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        高效液相色譜法分析遵義引種的栝樓籽游離氨基酸含量

        2020-04-14 02:42:52梁光平楊俊陳榮華劉亮丁麗娜萬路平陳東林
        浙江農(nóng)業(yè)科學(xué) 2020年4期
        關(guān)鍵詞:栝樓原產(chǎn)地脯氨酸

        梁光平,楊俊,陳榮華,劉亮,丁麗娜,萬路平,陳東林*

        (1.遵義醫(yī)藥高等??茖W(xué)校 藥學(xué)系,貴州 遵義 563006;2.貴州省野生藥用植物資源持續(xù)利用協(xié)同創(chuàng)新中心,貴州 遵義 563006;3.遵義市農(nóng)業(yè)農(nóng)村局,貴州 遵義 563000)

        栝樓籽是葫蘆科植物栝樓(TrichosantheskirilowiiMaxim)的成熟干燥種子,又稱瓜蔞子、吊瓜子。性甘、寒,歸肺、胃、大腸經(jīng),具有潤肺化痰,滑腸通便的功效[1]。在江浙地區(qū),炒熟的栝樓籽也作為休閑品嘗的時尚禮品受到人們的喜愛,屬于新興的藥食同源品種。由于栝樓籽資源需求量越來越大,本課題組前期從浙江紹興引進(jìn)5個品種的栝樓籽到貴州遵義進(jìn)行育苗、栽培,并通過原產(chǎn)地與引種地栝樓籽所含藥效成分、微量元素、重金屬,以及總蛋白、多糖、脂肪等營養(yǎng)成分的分析,初步優(yōu)選出其中的2號栝樓籽(越蔞2號)為適宜在貴州遵義栽培的品種[2-4]。為進(jìn)一步探討該品種在貴州遵義栽培的可行性,本研究在前期研究的基礎(chǔ)上,對引種地越蔞2號及其原產(chǎn)地種子16種游離氨基酸的含量進(jìn)行了分析比較?,F(xiàn)將結(jié)果報道如下。

        1 材料與方法

        1.1 材料

        原產(chǎn)地越簍2號栝樓籽由浙江省紹興市農(nóng)業(yè)科學(xué)研究院提供,將該種子引種至貴州省遵義市,經(jīng)過育苗、栽培、采收加工和干燥等工序即得引種地栝樓籽。

        安捷倫公司16種氨基酸混合對照品,包括苯丙氨酸、谷氨酸、亮氨酸、精氨酸、天門冬氨酸、絲氨酸、纈氨酸、酪氨酸、蘇氨酸、甘氨酸、組氨酸、蛋氨酸、賴氨酸、丙氨酸、異亮氨酸、脯氨酸。異硫氰酸苯酯、三乙胺、乙腈、醋酸、正己烷等試劑均為分析純,未經(jīng)進(jìn)一步純化處理直接使用。

        液相色譜系統(tǒng)(LC-2030,日本島津公司),超聲波清洗儀(QTSXR10260,天津瑞普生物技術(shù)股份有限公司),原位冷凍干燥機(jī)(SCIENTZ-100F,寧波新芝生物科技股份有限公司),電子天平(ATY224,日本島津公司),超純水儀(WP-UP-WF-30,四川沃特爾水處理設(shè)備有限公司)。

        1.2 方法

        1.2.1 供試液的制備

        游離氨基酸樣品溶液的制備:精密稱取引種地栝樓籽粉末1.0 g,加水20 mL浸泡2 h后,超聲提取1 h,抽濾,濾液采用冷凍干燥法進(jìn)行干燥,加水定容至10 mL備用。

        樣品衍生:參照文獻(xiàn)[5]的方法并稍作修改,吸取樣品1 mL于10 mL容量瓶中,加水定容至刻度,從中取500 μL稀釋后置于具塞試管中,加入異硫氰酸苯酯的乙腈溶液250 μL,三乙胺-乙腈溶液250 μL,搖勻,室溫放置1 h后,加入50 μL醋酸,搖勻。

        萃取凈化:向上述衍生后的溶液中加入1.0 mL正己烷,渦旋混合器振蕩1 min,靜置分層后,棄去上層正己烷溶液,重復(fù)此操作2次,合并下層溶液,用0.45 μm濾膜過濾,濾液用于液相色譜測定。

        原產(chǎn)地栝樓籽和16種氨基酸混合對照品溶液按照相同的方法進(jìn)行處理。以不加樣品的溶液空白為對照。

        1.2.2 色譜條件

        PhenomenexTMC18(250 mm×4.6 mm,5 μm)色譜柱,流動相A(無水硫酸鈉+三乙胺混合水溶液)與流動相B(甲醇-乙腈-水)根據(jù)文獻(xiàn)[5]的方法進(jìn)行配制。檢測波長為254 nm,進(jìn)樣量10 μL,柱溫30 ℃。

        2 結(jié)果與分析

        對引種地和原產(chǎn)地栝樓籽的氨基酸成分進(jìn)行比較,結(jié)果如表1所示。2個樣品都檢測出了16種游離氨基酸,引種地與原產(chǎn)地栝樓籽游離氨基酸相對含量均超過5.0%的有脯氨酸、精氨酸、谷氨酸、亮氨酸、苯丙氨酸、甘氨酸、丙氨酸等7種,其中以脯氨酸的相對含量最高,均超過了30%。2種栝樓籽樣品中16種氨基酸的相對含量基本一致。引種地栝樓籽必需氨基酸占總氨基酸的21.92%,原產(chǎn)地的占20.77%,兩者百分比也基本接近。在引種地栝樓籽中,有13種游離氨基酸的含量高于原產(chǎn)地栝樓籽樣品,丙氨酸、異亮氨酸、脯氨酸的含量低于原產(chǎn)地栝樓籽。其中,脯氨酸的相對含量降低最明顯,下降了2.94百分點。

        表1 引種地與原產(chǎn)地16種游離氨基酸含量

        注:*為必需氨基酸,含量變化為引種地相對含量減去原產(chǎn)地相對含量。

        3 小結(jié)

        藥用植物引種既保護(hù)了瀕危植物,又確保了藥用植物可持續(xù)利用,還在一定程度上解決了由于產(chǎn)地局限造成的資源緊張[6]。本文研究的栝樓籽是從浙江紹興引種至貴州遵義,屬跨域引種,該引種方式具有較強(qiáng)的探索性。同時也對引種研究者在評價引種藥材質(zhì)量方面提出了更高的要求。引種地栝樓籽16種游離氨基酸的相對含量與原產(chǎn)地栝樓籽的含量基本一致,說明在貴州遵義引種栽培的栝樓籽與原產(chǎn)地區(qū)的差異不明顯,表明越蔞2號栝樓可以在貴州遵義地區(qū)進(jìn)行大量栽培。

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