蘭 慧,陽 敬**,李姝梅,趙榮華
(1. 紅河衛(wèi)生職業(yè)學(xué)院藥學(xué)院 蒙自 661199;2. 云南中醫(yī)藥大學(xué)中藥學(xué)院 昆明 650500)
大黃素(Emodin)是一種重要的天然藥物成分,化學(xué)名為1,3,8-三羥基-6-甲基蒽醌(1,3,8-trihydroxy-6-methylanthra quinone)屬蒽醌類成分[1],大黃素又稱朱砂蓮甲素[2],主要來源于蓼科的大黃、何首烏、虎杖以及豆科的決明等植物中,是大黃、何首烏藥材的質(zhì)量控制成分。大黃素在多種植物中含量高,提取精制容易,具有抗菌、抑制免疫、解痙、止咳和抗癌等藥理作用[2]。為了進(jìn)一步提高大黃素生物活性,發(fā)現(xiàn)新用途,近年來,國內(nèi)外以大黃素作為前體藥進(jìn)行化學(xué)結(jié)構(gòu)修飾,設(shè)計(jì)合成了許多活性較好的大黃素衍生物。
近年來,生物轉(zhuǎn)化方法具有選擇性強(qiáng)、副產(chǎn)物少,反應(yīng)條件溫和,污染環(huán)境小等特點(diǎn),已成為結(jié)構(gòu)修飾的重要手段。微生物轉(zhuǎn)化技術(shù)與化學(xué)轉(zhuǎn)化相比,無論在轉(zhuǎn)化速度還是轉(zhuǎn)化質(zhì)量等方面均表現(xiàn)出了顯著優(yōu)勢,被廣泛應(yīng)用于天然藥物成分的合成轉(zhuǎn)化和代謝機(jī)理研究[3],生物轉(zhuǎn)化也稱發(fā)酵。目前,中藥成分的微生物發(fā)酵轉(zhuǎn)化技術(shù)是人類獲得結(jié)構(gòu)新穎、獨(dú)特、低成本、低毒性和高活性藥物的重要途徑之一[4]。發(fā)酵應(yīng)用于中藥,能利用微生物分解轉(zhuǎn)化能力,改變中藥原有性能,增強(qiáng)或產(chǎn)生新的功效,擴(kuò)大用藥品種,使得中藥更適應(yīng)于臨床用藥的需要[5]。
中藥微生物發(fā)酵主要有2 種方式:固體發(fā)酵和深層發(fā)酵(液體發(fā)酵)。固體發(fā)酵是指利用微生物在潮濕的沒有自由流動(dòng)水的固體基質(zhì)上生長代謝的技術(shù)[6-7]。固體發(fā)酵歷史悠久,是一種比較成熟的發(fā)酵方式,操作和所需設(shè)備簡單[8]。如以玉米為底物,采用Shiraia sp.SUPER-H168進(jìn)行固體發(fā)酵,能夠大量產(chǎn)生竹紅菌素A[9]。秦俊哲等[10]用中藥渣代替?zhèn)鹘y(tǒng)原料進(jìn)行靈芝固體發(fā)酵,發(fā)現(xiàn)其固體菌絲中多糖含量和氨基酸含量都大大提高,不僅提高了藥效,而且節(jié)約了藥用資源。國外固態(tài)發(fā)酵在酶的生產(chǎn)[11-13]等方面己顯示了良好的應(yīng)用前景。近年來,對(duì)固態(tài)發(fā)酵原理和應(yīng)用的研究使得清潔、節(jié)能的固態(tài)發(fā)酵已然成為發(fā)酵工業(yè)的關(guān)注熱點(diǎn)[14]。固態(tài)發(fā)酵已引起很大的重視,因?yàn)檫@種生物過程可有效地轉(zhuǎn)換廉價(jià)的農(nóng)工業(yè)廢渣、植物和各種各樣有價(jià)值的化合物[15]。由于藥物具有不同的特性,因此,研究人員能夠根據(jù)藥物之間的差異性進(jìn)行有目的的組合,采用單一或混合菌種來進(jìn)行微生物的定向發(fā)酵,或定向改變藥物的性能[16]。
我國早在4000 多年前就開始將真菌轉(zhuǎn)化食品和中藥炮制等。中國傳統(tǒng)的中藥,如六神曲、淡豆豉、半夏曲、紅曲、豆黃等,均是通過利用自然界的微生物(如霉菌、酵母等)固態(tài)轉(zhuǎn)化后而形成的藥物。我國是世界上最早直接利用真菌防病治病的國家,早在東漢年間的《神農(nóng)本草經(jīng)》中就有靈芝、茯苓、豬苓、雷丸等藥用真菌分別列項(xiàng)論述,至今沿用不衰。真菌具有分解纖維素、淀粉、蛋白質(zhì)、脂類等營養(yǎng)物質(zhì)的強(qiáng)大酶類,對(duì)天然培養(yǎng)基有較強(qiáng)的分解利用能力[17]。目前,單株菌應(yīng)用于中藥比較多見,如游松等[18]采用多個(gè)菌株對(duì)白藜蘆醇苷進(jìn)行發(fā)酵轉(zhuǎn)化研究,篩選后獲得一株絲狀真菌Syncephalastrum racemosum3.264,該菌能將白藜蘆醇苷高效轉(zhuǎn)化為白藜蘆醇,純化后白藜蘆醇純度高達(dá)98%。董悅生等[19]利用哈茨木霉CGMCC 2979直接轉(zhuǎn)化藥材,將梔子中的京尼平苷轉(zhuǎn)化為京尼平,48 h京尼平苷的轉(zhuǎn)化率為97.8%。馬超等[20]用酵母轉(zhuǎn)化大黃結(jié)合型蒽醌得到游離型蒽醌,從而減輕大黃的峻烈瀉下作用。杜晨暉等[21]用米根霉生物轉(zhuǎn)化何首烏及大黃素得到化合物大黃素-6-O-β-D-吡喃葡萄糖苷,并發(fā)現(xiàn)后者抑菌效果比前者好。朱培芳等[22]運(yùn)用從生長何首烏的土壤中分離的一株鐮孢霉屬(Fusarium)菌株轉(zhuǎn)化何首烏及大黃素得到化合物ω-羥基大黃素。
混合菌廣泛存在于大自然中,是一類重要的微生物,對(duì)藥物的生物轉(zhuǎn)化作用強(qiáng)大,且生物轉(zhuǎn)化作用機(jī)理比單株菌復(fù)雜,是多環(huán)節(jié)對(duì)多成分的作用,越來越受到人們的關(guān)注。目前,單株菌應(yīng)用于中藥及化學(xué)成分比較多見,而混合菌應(yīng)用于中藥及化學(xué)成分的研究相對(duì)較少。許多化學(xué)過程通過單酶(細(xì)胞)一步生物催化反應(yīng)往往無法實(shí)現(xiàn),因而目前生物催化已從先前單酶(細(xì)胞)催化體系向著多酶(細(xì)胞)耦合催化體系的方向發(fā)展,構(gòu)建和利用這種體系,在同一反應(yīng)器中自由組合不同的生物反應(yīng)過程將是下一代工業(yè)生物催化技術(shù)發(fā)展所面臨的挑戰(zhàn)之一。
混合菌用于纖維素發(fā)酵已取得一定的研究成果。謝瓊霞等[23]利用多種分解纖維素的菌種進(jìn)行混合發(fā)酵甜高粱秸稈可使其降解率最高,糖化率達(dá)到3.19 mg·mL-1。張建強(qiáng)等[24]用混合菌發(fā)酵可提高纖維素的降解能力,從土壤樣品中分離、篩選出一組對(duì)纖維素具有高效降解作用的混合菌,初步鑒定為毛霉菌(Mucor sp.)和曲霉菌(Aspergillus sp.)。魏培蓮[25]運(yùn)用土曲霉和紅曲霉混合固態(tài)發(fā)酵,提高固態(tài)基質(zhì)中的生物量和洛伐他汀的產(chǎn)量?;旌暇糜谥兴幇l(fā)酵已有相關(guān)報(bào)道,石鴻輝等[7]以黑曲霉、產(chǎn)朊假絲酵母、枯草芽孢桿菌為發(fā)酵菌種進(jìn)行固態(tài)好氧發(fā)酵,在相同條件下比較單一菌種或混菌組合對(duì)辣木莖葉粉的營養(yǎng)成分、抗?fàn)I養(yǎng)成分及抗氧化活性的影響。結(jié)果表明,混菌發(fā)酵的效果優(yōu)于單一菌種。此外,還有一些專利如中藥多菌種混合發(fā)酵口服液的配制及其生產(chǎn)工藝,中藥多菌種混合固態(tài)發(fā)酵技術(shù)及其應(yīng)用。
目前,對(duì)單菌與混合菌生物轉(zhuǎn)化大黃素的比較研究鮮有報(bào)道,本研究將單菌與混合菌固態(tài)生物轉(zhuǎn)化大黃素進(jìn)行比較研究,為提高中藥材中大黃素微生物轉(zhuǎn)化產(chǎn)率提供一種選擇,為大黃素單菌與混合菌轉(zhuǎn)化奠定一定的數(shù)據(jù)支持與理論基礎(chǔ),為大黃素及中藥材中大黃素微生物轉(zhuǎn)化提供一種新的思路。
菌種58 株,26 組混合菌(由云南大學(xué)微生物研究所提供44 株,由成都微生物研究所提供1 株,由本實(shí)驗(yàn)室提供8 株,由自行分離提供5 株,本實(shí)驗(yàn)室保存的菌株)?;罨蠼臃N到PDA 斜面培養(yǎng)基,0℃-4℃保存。
大黃素標(biāo)準(zhǔn)品(批號(hào)0756-200110,中國藥品生物制品檢定所);大黃素(批號(hào)為060803,純度為98.07%,西安中鑫生物技術(shù)有限公司);ω-羥基大黃素(實(shí)驗(yàn)室分離,純度達(dá)到95%);麩皮(市售)。高效液相色譜儀(Dionex Ultimate 3000 系列,USA):Dionex P680 四元梯度泵、Dionex ASI-100 自動(dòng)進(jìn)樣系統(tǒng)、Dionex PDA-100 二極管陣列檢測器、Dionex LPG-3400 真空在線脫氣機(jī)、Dionex TCC-100 柱溫箱、Chromeleon 6.8色譜工作站;島津十萬分之一電子天平(Auw220D,島津國際貿(mào)易(上海)有限公司);SK7210HP 超聲振蕩器(上??茖?dǎo)超聲儀器有限公司);Agilent TC-C18(4.6 × 250 mm,5 μm,USA)。
1.3.1 斜面培養(yǎng)基
斜面培養(yǎng)基:馬鈴薯20%,葡萄糖2.0%,瓊脂1.5%,pH自然。
1.3.2 發(fā)酵種子培養(yǎng)基
發(fā)酵種子培養(yǎng)基:馬鈴薯20%,葡萄糖2.0%,pH自然。
1.3.3 發(fā)酵培養(yǎng)基
發(fā)酵培養(yǎng)基:大黃素0.25%,麩皮99.75%,pH自然。
1.4.1 大黃素對(duì)照品及ω-羥基大黃素對(duì)照品標(biāo)準(zhǔn)曲線的制作
分別精密稱取大黃素對(duì)照品,ω-羥基大黃素對(duì)照品,加適量甲醇溶解,定容后作為對(duì)照品溶液。大黃素、ω-羥基大黃素對(duì)照品溶液的濃度分別為0.28 mg·mL-1、0.342 mg·mL-1。根據(jù) 2015 年版《中華人民共和國藥典》HPLC 測定大黃素的方法,并建立HPLC 測定大黃素及ω-羥基大黃素的方法學(xué)考察,大黃素對(duì)照品的標(biāo)準(zhǔn)曲線為Y = 57670X-2.6751,相關(guān)系數(shù)為0.9999,線性范圍(mg)為2.8 × 10-3-8.4 × 10-3;ω-羥基大黃素對(duì)照品的標(biāo)準(zhǔn)曲線為Y = 61316X + 1.0387,相關(guān)系數(shù)為0.9999,線性范圍(mg)為1.71×10-5-3.42×10-3。
1.4.2 大黃素和大黃素發(fā)酵物中大黃素、ω-羥基大黃素含量測定方法
樣品處理:稱取上述大黃素轉(zhuǎn)化產(chǎn)物1.0 g 加入10 mL 甲醇,稱重,超聲振蕩30 min,甲醇補(bǔ)足重量,搖勻,濾紙過濾,棄去初濾液,取續(xù)濾液,以0.45 μm 濾膜濾過,取過濾液作為測定大黃素固態(tài)轉(zhuǎn)化樣品的供試品溶液。按上述方法,同時(shí)制備不加入大黃素的陰性空白對(duì)照品溶液。
大黃素、ω-羥基大黃素含量測定:利用Dionex Ultimate 3000自動(dòng)進(jìn)樣器的自動(dòng)吸液-混合-進(jìn)樣功能(Draw-Mix-Inject),吸取樣品液,然后吸取純甲醇液適量,按色譜條件流動(dòng)相:A:甲醇,B:0.1%磷酸溶液,流速:1 mL·min-1,柱溫:30℃,檢測波長:254 nm,記錄時(shí)間:25 min 測定,使進(jìn)樣量保持在20 μL,各個(gè)成分制備6 個(gè)濃度點(diǎn)(n=6),每個(gè)濃度進(jìn)樣兩次。以峰面積(Area)為縱坐標(biāo),進(jìn)樣量(mg)為橫坐標(biāo),回歸計(jì)算各個(gè)標(biāo)準(zhǔn)品的標(biāo)準(zhǔn)方程及其相關(guān)系數(shù),計(jì)算大黃素、ω-羥基大黃素含量。
挑取一環(huán)新鮮斜面菌種,接種于已經(jīng)高壓滅菌的裝有100 mL 種子培養(yǎng)基的250 mL 三角瓶中,其中28℃,110 rpm 搖床培養(yǎng)96 h 作為種子;按10%的種子液(單菌加入10%的種子液,混合菌中兩株菌各加入5%),接種量將種子培養(yǎng)液接入裝有已經(jīng)高壓滅菌的大黃素25 mg、麩皮10 g,的500 mL 三角瓶中,于無菌操作條件下加入8 mL 水,用無菌鋼鏟充分?jǐn)嚢杈鶆颉M瑫r(shí),按上述方法制備不接菌的大黃素培養(yǎng)基作為空白對(duì)照,按上述方法制備接菌不加大黃素培養(yǎng)基作為菌株陰性空白對(duì)照,將待轉(zhuǎn)化樣品、空白對(duì)照品及菌株陰性空白對(duì)照放入生化培養(yǎng)箱或恒溫培養(yǎng)箱中,在28℃條件下培養(yǎng)至轉(zhuǎn)化物由棕黃色變棕紅色,菌絲布滿整個(gè)轉(zhuǎn)化物表面及瓶底時(shí),將三角燒瓶從恒溫培養(yǎng)箱中取出,培養(yǎng)時(shí)間為120 h。
將大黃素發(fā)酵提取物、標(biāo)準(zhǔn)品大黃素、ω-羥基大黃素點(diǎn)樣于硅膠板上,分別以大黃素轉(zhuǎn)化產(chǎn)物展開劑乙酸乙酯:甲醇:甲酸(15∶1∶0.5),氯仿:甲醇:甲酸(9∶1∶0.5),環(huán)己烷:甲醇:甲酸(1∶1∶0.5)為展開劑展開,在365 nm紫外燈下檢視[26]。
按上述色譜條件進(jìn)樣,測得不同固態(tài)轉(zhuǎn)化的各樣品ω-羥基大黃素、大黃素的含量。計(jì)算公式[27]為大黃素投料量的折算值=大黃素投料量×(空白不加菌對(duì)照品的測得量/空白不加菌對(duì)照品的投料量);ω-羥基大黃素的生成率=ω-羥基大黃素的量/大黃素投料量的折算值× 100%;大黃素的轉(zhuǎn)化率=(總大黃素量-剩余大黃素量)/大黃素投料量的折算值×100%。
用58 株菌對(duì)大黃素進(jìn)行固態(tài)轉(zhuǎn)化,有57 株已轉(zhuǎn)化大黃素,39 株能轉(zhuǎn)化生成ω-羥基大黃素,所以只對(duì)已轉(zhuǎn)化的產(chǎn)物進(jìn)行分析。34 株轉(zhuǎn)化產(chǎn)物ω-羥基大黃素生成率越大,大黃素轉(zhuǎn)化率也越大,5 株菌YIM39335、YIM3088、YIM3210、YIM3015 和 YZ3.62例外。
本實(shí)驗(yàn)是為了尋找大黃素轉(zhuǎn)化率高的菌株組合,并考察組合混合菌的各單菌之間是否存在協(xié)同作用,所以只對(duì)轉(zhuǎn)化率高的混合菌與組合混合菌的各單菌比較(表1、圖1)。
在29組混合菌固態(tài)轉(zhuǎn)化產(chǎn)物中,轉(zhuǎn)化產(chǎn)物的大黃素轉(zhuǎn)化率最高的7 組混合菌分別為YIM321801:YIM3088、YIM321801:YIM3058、YZ3.41:YIM321812、YIM3234: YZ3.9015、YZ3.41: YZ3.72、8-66: YZ3.42、YIM3234: 8-66,其 轉(zhuǎn) 化 率 依 次 為 60.1%、34.7%、26.6%、22.7%、21.5%、20.3%、20.2%(表1)。
可以看出,菌株YIM321801 與菌株YIM3088 合用 ,菌株 YIM321801 與菌 株YIM3058 合用,菌株YZ3.41 與菌株 YIM321812 合用,菌株 YIM3234 與菌株YZ3.9015 合用,菌株 YZ3.41 與菌株 YZ3.72 合用,菌株YIM3234 與菌株8-66 合用,均能使大黃素轉(zhuǎn)化率增高,其中菌株YIM321801 與菌株YIM3088 合用效果最為顯著,大黃素轉(zhuǎn)化率達(dá)到60.1%,而單菌YIM321801大黃素轉(zhuǎn)化率僅為30.7%,單菌YIM3088 大黃素轉(zhuǎn)化率僅為21.1%。菌株YZ3.41 與菌株YZ3.72 合用效果較為顯著,大黃素轉(zhuǎn)化率達(dá)到21.5%,而單菌YZ3.41大黃素轉(zhuǎn)化率僅為9.1%,單菌YZ3.72 大黃素轉(zhuǎn)化率僅為8.2%。菌株YZ3.41 與菌株YIM321812 合用效果也較為顯著,大黃素轉(zhuǎn)化率達(dá)到26.6%,而單菌YZ3.41大黃素轉(zhuǎn)化率僅為9.1%,單菌YIM321812大黃素轉(zhuǎn)化率僅為19.1%。
為了尋找ω-羥基大黃素生成率高的菌株組合,并考察組合混合菌的各單菌之間是否存在協(xié)同作用,所以只對(duì)高ω-羥基大黃素生成率的混合菌與組合混合菌的各單菌比較,8 組混合菌與單菌固態(tài)轉(zhuǎn)化產(chǎn)物的ω-羥基大黃素生成率(表2、圖2)。
在29 組混合菌固態(tài)轉(zhuǎn)化產(chǎn)物中,轉(zhuǎn)化產(chǎn)物的ω-羥基大黃素生成率最高的8 組混合菌分別為YIM321801:YIM3088、YIM321801:YIM3058、YZ3.41:YIM321812、YIM3234: YZ3.9015、YZ3.42: YZ3.9015、YIM3001:YIM39321、米根霉:YZ3.72、YZ3.41:YIM39321,其ω-羥基大黃素生成率依次為32.9%、22.4%、13.7%、12%、9.6%、9.2%、8.9%、8.5%(表2)。
可以看出,菌株YIM321801 與菌株YIM3088 合用 ,菌 株 YZ3.41 與 菌 株YIM321812 合 用 ,菌 株YIM3234 與菌株 YZ3.9015 合用,菌株 YIM3001 與菌株YIM39321 合用,菌株 YZ3.41 與菌株 YIM39321 合用,均能使ω-羥基大黃素生成率增高,其中菌株YIM321801 與菌株YIM3088 合用效果最為顯著,ω-羥基大黃素生成率達(dá)到32.9%。而單菌YIM321801ω-羥基大黃素生成率僅為22.8%,單菌YIM3088 大黃素轉(zhuǎn)化率僅為0.8%。菌株YIM3001與菌株YIM39321合用效果較為顯著,ω-羥基大黃素生成率達(dá)到9.2%,而單菌YIM3001ω-羥基大黃素生成率僅為1.1%,單菌YIM39321ω-羥基大黃素生成率僅為3.0%。菌株YZ3.41與菌株YIM321812合用效果較為顯著,ω-羥基大黃素生成率達(dá)到13.7%,而單菌YZ3.41ω-羥基大黃素生成率僅為7.1%,單菌YIM321812ω-羥基大黃素生成率僅為10.7%。
表1 7組混合菌與單菌固態(tài)轉(zhuǎn)化產(chǎn)物的大黃素轉(zhuǎn)化率
圖1 (Ⅰ、Ⅱ)混合菌與單菌固態(tài)轉(zhuǎn)化產(chǎn)物的大黃素轉(zhuǎn)化率比較
表2 8組混合菌與單菌固態(tài)轉(zhuǎn)化產(chǎn)物的ω-羥基大黃素生成率
圖2 (Ⅰ、Ⅱ)混合菌與單菌固態(tài)轉(zhuǎn)化產(chǎn)物的ω-羥基大黃素生成率比較
產(chǎn)生成分種類最多的菌株分別是8-66,共有8 種未知成分(除ω-羥基大黃素外)。58 株菌中具有轉(zhuǎn)化能力的菌株有57 株,能轉(zhuǎn)化成ω-羥基大黃素的有39株。其中專一性較強(qiáng)(只產(chǎn)生1 種成分)的有YZ3.9022、YZ3.9024、YZ3.9021、YZ3.9023、YIM39439、YZ3.9032、YZ3.9034、YIM39409 共 8 株菌,其中菌株YIM39439 轉(zhuǎn)化產(chǎn)物產(chǎn)生ω-羥基大黃素,生成率為0.4%,其余7 株轉(zhuǎn)化產(chǎn)物均沒有產(chǎn)生ω-羥基大黃素,其大黃素轉(zhuǎn)化率依次為5.5%、0.6%、2.5%、0.4%、0.6%、2.3%、1.0%、1.2%。
本研究分別用單菌與混合菌固態(tài)轉(zhuǎn)化大黃素,并對(duì)大黃素的轉(zhuǎn)化率和ω-羥基大黃素的生成率進(jìn)行比較研究,實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明,一些混合菌能提高ω-羥基大黃素生成率和大黃素轉(zhuǎn)化率。即組成混合菌的兩單菌間存在協(xié)同作用。研究發(fā)現(xiàn)3組協(xié)同作用非常顯著的混合菌YIM321801(青霉屬Penicillium):YIM3088(臺(tái)灣根霉Rhizopus formosensis)、YIM321801(青霉屬Penicillium):YIM3058(土 曲 霉 Aspergillus terreus)、YZ3.41(茄腐皮鐮刀 Fusarium solani):YIM321812(毛霉屬M(fèi)ucor),轉(zhuǎn)化率依次為60.1%、34.7%、26.6%。其中最顯著的是YIM321801(青霉屬 Penicillium):YIM3088(臺(tái)灣根霉Rhizopus formosensis),大黃素轉(zhuǎn)化率達(dá)到60.1%。轉(zhuǎn)化產(chǎn)物的ω-羥基大黃素的生成率最高的3 組混合菌分別為YIM321801:YIM3088,YIM321801:YIM3058 及 YZ3.41:YIM321812,其生成率依次為32.9%、22.4%、13.7%。
圖3 混合菌轉(zhuǎn)化產(chǎn)物中ω-羥基大黃素生成率及大黃素轉(zhuǎn)化率最高的HPLC圖譜
生物轉(zhuǎn)化過程十分復(fù)雜,受多種因素的影響,實(shí)驗(yàn)中絕大多數(shù)混合菌比單菌大黃素轉(zhuǎn)化率和ω-羥基大黃素生成率高,即混合菌比單菌生物轉(zhuǎn)化大黃素強(qiáng),各種菌株組合成的混合菌起到了協(xié)同作用。特別是功能弱的菌株組合后功能增強(qiáng),起到協(xié)同作用。這可能是因?yàn)閱尉l(fā)酵時(shí)微生物的代謝產(chǎn)物大量積累阻礙相關(guān)酶類的合成,而混合菌發(fā)酵中各菌株大多可以起到生長代謝協(xié)調(diào)作用,某些微生物如真菌能夠利用這些代謝產(chǎn)物,從而解除這種阻礙作用,促進(jìn)相關(guān)酶類的合成,使得實(shí)驗(yàn)中混合菌比單菌生物轉(zhuǎn)化大黃素具有明顯的優(yōu)勢。
新型的固態(tài)發(fā)酵方式有利于條件的控制及擴(kuò)大規(guī)模生物轉(zhuǎn)化,轉(zhuǎn)化條件簡單,為以后的生產(chǎn)及生物轉(zhuǎn)化提供了可行性。一些混合菌生物轉(zhuǎn)化大黃素作用顯著,即組成的這些混合菌的單菌之間存在一定的協(xié)同作用,混合菌轉(zhuǎn)化大黃素使得大黃素得到了進(jìn)一步開發(fā)利用,為提高中藥材中大黃素微生物轉(zhuǎn)化產(chǎn)率提供一種選擇,為大黃素單菌與混合菌轉(zhuǎn)化奠定一定的數(shù)據(jù)支持與理論基礎(chǔ),為大黃素及中藥材如大黃、何首烏、虎杖的炮制、生物代謝等微生物轉(zhuǎn)化提供了一種新的思路。