李玉華　楊巍

【摘要】自閉癥（autism spectrum disorder，ASD）是一種常見的兒童神經(jīng)發(fā)育紊亂性疾病。miR-146b-5p是一種ASD相關(guān)miRNA。本項(xiàng)目旨在研究miR-146b-5p在肥胖孕婦血清中的表達(dá)及其對神經(jīng)細(xì)胞生長的影響。

【關(guān)鍵詞】自閉癥;肥胖孕婦;血清miR-146b-5p;神經(jīng)細(xì)胞生長

一研究對象

肥胖組標(biāo)準(zhǔn)：孕婦BMI≥25kg/m²，平均年齡31.2±4.8歲;對照組：相同年齡段，健康孕婦BMI≥18.5～24.9 kg/m²，每組各15例。

二研究方法

提取肥胖組和對照組血清總nuRNA，采用定量PCR法檢測miR-146b-5p的相對表達(dá)量。退火溫度為60℃，引物序列見表1。將miR-146b-5p模擬物和陰性模擬物分別轉(zhuǎn)染到轉(zhuǎn)染組和陰性組，對照組加入等體積無血清培養(yǎng)基。轉(zhuǎn)染24h后，將各組細(xì)胞接種到96孔板中，分別在第1d、3d、5d、7d檢測各孔吸光值。轉(zhuǎn)染72h后，收集三組細(xì)胞，使用流式細(xì)胞儀檢測三組細(xì)胞的凋亡百分率。采用SPSS16.1分析，計(jì)數(shù)資料采用（x±s）表示，并采用單因素方差分析，P<0.05表示差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

表1.引物序列

三結(jié)果

1.血清miR-146b-5p的表達(dá)肥胖組和對照組孕婦血清中miR-146b-5p的表達(dá)量分別是7.015±1.16和1.60±0.11，差異有顯著性（P<0.01）。

2.m1R-146b-5p過表達(dá)對SH-SY5Y細(xì)胞增殖的影響miR-146b-5p轉(zhuǎn)染后，細(xì)胞生長曲線呈下降趨勢，而對照組和陰性組的細(xì)胞生長曲線呈現(xiàn)上升趨勢（圖1）。

圖1 細(xì)脆生長曲線

3.miR-146b-5p過表達(dá)對細(xì)胞凋亡的影響轉(zhuǎn)染72h后，轉(zhuǎn)染組細(xì)胞百分率為8.21±0.52，對照組和陰性組的細(xì)胞凋亡百分率為11.74±1.27和10.28±1.16，三組之間差異無顯著性（p>0.05）。

四討論

本試驗(yàn)結(jié)果顯示，肥胖孕婦血清中miR-146b-5p的表達(dá)明顯高于對照組，與Mundalil等的發(fā)現(xiàn)相一致。而且miR-146b-5p過表達(dá)能夠抑制神經(jīng)細(xì)胞的生長，但不影響細(xì)胞的凋亡，提示miR-146b-5p的生長抑制作用與誘導(dǎo)凋亡無關(guān)。這一結(jié)果與多個(gè)研究相一致。

對于自閉癥的早期診斷，目前尚缺乏統(tǒng)一的、確定的診斷指標(biāo)。本研究的結(jié)果提示miR-146b-5p有可能成為預(yù)測自閉癥發(fā)生風(fēng)險(xiǎn)的指標(biāo)之一。關(guān)于miR-146b-5p如何影響神經(jīng)細(xì)胞發(fā)育及其具體機(jī)制將是我們后續(xù)的研究重點(diǎn)。