包勒朝魯 那生桑

摘要?目的：建立蒙藥胡德日奈都日吉德的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)。方法：參照《中華人民共和國藥典》（四部）2015年版相關(guān)方法，對(duì)胡德日奈都日吉德雜質(zhì)、水分、灰分、浸出物進(jìn)行檢測(cè);采用硅膠G薄層板，以大戟二烯醇為對(duì)照，以石油醚（60～90 ℃）-乙酸乙酯（10∶1）為展開劑，用10%硫酸乙醇溶液顯色，對(duì)胡德日奈都日吉德進(jìn)行鑒別;采用紫外分光光度法，以大戟二烯醇為對(duì)照，在545 nm波長(zhǎng)下對(duì)胡德日奈都日吉德的活性成分萜類化合物進(jìn)行定量分析。結(jié)果：胡德日奈都日吉德三批樣品雜質(zhì)在0.69%～0.75%之間，平均值為0.72%，RSD為4.26%;水分含量在7.68%～7.74%之間，平均值為7.72%，RSD為0.03%;總灰分0.20%～0.22%之間，平均值為0.21%，RSD為2.86%;酸不溶性灰分在0.21%～0.23%之間，平均值為0.22%，RSD為4.82%;浸出物1.24～1.35之間，平均值為1.31%，RSD為4.64%。在供試品的色譜中，與對(duì)照品色譜相應(yīng)的位置上，顯示相同顏色的斑點(diǎn)?？傒圃?.672 0～5.379 0 mg/L呈良好的線性關(guān)系，該方法平均回收率為97.48%，RSD為0.478%，3批樣品總萜含量在25.67～35.94 mg/g之間，均含量為31.03 mg/g。結(jié)論：根據(jù)實(shí)驗(yàn)結(jié)果，制定蒙藥胡德日奈都日吉德藥材（按干燥品計(jì)算）中雜質(zhì)、水分、總灰分、酸不溶性灰分分別不得過1%，10.0%，0.4%、0.4%;水溶性浸出物不得少于1.0%;總萜含量不得少于20 mg/g。本辦法可用于蒙藥胡德日奈都日吉德藥材的質(zhì)量控制。

關(guān)鍵詞?蒙藥;胡德日奈都日吉德;大戟二烯醇;總萜;薄層色譜;含量測(cè)定;紫外分光光度法;質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)

Primary Study on Quality Standard of Mongolian Crude Drug Huderinaidurijide

BAOLE Chaolu，NA Shengsang

（Academy of Mongolian Medicine，Inner Mongolia Medical University，Hohhot 010110，China）

Abstract?Objective：To establish quality standard of Mongolian crude drug Huderinaidurijide.Methods：According to relevant methods in Chinese Pharmacopoeia（2015 edition Ⅳ），impurity，moisture，ash and extract of Huderinaidurijide were tested.A silica gel G plate was used.Euphol was taken as a control.Petroleum ether（60～90 ℃）-ethyl acetate（10：1）was used as developing solvent and 10% sulfuric acid ethanol solution was used for color development.Huderinaidurijide was performed identification.UV spectrophotometry was applied.Taking euphol as a control，active ingredients-terpenoids of Huderinaidurijide were quantitatively analyzed at 545 nm wavelength.Results：The impurity of 3 batches of sample Huderinaidurijide was 0.69%～0.75%，with an average of 0.72% and a RSD of 4.26%.The moisture content ranged from 7.68%～7.74%，with an average of 7.72% and a RSD of 0.03%.The total ash was between 0.20% and 0.22%，with an average of 0.21% and a RSD of 2.86%.The acid-insoluble ash ranged from 0.21%～0.23%，with an average of 0.22% and a RSD of 4.82%.The extract ranged from 1.24 to 1.35，with an average of 1.31% and a RSD of 4.64%.In the chromatogram of the test product，spots of the same color were displayed at positions corresponding to the chromatogram of the control product.The total terpenoids showed a good linear relationship between 0.6720 and 5.3790 mg/L.The average recovery rate of this method was 97.48% and the RSD was 0.478%.The content of total terpenoids in the 3 batches of samples ranged from 25.67 to 35.94 mg/g，with an average of 31.03 mg/g.Conclusion：According to the results，it is formulated that impurity，moisture，total ash，and acid-insoluble ash in Mongolian crude drug Huderinaidurijide（calculated on dried products）can not exceed 1%，10.0%，0.4% and 0.4%，respectively.Water-soluble extract is not less than 1.0%.The content of total terpenoids is not less than 20 mg/g.This method can be used for quality control of Mongolian crude drug Huderinaidurijide.

Keywords?Mongolian medicine; Huderinaidurijide; Euphol; Total terpenoids; TLC; Content determination; UV spectrophotometry; Quality standard

中圖分類號(hào)：R284;R932文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：Adoi：10.3969/j.issn.1673-7202.2020.05.011

胡德日奈都日吉德為傳統(tǒng)蒙醫(yī)藥較為常用的導(dǎo)瀉藥之一，是大戟科多生植物喜馬拉雅大戟Euphorbia himalayensis Boiss.的干燥根[1]，味苦、辛，有毒。具有導(dǎo)瀉、催吐、抗腐爛之功效，主要用于未盡“希拉”、死胎的下排和不消化、胸痞、鐵屑“巴達(dá)干”“巴達(dá)干”病的催吐治療[2]。胡德日奈都日吉德雖然入味多種蒙醫(yī)傳統(tǒng)復(fù)方制劑，但是其現(xiàn)代研究甚少，化學(xué)成分、藥理藥效、質(zhì)量控制等幾乎為零。本研究主要參考《中華人民共和國藥典》（一部）2015年版[3]中記載的大戟科藥材的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)，結(jié)合胡德日奈都日吉德的蒙醫(yī)藥用藥特征，從藥材的性狀、顯微、水分、總灰分、酸不溶性灰分、浸出物、總萜含量等方面進(jìn)行了研究，并初步建立了其質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)，為胡德日奈都日吉德的質(zhì)量控制提供科學(xué)依據(jù)。

1?儀器與試藥

1.1?儀器

TU-1901型紫外分光光度計(jì)（北京普析通用儀器有限責(zé)任公司）;錐形瓶，蒸發(fā)皿，硅膠G薄層板，稱量瓶，容量瓶，無灰濾紙，坩堝等。

1.2?試劑

大戟二烯醇（中國食品藥品檢定研究院，生產(chǎn)批號(hào)：1118666-201411），生產(chǎn)批號(hào)為111866-201411，由中國食品藥品檢定研究院提供;甲醇，分析純，生產(chǎn)批號(hào)為20140110，由天津市鳳船化學(xué)試劑科技有限公司提供;石油醚，分析純，生產(chǎn)批號(hào)為20150629，由天津市津東天正精細(xì)化學(xué)試劑廠提供;乙酸乙酯，分析純，生產(chǎn)批號(hào)為20150812，由天津市鳳船化學(xué)試劑科技有限公司提供;硫酸，分析純，生產(chǎn)批號(hào)為20120618，由天津市翔宇化工工貿(mào)有限責(zé)任公司提供;無水乙醇，分析純，生產(chǎn)批號(hào)為20150821，由天津市鳳船化學(xué)試劑科技有限公司提供;冰醋酸，分析純，生產(chǎn)批號(hào)為20160814，由天津市永晟精細(xì)化工有限公司提供。

1.3?分析樣品

喜馬拉雅大戟，藥材在2015年、2016年期間分別購自于購自成都，呼和浩特，西藏拉薩等地。經(jīng)內(nèi)蒙古醫(yī)科大學(xué)曲弼教授鑒定為大戟科植物喜馬拉雅大戟Euphorbia himalayensis Boiss.的干燥根。

2?方法與結(jié)果

2.1?藥材性狀

本品多為圓柱形或圓錐形，長(zhǎng)15～20 cm，直徑約4 cm，外表面灰褐色至深褐色，粗糙，多在頂部腫脹，具圓形莖痕，逐漸漸細(xì)向下，有縱直溝槽、橫孔和枝根痕。質(zhì)地堅(jiān)硬，不易折斷，折部為淡黃色。嘗起來又苦又澀。

2.2?鑒別

2.2.1?顯微鑒別?本品粉末為黃色和白色。淀粉粒較多，呈圓形。淀粉粒直徑為2～20 μm。淀粉粒有點(diǎn)狀或星狀的臍點(diǎn)，有分層的圖案，隱約可見，容易看到淀粉粒復(fù)粒和半復(fù)粒?？梢娭睆綖?8～80 μm的網(wǎng)狀導(dǎo)管核長(zhǎng)條形的乳管細(xì)胞，細(xì)胞內(nèi)含物呈黃色。木栓層可見長(zhǎng)多角形細(xì)胞。實(shí)驗(yàn)結(jié)果如圖1～4。

2.2.2?薄層鑒別?取本品粗粉約1 g，加入25 mL甲醇溶液，超聲處理30 min后濾過。取濾液置于蒸發(fā)皿中在水浴上蒸干后殘?jiān)? mL甲醇，溶解，作為供試品溶液。另取大戟二烯醇標(biāo)準(zhǔn)品適量，置于1 mL容量瓶中，加甲醇至刻度，制成濃度為0.2 mg/1 mL的溶液，作為對(duì)照品溶液。照薄層色譜法《中華人民共和國藥典》（四部）2015年版通則0502試驗(yàn)，吸取上述2種溶液各1 μL，分別點(diǎn)于同一硅膠G板上，以石油醚（30～60 ℃）-乙酸乙酯（10∶2）作為展開劑進(jìn)行展開后取出晾干，以10%硫酸乙醇溶液顯色，105 ℃烘干箱中烘至斑點(diǎn)顯色清晰。供試品色譜中，在與對(duì)照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點(diǎn)，實(shí)驗(yàn)結(jié)果如圖5～7。

2.3?檢查

本品為大戟科植物喜馬拉雅大戟根，屬于根類藥材，采集過程中很容易帶進(jìn)石子、泥土等非藥用部位。故正文參照《中華人民共和國藥典》（2015版）[4]，對(duì)其所含的雜質(zhì)、水分、總灰分、酸不溶性灰分進(jìn)行了限量檢查，從而控制藥材的非用藥部位，保證藥材的純度。

2.3.1?雜質(zhì)?參照《中華人民共和國藥典》（四部）2015版通則2301進(jìn)行雜質(zhì)檢查。取7批樣品，每批400 g，揀出非要用部分，篩分泥沙，分別稱重，計(jì)算其在樣品中的重量，結(jié)果見表1。

結(jié)果表明：7批樣品雜質(zhì)檢查在0.69%～2.55%之間，平均值為1.58%，故規(guī)定胡德日奈都日吉德雜質(zhì)檢查不得過3.0%。

2.3.2?水分?參照《中華人民共和國藥典》（四部）2015版通則0832中的第二方法，對(duì)7個(gè)批次的樣品進(jìn)行了水分含量測(cè)定，實(shí)驗(yàn)結(jié)果見表2。

從表2可知，胡德日奈都日吉德不同批次樣品中的水分含量限度在5.42%～7.75%之間，其平均值為6.72%。根據(jù)實(shí)際操作和實(shí)驗(yàn)結(jié)果，規(guī)定胡德日奈都日吉德水分含量不得過10%。

2.3.3?灰分?參照《中華人民共和國藥典》（四部）2015版通則2302，對(duì)7個(gè)批次的樣品中的總灰分和酸不溶性灰分進(jìn)行了測(cè)定，實(shí)驗(yàn)結(jié)果見表3～4。

從表3～4可知，胡德日奈都日吉德不同批次樣品中總灰分含量限度在2.66%～6.39%之間，其平均值為4.25%;酸不溶性灰分含量限度在1.11%～2.57%之間，平均值為1.72%。根據(jù)實(shí)際操作和實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)，規(guī)定胡德日奈都日吉德總灰分不得過7.0%，酸不溶性灰分不得過4.0%。

2.4?浸出物的測(cè)定

參照《中華人民共和國藥典》（四部）2015版通則2201中的冷浸法，對(duì)7批樣品的醇溶性浸出物進(jìn)行了含量測(cè)定，實(shí)驗(yàn)結(jié)果見表5。

從表5可知，胡德日奈都日吉德不同批次樣品中浸出物含量限制在1.24%～2.28%之間，其平均值為1.65%。根據(jù)實(shí)際操作和實(shí)驗(yàn)結(jié)果，規(guī)定胡德日奈都日吉德醇溶性浸出物不得少于1.0%。

2.5?總萜含量測(cè)定[5]

2.5.1?供試品溶液的制備?精密稱取胡德日奈都日吉德粉末（過四號(hào)篩）約0.2 g，精密稱定，置于錐形瓶中，加入100 mL甲醇，稱重，搖勻后超聲處理聲30 min，再稱重，以甲醇補(bǔ)足失重，既得。

2.5.2?對(duì)照品溶液的制備?取大戟二烯醇標(biāo)準(zhǔn)品適量，精密稱定，加入甲醇制成濃度為40 mg/L的溶液，即得。

2.5.3?標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制?精密量取對(duì)照品溶液0.10 mL、0.20 mL、0.40 mL、0.60 mL、0.80 mL，分別置于10 mL容量瓶中，在恒溫水浴中完全揮干溶劑后依次加入5%香草醛-冰醋酸溶液0.5 m置冷水中2 min后精密加入5 mL冰醋酸，搖勻。分別以相應(yīng)的試劑為空白，照分光光度法[《中華人民共和國藥典》（四部）2015年版通則0401]于545 nm處測(cè)定吸光度。以吸光度為縱坐標(biāo)（Y），對(duì)照品的濃度（mg/L）為橫坐標(biāo)（X），繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，得回歸方程：Y=0.012 3X+0.069 29（R2=0.999 4），表明對(duì)照品溶液在10.27～82.16 mg/L范圍內(nèi)與吸光度值之間呈良好線性關(guān)系。

2.5.4?精密度試驗(yàn)?精密吸取0.40 mL對(duì)照品溶液，按照“2.5.3”項(xiàng)下顯色方法顯色，測(cè)定吸光度，連續(xù)測(cè)定6次，實(shí)驗(yàn)結(jié)果見表6。從表6可知吸光度平均值為0.422，RSD為0.24%，表明儀器精密度良好。

2.5.5?穩(wěn)定性試驗(yàn)?精密吸取0.40 mL供試品溶液，按照“2.5.3”項(xiàng)下顯色方法顯色，每隔20 mim測(cè)定吸光度，測(cè)定2 h，實(shí)驗(yàn)結(jié)果見表7。從表7可知吸光度平均值為0.682，RSD為0.50%，表明供試品溶液在2 h內(nèi)穩(wěn)定，穩(wěn)定性良好。

2.5.6?重復(fù)性實(shí)驗(yàn)?精密稱取同一批供試品粉末6份，按“2.5.3”項(xiàng)下的提取方法和顯色方法提取和顯色，測(cè)定吸光，實(shí)驗(yàn)結(jié)果見表8。從表8可知吸光度平均值為0.685，RSD為1.71%，表明本方法重現(xiàn)性良好。

2.5.7?加樣回收率實(shí)驗(yàn)?精密稱取同一批供試品粉末6份，0.1 g/份，分別精密加入對(duì)照品溶液，按“2.5.3”項(xiàng)下方法提取、顯色，測(cè)定吸光度，實(shí)驗(yàn)結(jié)果見表9。從表9可知平均回收率為98.8%，RSD為0.36%，表明本方法準(zhǔn)確可靠。

2.5.8?樣品測(cè)定?精密吸取樣品溶液0.40 mL，按“2.6.3”項(xiàng)下方法顯色，測(cè)定吸光度，結(jié)果見表10，總萜含量在21.35～28.59 mg/g之間，均含量為25.69 mg/g，故規(guī)定胡德日奈都日吉德總萜含量不得少于20 mg/g。

3?討論

瀉下療法是蒙醫(yī)各種療法中頗具特色的療法[6]，是利用藥劑刺激消化道，通利大便，蕩滌胃腸，排除積滯，以促進(jìn)消化功能的一種療法，也是蒙醫(yī)祛除“希拉”病殘留的最為有效的方法[7-8]。具有臨床療效確切，不良反應(yīng)少的特點(diǎn)[9-11]。胡德日奈都日吉德是蒙醫(yī)臨床常用的導(dǎo)瀉藥，由于其臨床療效較為顯著，入味多種傳統(tǒng)復(fù)方制劑，但是其現(xiàn)代研究幾乎為零，化學(xué)成分、藥理藥效、質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)等從未研究過[12]。本研究主要參考《中華人民共和國藥典》（一部）2015年版中記載的大戟科藥材的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)及大戟科藥材的相關(guān)質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究報(bào)道[13]，結(jié)合胡德日奈都日吉德的蒙醫(yī)臨床用藥特征[14]，從藥材的性狀、顯微、檢查項(xiàng)和含量測(cè)定方面進(jìn)行了研究。實(shí)驗(yàn)過程中根據(jù)薄層鑒別的結(jié)果，以大戟二烯醇為標(biāo)志物進(jìn)行含測(cè)，結(jié)果沒有找到與大戟二烯醇相應(yīng)的峰值，故選擇了總萜含量。在實(shí)驗(yàn)過程中：

1）在顯色劑選用方面選擇了加入5%香草醛-冰醋酸溶液0.5 mL和加入高氯酸溶液0.6 mL的劑量，從而保證了吸光度的最大值。

2）在加熱溫度方面選擇了100 ℃水浴加熱，使其吸光度值最大。

3）在加熱時(shí)間方面選擇了30 min，獲得了一個(gè)最大吸收峰，從而避開了吸光度最大時(shí)出現(xiàn)相鄰2個(gè)峰現(xiàn)象。

本研究通過以上試驗(yàn)，初步為蒙藥材胡德日奈都日吉德的質(zhì)量控制范圍，建立了其質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)。為保證胡德日奈都日吉德及其復(fù)方制劑的臨床療效的均一性和穩(wěn)定性提供了參考依據(jù)。

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（2018-05-08收稿?責(zé)任編輯：蒼寧）