè)。25(OH)D3檢測(cè)采用ELISA法，檢測(cè)試劑購(gòu)于中國(guó)武漢博士德生物工程有限公司,檢測(cè)儀器采用THERMO Multiskan FC全自動(dòng)酶標(biāo)儀。GLDH檢測(cè)采用酶學(xué)速率法，檢測(cè)儀器采用美國(guó)貝克曼AU 5800全自動(dòng)生化儀,檢測(cè)試劑購(gòu)于德國(guó)德賽診斷系統(tǒng)有限公司。所有檢測(cè)項(xiàng)目嚴(yán)格按照說明書進(jìn)行。比較兩組對(duì)象血清25(OH)D3和GLDH水平差異以及不同TNM分期HCC患者血清中25(OH)D3和GLDH的水平差異。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 數(shù)據(jù)由SPSS19.0軟件處理。計(jì)量資料采用(x±s)表示，兩組間的差異比較采取t檢驗(yàn)，多組間比較采取單因素方差分析。ROC曲線分析25(OH)D3和GLDH對(duì)HCC的診斷價(jià)值。采用Pearson法進(jìn)行HCC患者血清25(OH)D3及GLDH水平間的關(guān)聯(lián)分析。P＜0.05為比較差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 兩組患者血清25(OH)D3和GLDH的水平比較 與對(duì)照組比較，觀察組血清25(OH)D3水平明顯降低，血清GLDH水平明顯增高，且差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），見表 1。

表1 觀察組和對(duì)照組血清25(OH)D3、GLDH的水平比較(x±s)

2.2 不同分期HCC患者血清25(OH)D3和GLDH的水平比較 單因素方差分析結(jié)果顯示：HCC分期越高，患者血清25(OH)D3水平越低，而血清GLDH水平越高，數(shù)據(jù)具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），見表2。

表2 不同分期HCC患者血清25(OH)D3和GLDH的水平比較(x±s)

2.3 血清中25(OH)D3和GLDH對(duì)HCC的診斷價(jià)值 ROC曲線分析結(jié)果顯示：25(OH)D3和GLDH對(duì)HCC的診斷AUC面積分別是0.814和0.806，診斷敏感性分別為81.30%和83.80%，診斷特異度分別為78.12%和80.53%,因AUC面積在0.7～0.9時(shí)具備一定準(zhǔn)確性,因此,血清中25(OH)D3和GLD H的水平對(duì)HCC具備一定的診斷價(jià)值，見表3及圖1。

表3 血清中25(OH)D3和GLDH對(duì)HCC患者的診斷價(jià)值

圖1 血清中25(OH)D3、GLDH對(duì)HCC患者的診斷價(jià)值

2.4 HCC患者血清25(OH)D3和GLDH水平的相關(guān)性分析 Pearson直線相關(guān)性分析結(jié)果顯示：HCC患者血清25(OH)D3和GLDH水平呈負(fù)相關(guān)（r=-0.457，P<0.05），見圖 2。

圖2 HCC患者血清25(OH)D3和GLDH水平的相關(guān)性分析

3 討論

根據(jù)癌癥流行病學(xué)報(bào)道，2015年中國(guó)新診斷的肝癌患者46萬余,因肝癌而死亡的病理42萬余例，而HCC是最常見的肝癌類型，其危險(xiǎn)因素包括酒精、HBV或HCV所致肝炎、肥胖、黃曲霉素感染等[6]。HCC的血管浸潤(rùn)程度高、轉(zhuǎn)移及復(fù)發(fā)潛能大，即使目前HCC的診斷和治療技術(shù)已大大改進(jìn)，但其早期診斷率及治療效果仍需要進(jìn)一步完善[7]，故篩選出新的HCC生物標(biāo)記物對(duì)預(yù)測(cè)HCC的發(fā)生發(fā)展及分子靶向治療十分必要。

GLDH是一種含Zn2+的金屬結(jié)合酶，有400~500個(gè)氨基酸，廣泛分布于肝、腎、心臟及骨骼肌等，肝細(xì)胞中含量最高，腦和腎的含量次之，活性位點(diǎn)主要是賴氨酸殘基,活性不易受到個(gè)體或者季節(jié)等因素影響[8]。GLDH 以 NAD(H)和 NADP(H)為輔酶,催化L-谷氨酸及α-酮戊二酸的可逆反應(yīng),參與的生物過程包括三羧酸循環(huán)、能量的產(chǎn)生、信號(hào)傳導(dǎo)等，在肌內(nèi)內(nèi)環(huán)境穩(wěn)態(tài)、氨基酸轉(zhuǎn)化、碳水化合物的代謝等過程中意義重大[9]。GLDH在肝內(nèi)主要集中與線粒體基質(zhì)內(nèi),活性增高時(shí)常常預(yù)示肝小葉的中央?yún)^(qū)細(xì)胞壞死，反映肝實(shí)質(zhì)細(xì)胞的壞死，是肝臟較為靈敏、特異的指標(biāo)。GLDH異常激活時(shí)能夠促進(jìn)腫瘤細(xì)胞（如膠質(zhì)瘤、結(jié)直腸癌等）的增殖、抗凋亡效應(yīng)及免疫逃逸等，進(jìn)而促進(jìn)腫瘤的發(fā)生發(fā)展[10]。本結(jié)果發(fā)現(xiàn)HCC患者血清GLDH水平表達(dá)增加，其高低與患者TNM分期有關(guān)，分期越高，TNM分期的表達(dá)量越豐富。這與易婷婷等[4]人的研究結(jié)果一致，我們猜測(cè)其原因可能與氧化應(yīng)激障礙以及能量異常代謝有關(guān)，其涉及的具體機(jī)制可能與人去乙?；?(SIRT4)、雷帕霉素靶蛋白復(fù)合體 1(mTOR1)和轉(zhuǎn)錄活化因子-3（STAT3）等致癌基因的過度激活導(dǎo)致腫瘤細(xì)胞的增殖、侵襲和血管形成有關(guān)[11]。

25(OH)D3在體內(nèi)由維生素D轉(zhuǎn)換而成，是體內(nèi)維生素D的最強(qiáng)活性形式，存在形式穩(wěn)定，生物學(xué)作用主要包括調(diào)控體內(nèi)的鈣磷平衡、血糖水平、穩(wěn)定內(nèi)環(huán)境及調(diào)節(jié)細(xì)胞的增殖、分化[12,13]。有研究指出25(OH)D3可通過促進(jìn)細(xì)胞分化、誘導(dǎo)細(xì)胞的凋亡等方式調(diào)控腫瘤細(xì)胞的周期、激活巨噬細(xì)胞釋放TNF-α以及調(diào)節(jié)微環(huán)境，降低腫瘤細(xì)胞膠原酶以及黏連蛋白受體表達(dá)等方式發(fā)揮廣泛殺傷的抗腫瘤效應(yīng)，抑制腫瘤的侵襲及轉(zhuǎn)移，進(jìn)而抑制腫瘤的進(jìn)展[14-16]。本文結(jié)果發(fā)現(xiàn)HCC患者血清25(OH)D 3水平表達(dá)明顯減低，且這種減低與HCC患者的TNM分期有關(guān)，分期越高，血清25(OH)D3水平表達(dá)越低。我們推測(cè)這種變化與25(OH)D3可通過上調(diào)張力蛋白同源物磷酸脂酶基因（PTEN）蛋白的表達(dá)，抑制PI3K/AKT信號(hào)傳導(dǎo)通路，下調(diào)增殖細(xì)胞核抗原（PCNA）和細(xì)胞基質(zhì)金屬蛋白酶-9（MMP-9）蛋白的表達(dá)有關(guān)[17]。

ROC曲線分析結(jié)果顯示25(OH)D3和GLDH對(duì)HCC的診斷AUC面積分別是0.814和0.806，且診斷敏感性和特異性均較高,說明血清25(OH)D3和GLDH對(duì)HCC具備一定的診斷價(jià)值,這為HCC的診斷提供了新的實(shí)驗(yàn)室指標(biāo),具有一定的臨床應(yīng)用價(jià)值。Person相關(guān)性分析結(jié)果顯示血清25(OH)D3和GLDH水平在HCC患者中的表達(dá)呈負(fù)相關(guān)性，這表明二者之間存在分子機(jī)制相關(guān)性，具體有待于進(jìn)一步的探討研究,這可能可作為HCC的聯(lián)合診斷指標(biāo)及分子治療的靶點(diǎn)。

綜上所述，HCC患者中血清GLDH水平表達(dá)升高，25(OH)D3表達(dá)水平減低，二者水平表達(dá)的高低與臨床病理分期關(guān)系密切，且二者均對(duì)HCC具有一定的診斷價(jià)值以及在HCC患者中的表達(dá)呈負(fù)相關(guān)性，表明血清25(OH)D3和GLDH與HCC的發(fā)生發(fā)展存在緊密聯(lián)系，對(duì)疾病的診斷、分子靶向治療及預(yù)后的判斷具有重要意義。