鐘 峰，方詠梅，張晶晶 ，吳 競(jìng) ，陶秀彬，許 巖

(1.皖南醫(yī)學(xué)院第二附屬醫(yī)院檢驗(yàn)科，安徽蕪湖 241000 ；2.皖南醫(yī)學(xué)院護(hù)理學(xué)院，安徽蕪湖 241000 )

急性呼吸道感染(acute respiratory infection, ARI)是當(dāng)前威脅兒童健康最常見、發(fā)生率最高的疾病，具有高發(fā)病率、高死亡率等特點(diǎn)[1]。有研究顯示，兒童急性呼吸道感染已被列為導(dǎo)致全球5歲以下患兒死亡的第二大病因[2]，每年約有30萬(wàn)人因嚴(yán)重的下呼吸道感染而死亡[3]。我國(guó)ARI患兒以肺炎支原體、乙型流感病毒、呼吸道合胞病毒等非典型病原體為主[4-5]。

干擾素誘生蛋白10(interferon - inducible protein-10, IP-10)與單核細(xì)胞趨化蛋白-1( monogyte chemoattractant protein-1，MCP-1) 均是炎癥性趨化因子，具有促進(jìn)炎性因子和免疫細(xì)胞分泌及募集等功能，在機(jī)體抗感染的過(guò)程中起到重要的作用[6-7]。多項(xiàng)研究表明，F(xiàn)lu-A等呼吸道病毒感染后，促炎細(xì)胞因子及輔助炎性細(xì)胞因子過(guò)度表達(dá)，導(dǎo)致患者下呼吸道嚴(yán)重免疫受損，從而加重患者疾病嚴(yán)重程度[8]。近年來(lái)，多種病原體混合感染在臨床兒童急性呼吸道感染中并不少見，但混合感染后體內(nèi)發(fā)生的炎癥反應(yīng)的機(jī)制目前鮮有報(bào)道。本研究旨在通過(guò)了解皖南地區(qū)兒童ARI的流行病學(xué)特征及相關(guān)炎癥趨化因子的表達(dá)情況，分析其與臨床病程發(fā)展的相關(guān)性，給臨床預(yù)防和治療提供數(shù)據(jù)資料，為早期感染診斷及病情評(píng)估治療采取有效的干預(yù)措施。

1 材料與方法

1.1 研究對(duì)象 收集2017年6月～2019年6月，皖南醫(yī)學(xué)院第一、二附屬醫(yī)院確診為急性呼吸道感染患兒治療前血標(biāo)本，年齡為0～14歲。同時(shí)，收集相同時(shí)間段的健康兒童作為健康對(duì)照組。

1.2 試劑與儀器 呼吸道九項(xiàng)病原體IgM檢測(cè)試劑盒(北京英諾特生物技術(shù)有限公司)，IP-10，MCP-1 ELISA試劑盒(上海生工生物有限公司)，倒置熒光顯微鏡(日本OLYMPUS CX23)，td25-w5離心機(jī)(長(zhǎng)沙湘儀離心機(jī)儀器有限公司)，生化分析儀(日立 7600)。

1.3 方法 采集入院病人治療前靜脈血3ml，經(jīng)4 000r/min 離心5min后，取上清液檢測(cè)CRP，IP-10和MCP-1表達(dá)水平及呼吸道感染病原體IgM，血清CRP采用日立7600生化分析儀檢測(cè)，呼吸道病原體IgM九聯(lián)檢試劑盒采用間接免疫熒光法檢測(cè)包括肺炎支原體(MP)、肺炎衣原體(CP)、甲型流感病毒(Flu-A)、乙型流感病毒(Flu-B)、副流感病毒(PIV)、腺病毒(ADV)、呼吸道合胞病毒(RSV)、科薩奇病毒(Cox B)和嗜肺軍團(tuán)菌(LP)。IP-10，MCP-1檢測(cè)采用 ELISA試劑盒，實(shí)驗(yàn)步驟參照說(shuō)明書進(jìn)行定量檢測(cè)。

2 結(jié)果

2.1 患兒血清呼吸道九項(xiàng)病原體IgM檢測(cè)結(jié)果 見表1。收集ARI患兒治療前血標(biāo)本5 122例，其中0～3歲患兒2 632例，4～14歲患兒2 490例，總陽(yáng)性率38.89%(1 992/51 221)。檢測(cè)呼吸道九項(xiàng)病原體IgM陽(yáng)性檢出率為50.96 %。其中0～3歲組與4～14歲組中均以MP檢出率最高，分別為16.29%(429/2 632)，19.23%(479/2 490)，兩組年齡段陽(yáng)性檢出率差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。

表1不同年齡組呼吸道九項(xiàng)病原體IgM檢出情況(n)

類別0～3歲4～14歲合計(jì)χ2PMP429 4799087.570.006FluB148383531131.120.000FluA2172464634.160.041RSV2691964658.550.003ADV64731371.230.268PIV1731484.950.026CP11344513.190.000Cox B94131.940.164LP000

2.2 MP，RSA單獨(dú)感染與混合感染組(MP+RSV)臨床特征比較 檢測(cè)出混合感染患兒共544例(10.62%)，主要以MP聯(lián)合RSV感染為主，共176例，分析比較其單獨(dú)感染與混合感染組臨床特征，各感染組均有不同程度的發(fā)熱、咳嗽及胃腸道等癥狀，RSV感染患兒咳嗽率最低(84.04%)，明顯低于MP感染組及混合感染組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(均P<0.05)，混合感染組患兒發(fā)熱率(100%)明顯高于單獨(dú)感染組(均P<0.001)，鼻塞流涕及胃腸道癥狀均以混合感染組比例最高(均P<0.001)，三組患兒喘息發(fā)生率無(wú)明顯差異。

2.3 MP，RSA單獨(dú)感染與混合感染組(MP+RSA)的細(xì)胞因子表達(dá)水平 見表2。與健康對(duì)照組比較，MP，RSV感染組及混合感染組患兒血清中的CRP，IP-10，MCP-1表達(dá)水平均有不同程度升高。分析比較4組IP-10及MCP-1表達(dá)水平，發(fā)現(xiàn)混合感染組的升高程度較單獨(dú)感染組更加明顯，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(均P<0.05)?；旌细腥窘M血清中細(xì)胞因子IP-10，MCP-1表達(dá)水平與CRP 的水平呈正相關(guān)性(r=0.612，P<0.001；r=0.804，P<0.001)，見圖1。

表2. MP，RSA單獨(dú)感染與混合感染組的細(xì)胞因子檢測(cè)結(jié)果

圖1混合感染組細(xì)胞因子IP-10，MCP-1與CRP的相關(guān)性散點(diǎn)圖

3 討論

兒童是ARI易感人群，每年有大量?jī)和烙诤粑栏腥炯跋嚓P(guān)并發(fā)癥，目前ARI已成為全世界5歲以下兒童死亡的第二大因素[9]，由于呼吸道感染病原體種類繁多，為避免抗生素濫用及感染病程加重，及時(shí)確診病原體并進(jìn)行針對(duì)性治療就成了至關(guān)重要的前提。本研究對(duì)皖南醫(yī)學(xué)院附屬醫(yī)院ARI患兒的呼吸感染狀況進(jìn)行了調(diào)查分析，檢測(cè)出感染的病原體以MP感染率最高，而病毒則以FluB檢出率最高，其次為RSV，F(xiàn)luA等，這與國(guó)內(nèi)外多項(xiàng)兒童呼吸道感染流行病調(diào)查結(jié)果相一致[10-11]。本研究中檢測(cè)出混合病原體感染主要以MP合并RSA為主，分析比較臨床特征，各感染組均有不同程度的發(fā)熱、咳嗽及胃腸道等癥狀，其中RSV感染患兒咳嗽率最低，明顯低于MP感染組及混合感染組，混合感染組患兒發(fā)熱率為100%，明顯高于單獨(dú)感染組，鼻塞流涕及胃腸道癥狀均以混合感染組比例最高，混合感染組平均住院天數(shù)時(shí)間相比單獨(dú)感染時(shí)間明顯延長(zhǎng)，說(shuō)明混合感染組更易表現(xiàn)為咳嗽、鼻塞、流涕等癥狀，從而加重患兒病情的嚴(yán)重程度。這可能與混合感染后誘導(dǎo)并激活免疫系統(tǒng)，釋放了大量的炎性介質(zhì)(IL-1，IL-6，IL-12，TNF -α等)有關(guān)[12-13]。因此，在MP感染的患兒中出現(xiàn)高熱、發(fā)熱時(shí)間長(zhǎng)等癥狀時(shí)，應(yīng)考慮混合感染的可能性。

IP-10與MCP-1分別屬于CXC家族及CC家族的單核細(xì)胞趨化因子，具有包括參與調(diào)控炎癥反應(yīng)、刺激血管生成、誘導(dǎo)細(xì)胞因子轉(zhuǎn)錄等功能，其在血液中的表達(dá)水平與疾病發(fā)生發(fā)展存在緊密聯(lián)系。ROE等[14]人研究發(fā)現(xiàn)，RSV感染患者血漿中的炎癥趨化因子IP-10表達(dá)水平明顯增高。MACHADO等[15]人通過(guò)研究發(fā)現(xiàn)RSV感染后肺部炎癥程度與IP-10表達(dá)程度具有一定關(guān)聯(lián)，并且病毒與細(xì)菌混合感染環(huán)境下能加快誘導(dǎo)IP-10的表達(dá)。本研究通過(guò)檢測(cè)MP合并RSA感染患兒血清中的IP-10，MCP-1表達(dá)水平，了解其在混合感染患兒體內(nèi)免疫調(diào)節(jié)中的作用。研究結(jié)果表明，相比較健康對(duì)照組，MP，RSV單獨(dú)感染組及混合感染組患兒血清中的CRP，IP-10和MCP-1的表達(dá)水平均有不同程度升高，混合感染組的升高程度較單獨(dú)感染組更加明顯，對(duì)比組之間的差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(均P<0.001)。相關(guān)性研究數(shù)據(jù)顯示，混合感染組血清中細(xì)胞因子IP-10與MCP-1表達(dá)水平與CRP 的水平呈正相關(guān)性，說(shuō)明其表達(dá)與機(jī)體免疫應(yīng)答相關(guān)，表達(dá)越高預(yù)示著免疫損害越強(qiáng)，可作為ARI疾病嚴(yán)重程度指標(biāo)之一。

確診呼吸道感染的病原體，對(duì)ARI患者有效的預(yù)防及治療具有很大的幫助，并且能夠降低臨床抗生素的濫用率，明顯縮短平均住院時(shí)間。IP-10，MCP-1在ARI患兒混合感染的發(fā)病機(jī)制中起著重要的作用，在臨床診斷中具有重要的輔助參考作用。本研究存在樣本量不足以及地域性不足等方面，需進(jìn)一步全面分析探討細(xì)胞因子在混合呼吸道感染兒童中的表達(dá)狀況，掌握其誘導(dǎo)的免疫炎癥機(jī)制，從而給臨床治療提供幫助。