孫海瓊 章曉燕 楊苗芬

流行性感冒是一種由流感病毒引起的急性呼吸道傳染病，也簡(jiǎn)稱(chēng)為流感，其感染癥狀主要表現(xiàn)為咽痛、發(fā)熱、流涕、頭痛等［1］。流感病毒為正粘病毒科，根據(jù)病毒核蛋白抗原不同可分為甲（A）、乙（B）、丙（C）3 型，其中甲型流感病毒最容易發(fā)生變異，是人類(lèi)流感的主要病原體，具有流行性廣、傳染性強(qiáng)的特點(diǎn)，成為近年來(lái)影響公共健康的重大危險(xiǎn)因素之一［2-4］。甲型流感的治療主要以抗病毒治療為主，感染初期為治療的最佳時(shí)期。因此早期診斷對(duì)于甲型流感患者的治療具有重要作用［5-6］。VCS 技術(shù)是美國(guó)貝克曼庫(kù)爾特公司的一項(xiàng)專(zhuān)利技術(shù)，其通過(guò)利用低頻電流分析細(xì)胞體積（volume）、高頻電磁探針檢測(cè)細(xì)胞核及核質(zhì)比特性（conductivity）和激光掃描細(xì)胞顆粒信息（scatter）。其獨(dú)特的三維技術(shù)廣泛應(yīng)用于白細(xì)胞分類(lèi)和提供多項(xiàng)白細(xì)胞VCS 相關(guān)參數(shù)。該參數(shù)在多種疾病的輔助診斷具有重要價(jià)值［7］。本文探討白細(xì)胞VCS 參數(shù)在甲型流感病毒感染中的診斷價(jià)值。

1 資料與方法

1.1 臨床資料 選取2019 年2 月至3 月本院經(jīng)甲型/乙型流感病毒抗原檢測(cè)試劑盒（膠體金法，杭州創(chuàng)新生物檢控技術(shù)有限公司）檢測(cè)結(jié)果為陽(yáng)性的患者101例為甲流組，其中男45 例，女56 例；年齡18～66 歲，平均年齡（28.52±10.20）歲。同期完全隨機(jī)選取本院無(wú)癥狀健康體檢者101 例為對(duì)照組，其中男55 例，女46 例；年齡18～65 歲，平均年齡（29.75±9.61）歲。兩組年齡、性別差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。

1.2 儀器與試劑 Beckman Coulter DxH800 型血液分析儀及其配套試劑、校準(zhǔn)物。按儀器說(shuō)明書(shū)進(jìn)行校準(zhǔn)、質(zhì)量控制、保養(yǎng)及維護(hù)。每日進(jìn)行室內(nèi)質(zhì)量控制評(píng)價(jià)，確保檢測(cè)時(shí)儀器狀態(tài)穩(wěn)定。

1.3 方法 （1）標(biāo)本采集：首次就診未治療的成人患者及成人健康體檢者的靜脈血2.0ml 于EDTA-K2 紫色抗凝管中，充分混勻，2h 內(nèi)上機(jī)完成檢測(cè)分析。利用電阻抗原理對(duì)白細(xì)胞進(jìn)行計(jì)數(shù)，用高、低頻電流和激光技術(shù)對(duì)白細(xì)胞進(jìn)行分類(lèi)，并進(jìn)行白細(xì)胞VCS 參數(shù)分析。（2）檢測(cè)指標(biāo)：收集中性粒細(xì)胞（NE）、淋巴細(xì)胞（LY）和單核細(xì)胞（MO）的體積（V）、電導(dǎo)率（C）和5 個(gè)角度散射（S）參數(shù)的平均值（MN），共21 個(gè)參數(shù)。其中光散射參數(shù)為：中位角光散射（MALS）、高中位角光散射（UMALS）、低中位角光散射（LMALS）、低角度光散射（LALS）和軸向光吸收（AL2）。其中體積反映細(xì)胞大小，電導(dǎo)率反映核質(zhì)比，光散射參數(shù)反映細(xì)胞的復(fù)雜性、顆粒度和細(xì)胞核結(jié)構(gòu)，但AL2 細(xì)胞的大小是根據(jù)吸收光來(lái)確定的［8］。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 采用SPSS 20.0 統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件。采用受試者工作特征曲線（ROC）分析VCS 參數(shù)在甲型流感病毒感染輔助診斷中的價(jià)值，以曲線下面積（AUC）分析檢測(cè)指標(biāo)的診斷價(jià)值，以Youden 指數(shù)最高的結(jié)果為截?cái)帱c(diǎn)，對(duì)樣本進(jìn)行預(yù)測(cè)，并與實(shí)際診斷結(jié)果進(jìn)行對(duì)比，計(jì)算陽(yáng)性預(yù)測(cè)值及陰性預(yù)測(cè)值。正態(tài)分布計(jì)量資料以（±s）表示；非正態(tài)分布資料以［M（Q1，Q3）］表示。兩組間比較采用Mann-Whitney U 檢驗(yàn)。以P＜0.05 為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 兩組一般資料、血常規(guī)分類(lèi)計(jì)數(shù)比較 見(jiàn)表1。

表1 兩組一般資料、血常規(guī)分類(lèi)計(jì)數(shù)比較［M（Q1，Q3）］

2.2 VCS 參數(shù)比較 見(jiàn)表2～4。

2.3 ROC 曲線分析結(jié)果 （1）中性粒細(xì)胞ROC 曲線分析結(jié)果：從對(duì)照組中識(shí)別甲流感染的ROC 曲線表明，MN-V-NE（AUC 0.90，在截?cái)帱c(diǎn)150.5 處的靈敏度84.16%，特異性80.2%，陽(yáng)性預(yù)測(cè)值80.95%，陰性預(yù)測(cè)值83.51%）和MN-UMALS-NE（AUC 0.96，在截?cái)帱c(diǎn)132.5 處?kù)`敏度93.07%，特異性89.11%，陽(yáng)性預(yù)測(cè)值89.52%，陰性預(yù)測(cè)值92.78%）具有高的診斷價(jià)值及良好的敏感性和特異性，見(jiàn)表5 和圖1。（2）淋巴細(xì)胞ROC 曲線分析結(jié)果：從對(duì)照組中識(shí)別甲流感染的ROC 曲線表明，MN-MALS-LY（AUC 0.99，在截?cái)帱c(diǎn)54.5 處的靈敏度95.05%，特異性99.01%，陽(yáng)性預(yù)測(cè)值98.97%，陰性預(yù)測(cè)值95.24%）、MN-UMALSLY（AUC 0.99，在截?cái)帱c(diǎn)48.5 處的靈敏度96.04%，特異性95.05%，陽(yáng)性預(yù)測(cè)值95.10%，陰性預(yù)測(cè)值96.00%）和MN-LMALS-LY（AUC 0.99，在截?cái)帱c(diǎn)49.5 處的靈敏度97.03%，特異性93.07%，陽(yáng)性預(yù)測(cè)值93.33%，陰性預(yù)測(cè)值96.91%）具有很高的診斷價(jià)值及優(yōu)秀的敏感性和特異性，見(jiàn)表6 和圖2。（3）單核細(xì)胞ROC 曲線分析結(jié)果：從對(duì)照組中識(shí)別甲流感染的ROC 曲線表明，MN-V-MO（AUC 0.98，在截?cái)帱c(diǎn)173.5 處的靈敏度95.05%，特異性93.07%，陽(yáng)性預(yù)測(cè)值93.20%，陰性預(yù)測(cè)值94.95%）、MN-MALS-MO（AUC 1，在截?cái)帱c(diǎn)73.5 處的靈敏度100.00%，特異性99.01%，陽(yáng)性預(yù)測(cè)值99.02%，陰性預(yù)測(cè)值100.00%）、MN-UMALS-MO（AUC 1，在截?cái)帱c(diǎn)83.5 處的靈敏度99.01%，特異性98.02%，陽(yáng)性預(yù)測(cè)值98.02%，陰性預(yù)測(cè)值99.00%）和MN-LMALS-MO（AUC 1，在截?cái)帱c(diǎn)60.5 處的靈敏度99.01%，特異性98.02%，陽(yáng)性預(yù)測(cè)值98.04%，陰性預(yù)測(cè)值99.00%）具有優(yōu)秀的診斷價(jià)值及優(yōu)秀的敏感性和特異性，見(jiàn)表7 和圖3。

表2 兩組中性粒細(xì)胞的VCS 參數(shù)情況

表3 兩組淋巴細(xì)胞的VCS參數(shù)情況

表4 兩組單核細(xì)胞的VCS參數(shù)情況

圖1 中性粒細(xì)胞VCS參數(shù)的ROC曲線

圖2 淋巴細(xì)胞VCS參數(shù)的ROC曲線

圖3 單核細(xì)胞VCS參數(shù)的ROC曲線

表5 中性粒細(xì)胞VCS參數(shù)診斷甲型流感病毒染的ROC曲線分析（%）

表6 淋巴細(xì)胞VCS參數(shù)診斷甲型流感病毒染的ROC曲線分析（%）

表7 單核細(xì)胞VCS參數(shù)診斷甲型流感病毒染的ROC曲線分析（%）

3 討論

甲型流感初起的臨床癥狀通常為咽痛、發(fā)熱、流涕、頭痛等，與普通呼吸道感染癥狀相似，易導(dǎo)致診療的延誤。臨床醫(yī)師會(huì)通過(guò)血常規(guī)來(lái)初步辨別細(xì)菌感染和病毒感染。現(xiàn)有研究發(fā)現(xiàn)甲型流感病毒感染初期患者的血常規(guī)呈現(xiàn)一種不典型變化，即表現(xiàn)為WBC和NE%呈正常或升高，而LY%呈正常或降低［9］。造成這種不典型變化的原因，有學(xué)者認(rèn)為是甲型流感病毒抑制機(jī)體細(xì)胞免疫功能，誘導(dǎo)淋巴細(xì)胞凋亡，導(dǎo)致LY%降低；而甲型流感早期易合并細(xì)菌感染，導(dǎo)致WBC 和NE%呈正?；蛏撸?0］。本資料中甲型流感病毒感染初期患者的血常規(guī)表現(xiàn)為WBC 計(jì)數(shù)以正常（占91.09%的甲型流感患者）為主，NE%和MO%以正常及升高（分別占55.44%、44.55%；66.34%的甲型流感患者）為主，LY%則以降低（占80.20%的甲型流感患者）為主。由此可見(jiàn)，該種不典型血常規(guī)結(jié)果對(duì)甲型流感診斷具有一定參考價(jià)值。但因甲型流感病毒感染患者的血常規(guī)結(jié)果多變，血常規(guī)報(bào)告指標(biāo)如WBC計(jì)數(shù)、NE%、LY%和MO%等用于甲型流感病毒的診斷敏感度還不夠，且具有一定局限性。VCS 技術(shù)的檢測(cè)原理即通過(guò)低頻電流分析體積，通過(guò)高頻傳導(dǎo)分析胞核和核質(zhì)比等，通過(guò)激光散射分析胞質(zhì)內(nèi)顆粒結(jié)構(gòu)特征，從而進(jìn)行綜合評(píng)價(jià)分析準(zhǔn)確對(duì)白細(xì)胞進(jìn)行分類(lèi)［11-13］。Beckman Coulter DxH800 全自動(dòng)分析儀檢測(cè)結(jié)果表明，甲流組與對(duì)照組間除MN-LMALS-NE（P＞0.05）外，其余參數(shù)差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），其中淋巴細(xì)胞和單核細(xì)胞的參數(shù)變化最大。甲流組淋巴細(xì)胞中除MN-C-LY 略微降低外，其余參數(shù)均升高，其中MN-MALS-LY、MN-UMALS-LY、MN-LMALS-LY 三個(gè)角度的光散射升高顯著。即表明甲型流感患者淋巴細(xì)胞的核質(zhì)比略微變小，染色質(zhì)致密度升高和（或）細(xì)胞質(zhì)內(nèi)顆粒變粗、變多，且研究中甲流組淋巴細(xì)胞的體積雖然變大但其仍然處于正常范圍。故研究中淋巴細(xì)胞VCS 參數(shù)的變化，符合甲型流感病毒誘導(dǎo)淋巴細(xì)胞凋亡的觀點(diǎn)。而與對(duì)照組比較，甲流組單核細(xì)胞除MN-LALS-MO 參數(shù)降低外，其余參數(shù)均顯著升高。表明單核細(xì)胞體積變大，核質(zhì)比變大，胞漿內(nèi)結(jié)構(gòu)變復(fù)雜。推測(cè)淋巴細(xì)胞的凋亡激活單核巨噬系統(tǒng)對(duì)凋亡的細(xì)胞進(jìn)行吞噬清除，MO%的升高也與此相符。至于中性粒細(xì)胞，與對(duì)照組相比，甲流組MN-V-NE 升高，而MN-C-NE 降低，表明中性粒細(xì)胞的體積變大、而核質(zhì)比減少，推測(cè)這種變化可能是由于部分甲型流感患者在感染初期合并了細(xì)菌性感染而導(dǎo)致中性粒細(xì)胞激活，但甲流組的中性粒細(xì)胞還是以成熟中性粒細(xì)胞為主。

本資料結(jié)果表明，白細(xì)胞VCS 參數(shù)在甲型流感的診斷中具有較高的靈敏度和特異性，其中淋巴細(xì)胞和單核細(xì)胞的MN-MALS、MN-UMALS 和MN-LMALS三個(gè)參數(shù)的AUC 高＞0.99，具有較高的診斷價(jià)值，且計(jì)算所得的靈敏度和特異性均＞90%?？梢?jiàn)白細(xì)胞VCS 參數(shù)對(duì)于輔助診斷甲型流感中具有很大的潛在價(jià)值，可幫助臨床醫(yī)師對(duì)感染患者及時(shí)進(jìn)行治療。