孫康迪，柳青云，方詠青，程子凱，李富桂

（天津農(nóng)學(xué)院 動(dòng)物科學(xué)與動(dòng)物醫(yī)學(xué)學(xué)院，天津 300384）

犬瘟熱俗稱犬瘟、狗瘟，是由犬瘟熱病毒引起的一種高度接觸性傳染病，傳染性強(qiáng)，傳染率可高達(dá) 80%以上。臨床上以雙相體溫升高、急性鼻卡他和隨后的支氣管炎、卡他性肺炎、嚴(yán)重胃腸炎和神經(jīng)癥狀為特征。犬瘟熱最早被發(fā)現(xiàn)于18世紀(jì)后葉，1905年卡爾（Carre）發(fā)現(xiàn)其病原為一種病毒，所以此病也曾被稱為 Carre病。我國于1980年首次分離獲得此病毒。犬瘟熱是對當(dāng)前養(yǎng)犬業(yè)和毛皮動(dòng)物養(yǎng)殖業(yè)危害最大的疫病之一。

免疫促進(jìn)劑又稱免疫增效劑或免疫增強(qiáng)劑，能增強(qiáng)或調(diào)節(jié)機(jī)體體液免疫和細(xì)胞免疫的作用。黃芪多糖在抗腫瘤和抗感染方面具有顯著的免疫調(diào)節(jié)作用[1]。靈芝多糖具有免疫調(diào)節(jié)、抗腫瘤、降血糖、降血脂、解毒、抗病毒、抗細(xì)菌、抗輻射等廣泛作用[2]。轉(zhuǎn)移因子作為機(jī)體白細(xì)胞中有免疫活性的T淋巴細(xì)胞所釋放的一種能夠轉(zhuǎn)移免疫致敏信息的因子，能特異性和非特異性地增強(qiáng)受體的免疫應(yīng)答能力[3]。為探究免疫促進(jìn)劑對犬瘟熱（CDV）免疫效果的影響，本試驗(yàn)選用轉(zhuǎn)移因子、黃芪多糖和靈芝多糖3種免疫促進(jìn)劑，通過（CDV-Ab）ELISA試劑盒測定犬瘟熱抗體效價(jià)，比較試驗(yàn)組與對照組免疫效果的差異，從而篩選出臨床上與預(yù)防犬瘟熱疫苗聯(lián)合使用的最佳免疫促進(jìn)劑。

1 材料

1.1 試驗(yàn)動(dòng)物

12只體型均等的2月齡健康幼犬，購于天津某狗場，免疫過1次國產(chǎn)五聯(lián)苗。

1.2 疫苗及試劑

美國輝瑞的衛(wèi)佳捌疫苗（20180305）；轉(zhuǎn)移因子（20180508）；黃芪多糖（商品名免疫多肽20180706）、靈芝多糖（商品名免疫多糖膏20180608），均由天津農(nóng)學(xué)院獸醫(yī)病理學(xué)實(shí)驗(yàn)室提供；犬瘟熱ELISA試劑盒（批號20181216），購自上海恒遠(yuǎn)生物科技有限公司。

2 方法

2.1 試驗(yàn)動(dòng)物分組與給藥

每條犬采血后皮下注射美國輝瑞的衛(wèi)佳捌八聯(lián)疫苗，然后將12只犬隨機(jī)分為4組，每組3只，即A、B、C組為轉(zhuǎn)移因子組、黃芪多糖組、靈芝多糖組，D組為對照組。

免疫后，A組每只犬口服1 mL轉(zhuǎn)移因子；B組每只犬口服0.1 g/mL黃芪多糖；C組每只犬口服1 mL靈芝多糖；D組每只犬口服1 mL生理鹽水。

2.2 抗體效價(jià)檢測

使用犬瘟熱病毒抗體（CDV-Ab）ELISA試劑盒對犬瘟熱的抗體效價(jià)進(jìn)行測定，并制圖分析。

2.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析

采用 SPSS 20.0 軟件對試驗(yàn)數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，試驗(yàn)數(shù)據(jù)以“平均值±標(biāo)準(zhǔn)誤”表示，采用單因子方差分析進(jìn)行均值間多重比較，比較試驗(yàn)組與對照組抗體效價(jià)的差異性，0.01＜P＜0.05表示差異顯著，P＜0.01表示差異極顯著。

3 結(jié)果

3.1 犬瘟熱抗體效價(jià)檢測結(jié)果

由表1可知，轉(zhuǎn)移因子組和黃芪多糖組在第二天采血時(shí)，抗體效價(jià)就與對照組有顯著差異，且一直保持增長趨勢，在第四天采血時(shí)抗體效價(jià)與對照組有極顯著差異；靈芝多糖組在第四天采血時(shí)，抗體效價(jià)就與對照組有極顯著差異。由以上結(jié)果可以得出，轉(zhuǎn)移因子的免疫促進(jìn)效果最佳，其次是黃芪多糖、靈芝多糖。

表1 犬瘟熱抗體效價(jià)變化及其差異性分析

3.2 試驗(yàn)組與對照組在不同時(shí)間抗體效價(jià)的變化

未使用免疫增效劑的對照組在第四天采血時(shí)，增長速度比較緩慢，與A、B、C 3組顯示出明顯差異。A、B、C 3組試驗(yàn)組均在第六天時(shí)抗體效價(jià)達(dá)到最高，之后與對照組一樣，抗體效價(jià)逐漸降低，見圖1。

圖1 各組抗體效價(jià)的變化

4 討論

本試驗(yàn)中轉(zhuǎn)移因子、黃芪多糖、靈芝多糖均對犬瘟熱病毒免疫具有增強(qiáng)作用，但轉(zhuǎn)移因子的免疫增強(qiáng)效果優(yōu)于黃芪多糖，黃芪多糖優(yōu)于靈芝多糖。劉霞等在轉(zhuǎn)移因子對家禽疫病防控的應(yīng)用中闡明，轉(zhuǎn)移因子是動(dòng)物白細(xì)胞中具有免疫活性的 T淋巴細(xì)胞所釋放的具有免疫功能的透析物質(zhì)[4]。鮑玉林等在研究黃芪多糖對舍飼藏羊生長性能和免疫功能的影響中證實(shí)，黃芪多糖能顯著提高舍飼藏羊的生長性能和免疫功能[5]。李琴等證實(shí)了黃芪多糖對血管緊張素Ⅱ誘導(dǎo)心肌肥大的作用[6]。陳文華等闡明了靈芝多糖在抗腫瘤、調(diào)節(jié)免疫、抗糖尿病、保護(hù)肝臟、保護(hù)心肌細(xì)胞、抗癲癇、抗輻射等方面起作用[7]。成杰等研究發(fā)現(xiàn)，轉(zhuǎn)移因子（TF）在臨床上對活疫苗和油乳劑滅活苗均有很好的協(xié)同作用，能增強(qiáng)機(jī)體細(xì)胞免疫，促進(jìn)抗體快速產(chǎn)生和高峰期的維持，提高疫苗抗體滴度，可通過半透膜，不被胃蛋白酶、胰蛋白酶、DNA酶、RNA酶等分解[8]。李磊等闡明，中藥免疫增效劑低毒、無殘留、無污染且在提高動(dòng)物免疫力、增強(qiáng)動(dòng)物抗病性等方面具有重要的應(yīng)用價(jià)值[9]。王奇等證實(shí)免疫增強(qiáng)劑具有增強(qiáng)免疫系統(tǒng)功能、提高機(jī)體抗病能力的作用，從而使動(dòng)物健康生長[10]。楊美璐等證實(shí)，靈芝多糖具有增強(qiáng)免疫力、抗氧化、抗腫瘤、降血糖和降血脂等功效[11]。路德成證實(shí)不同添加水平的黃芪多糖均能改善新城疫疫苗的免疫效果[12]。鄭新新等證實(shí)黃芪多糖在體內(nèi)外均具有顯著的免疫調(diào)節(jié)作用[13]。以上研究均表明，免疫增效劑具有廣闊的應(yīng)用前景。本試驗(yàn)發(fā)現(xiàn)轉(zhuǎn)移因子、黃芪多糖、靈芝多糖對犬瘟熱病毒疫苗免疫具有顯著的增強(qiáng)作用，為進(jìn)一步防控該病提供了參考依據(jù)。