宋超 朱博（通訊作者）

（1 蚌埠醫(yī)學(xué)院第一附屬醫(yī)院胸外科 安徽 蚌埠 233000）

（2 蚌埠醫(yī)學(xué)院理學(xué)教研室/ 第一附屬醫(yī)院病理科 安徽 蚌埠 233000）

腺癌是肺癌最為常見的一種組織學(xué)類型，隨著現(xiàn)代社會(huì)不斷加快的生活節(jié)奏，人們養(yǎng)成各種不良生活習(xí)慣、環(huán)境的污染以及飲食結(jié)構(gòu)變化導(dǎo)致肺腺癌發(fā)病率逐年呈持續(xù)上升的趨勢(shì)。現(xiàn)目前，由于肺腺癌發(fā)病主要機(jī)制還未完全明確，造成早期診斷過程中不易確診，患者因未及時(shí)診治導(dǎo)致病情延誤，導(dǎo)致預(yù)后不太理想[1]。依照我國(guó)臨床診治現(xiàn)狀看來，還未發(fā)現(xiàn)有理想的腫瘤標(biāo)志物為臨床醫(yī)師確診病情提供較高的參考價(jià)值。本次研究應(yīng)用免疫組化染色方法（SP 法）檢查Napsin A、ERCC1、TTF-1、RRM1 等標(biāo)志物在肺腺癌中的表達(dá)，旨在探討Napsin A、TTF-1、ERCC1、RRM1等標(biāo)志物在肺腺癌中的表達(dá)及與臨床病理特征、預(yù)后的關(guān)系，具體分析如下。

1.資料與方法

1.1 一般資料

選取2014 年1—12 月在我院收治的23 例肺腺癌患者作為本次研究的觀察組，再選取同期收治的23 例肺腺癌旁正常組織患者作為本次研究的對(duì)照組。觀察組：男性10 例，女性13 例，年齡36 ～74 歲，平均年齡（55.42±5.49）歲。對(duì)照組：男性11 例，女性12 例，年齡37 ～75 歲，平均年齡（55.32±5.69）歲。本次研究納入患者均符合《中華醫(yī)學(xué)會(huì)肺癌臨床診療指南(2018版)》中相關(guān)診斷標(biāo)準(zhǔn)，患者對(duì)本次研究享有知情權(quán)，醫(yī)院倫理委員會(huì)對(duì)本次研究知情并批準(zhǔn)進(jìn)行。本次研究要對(duì)所有患者進(jìn)行隨訪，隨訪時(shí)間為6 個(gè)月～1 年，末次隨訪時(shí)間為2015 年12 月。兩組患者一般資料比較沒有顯著差異（P ＞0.05），具有可比性。

1.2 方法

使用10%中性甲醛對(duì)采集的所有組織標(biāo)本實(shí)施固定，而后實(shí)施脫水、包埋等處理，并將組織連續(xù)切片6 張，厚度應(yīng)維持在4μm，取一張切片應(yīng)用于HE染色，核實(shí)組織后再進(jìn)行病理學(xué)診斷，其余組織切片應(yīng)用于免疫組化染色。取切片將其放置于pH6.0 的0.01mmol/L 檸檬酸鈉緩沖液之中實(shí)施抗原修復(fù)，在水浴鍋之中煮20min 后將其取出，在經(jīng)過10min 冷卻之后再將其置入磷酸鹽緩沖液(PBS)進(jìn)行3 次沖洗，每次沖洗時(shí)間應(yīng)維持在3min 內(nèi)，而后再加入一抗（Napsin A 1：100、ERCC1 1：100、TTF-1 1：50、RRM1 1：50），溫度應(yīng)維持在4℃放置一夜，一夜后再將其置入PBS 進(jìn)行3 次沖洗，每次沖洗時(shí)間應(yīng)維持在3min 內(nèi)，而后加入第2 抗體，應(yīng)用免疫組織化學(xué)(En Vision)，溫度應(yīng)維持于37℃，30min 后，再將其置入磷酸鹽緩沖液進(jìn)行3 次沖洗，每次沖洗時(shí)間應(yīng)維持在3min 內(nèi)，DAB 顯色10min 后，使用蘇木精襯染、分化、藍(lán)化、脫水以及樹脂封片等[2]。

免疫組化染色方法結(jié)果判定：①陽(yáng)性染色定位：Napsin A定位于細(xì)胞質(zhì)，ERCC1、TTF-1 定位于細(xì)胞核，且均以棕黃色可以為陽(yáng)性表達(dá)信號(hào)，RRM1 為細(xì)胞漿；②評(píng)分標(biāo)準(zhǔn)：不著色＝0 分、黃色＝1 分、棕黃色＝2 分、黃褐色＝3 分。除此之外，陽(yáng)性細(xì)胞占比評(píng)分標(biāo)準(zhǔn)分為幾下幾類：＜10%＝0 分，10%～40%＝1 分，＞40%～＜70%＝2 分，≥70%＝3 分。2 種評(píng)分結(jié)果相加后如處于0 ～70%范圍內(nèi)的患者為2 分，≥70%的患者為3 分。兩者相加后如處于0 ～2 分為（-），3 ～6 分則為（＋），以上述標(biāo)準(zhǔn)對(duì)結(jié)果進(jìn)行評(píng)估。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

數(shù)據(jù)采用SPSS22.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件分析處理，計(jì)數(shù)資料采用率（%）表示，行χ2檢驗(yàn)，計(jì)量資料用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（±s）表示，行t 檢驗(yàn)，P ＜0.05 為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2.結(jié)果

2.1 兩組Napsin A、ERCC1、TTF-1、RRM1 等蛋白表達(dá)比較

結(jié)果顯示，肺腺癌患者中Napsin ARRMI 的陽(yáng)性表達(dá)率較肺腺癌旁正常組織患者更低（P ＜0.05）；ERCC1、TTF-1 在肺腺癌中呈高表達(dá)（P ＜0.05）；RRM1 在肺腺癌中則無顯著表達(dá)（P ＞0.05），見表1。

2.2 Napsin A、ERCC1、TTF-1、RRM1 的陽(yáng)性表達(dá)與年齡、性別以及分化程度之間的關(guān)系

Napsin A、ERCC1、TTF-1、RRM1 等表達(dá)與年齡、性別無相關(guān)性（P ＞0.05）；Napsin A 陽(yáng)性表達(dá)與不同分化程度患者呈正相關(guān)性，比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P ＜0.05）；RRM1 表達(dá)肺腺癌病理特征、預(yù)后無相關(guān)性（P ＞0.05），見表2。

表1 兩組Napsin A、ERCC1、TTF-1、RRM1 等蛋白表達(dá)比較[%(n/n)]

表2 Napsin A、ERCC1、TTF-1、RRM1 的陽(yáng)性表達(dá)與年齡、性別以及分化程度之間的關(guān)系(例)

2.3 單因素分析之Kaplan-Meier 法

單因素分析之Kaplan-Meier 法(生存分析)顯示，ERCC1 呈陽(yáng)性表達(dá)患者總生存率相較呈陰性表達(dá)患者而言更優(yōu)（P ＜0.05）。

3.討論

肺癌是臨床上一種常見的惡性腫瘤，肺腺癌屬于肺癌的組織學(xué)類型之一，發(fā)病率、病死率較高，不僅威脅人們身體健康，甚至?xí)苯游＜吧，F(xiàn)目前，臨床上對(duì)于肺癌的發(fā)病主要機(jī)制尚不完全明確，所以該病存在較高隱匿性、病情發(fā)展較快的特性，由于這一系列特性的干擾，導(dǎo)致臨床早期不易確診，促使患者預(yù)后較差。

Napsin A 屬于一種天冬氨酸蛋白酶，主要依附于人體肺部、腎臟的上皮細(xì)胞中。相關(guān)研究發(fā)現(xiàn)，Napsin A 在參與小鼠腎臟、脾臟及肺的生長(zhǎng)過程中，且在發(fā)育成熟過程中發(fā)育著較為重要的作用。除此之外，Napsin A 還參與疏水性肺表面活性物質(zhì)蛋白前體的蛋白水解過程，且在其中發(fā)揮著促進(jìn)蛋白前體成熟、維護(hù)肺部功能正常運(yùn)作及肺部形態(tài)的作用。從本次研究結(jié)果中可以看出，肺腺癌患者中Napsin A 的陽(yáng)性表達(dá)率較肺腺癌旁正常組織患者更低，Napsin A 陽(yáng)性表達(dá)與肺癌組織類型具有相關(guān)性，且與腫瘤細(xì)胞分化程度呈正相關(guān)性，低分化陽(yáng)性表達(dá)率為、中分化陽(yáng)性表達(dá)率為、低分化陽(yáng)性表達(dá)率為，主要機(jī)制可能與Napsin A 蛋白降低、缺乏，從而促使肺癌進(jìn)展，所以針對(duì)這一情況，我們認(rèn)為Napsin A 在肺腺癌中的表達(dá)可以將其作為一種判斷患者預(yù)后的依據(jù)。ERCC1 屬于核苷酸切除修復(fù)交叉互補(bǔ)基因，主要在人體19 號(hào)染色體上進(jìn)行表達(dá)，該基因編碼297 個(gè)氨基酸蛋白，與XPF 基因多態(tài)形成異源二聚體，并對(duì)DNA 單鏈?zhǔn)軗p處的5，端進(jìn)行有效剪切而發(fā)揮一定的功能[3-4]。從本次研究結(jié)果中可以看出，ERCC1 在肺腺癌中呈高表達(dá)，且ERCC1 呈陽(yáng)性表達(dá)患者總生存率相較呈陰性表達(dá)患者而言更優(yōu)。說明ERCC1 基因在肺腺癌組織中所呈現(xiàn)的高表達(dá)，使ERCC1 基因所產(chǎn)生的表達(dá)產(chǎn)物與DNA 修復(fù)酶缺乏互補(bǔ)基因F（XPF）形成緊密連接，從而形成ERCC1-XPF 異源二聚體，ERCC1-XPF 異源二聚體具有核酸內(nèi)聚酶功能，具有一定的特異性，可以有效連接5，端，同時(shí)對(duì)DNA 單鏈?zhǔn)軗p處進(jìn)行識(shí)別，必要時(shí)進(jìn)行有效剪切，從而避免患者發(fā)生癌變。TTF-1蛋白主要是在人體甲狀腺上皮、氣管纖毛柱狀上皮細(xì)胞以及間腦進(jìn)行表達(dá)，屬于細(xì)胞核蛋白的一種，是近幾年來臨床發(fā)現(xiàn)的新的腫瘤標(biāo)志物之一。TTF-1 蛋白主要參與了肺的整個(gè)生長(zhǎng)、發(fā)育以及分化過程，相關(guān)研究表明，TTF-1 蛋白的表達(dá)被局限于肺泡上皮細(xì)胞及毛細(xì)支氣管上皮內(nèi)，所以可以將其作為腫瘤及終末氣道細(xì)胞的標(biāo)志物，在臨床診斷腫瘤以及鑒別診斷過程中可以作為一種肺癌預(yù)后指標(biāo)。從本次研究結(jié)果可以看出，TTF-1 在肺腺癌中呈高表達(dá)，較肺腺癌旁正常組織陽(yáng)性表達(dá)明顯更高，這與以往的相關(guān)文獻(xiàn)所表達(dá)的相符合。相關(guān)研究表明，TTF-1 在肺腺癌組織中呈高表達(dá)的主要原因是，肺組織的發(fā)育會(huì)對(duì)TTF-1 有所影響，TTF-1 會(huì)隨著發(fā)育情況在支氣管、柱狀上皮中表達(dá)呈下降的趨勢(shì)，但是對(duì)于Ⅱ型肺泡上皮、Clara 細(xì)胞中仍呈高表達(dá)，這是由于大部分肺腺癌均是原子支氣管上皮周圍性肺癌，所以TTF-1 會(huì)在肺腺癌組織中呈高表達(dá)。除此之外，還要相關(guān)研究提出，TTF-1 蛋白表達(dá)與細(xì)胞增殖抗原(Ki67)表達(dá)呈負(fù)相關(guān)性，這表明TTF-1 如呈高表達(dá)，那癌細(xì)胞增值率則會(huì)較低，如此表明患者預(yù)后效果較佳[5]。研究結(jié)果顯示RRMI 蛋白表達(dá)與RRM1 表達(dá)肺腺癌病理特征、預(yù)后無相關(guān)性，推測(cè)可能存在抗體與蛋白異構(gòu)體識(shí)別特異性較差的問題，在這還需要優(yōu)化醫(yī)療技術(shù)進(jìn)行下一步論證RRM1 表達(dá)與肺腺癌預(yù)后的相關(guān)性。

綜上所述，Napsin A、TTF-1、ERCC1等標(biāo)志物與肺腺癌的發(fā)生、病情發(fā)展具有相關(guān)性，對(duì)三種標(biāo)志物進(jìn)行檢測(cè)，其表達(dá)水平的高低可以為臨床醫(yī)師評(píng)估患者的病情提供重要的參考信息，且利于判斷患者預(yù)后。