孫祝平，陳紅英，陳思路

(上海市長(zhǎng)寧區(qū)精神衛(wèi)生中心精神科,上海 200335)

阿爾茨海默病(Alzheimer’s disease, AD)是以記憶力衰退、認(rèn)知障礙為主要表現(xiàn)的中樞神經(jīng)系統(tǒng)退行性疾病，隨著我國(guó)人口老齡化進(jìn)程的加快，其發(fā)生率呈逐年上升趨勢(shì)[1]。認(rèn)知功能障礙的早期發(fā)現(xiàn)和早期干預(yù)有助于減少延緩AD病程的進(jìn)展，改善患者生活質(zhì)量，減輕家庭及社會(huì)負(fù)擔(dān)，具有十分重要的現(xiàn)實(shí)意義。近年來(lái)研究發(fā)現(xiàn)，AD患者腦神經(jīng)元改變與大腦固有免疫異常密切相關(guān)，其中腦血管損害、神經(jīng)性炎癥反應(yīng)發(fā)揮著關(guān)鍵作用[2]。有研究顯示，脂蛋白相關(guān)磷脂酶A2(lipoprotein related phospholipase A2, Lp-PLA2)作為炎癥標(biāo)記物，其水平異常升高可導(dǎo)致AD的發(fā)生，同時(shí)NOD樣受體家族蛋白3(nod-like receptor family protein 3, NLRP3)炎癥小體信號(hào)通路也可能參與AD的炎性過(guò)程，但二者與患者認(rèn)知功能損害的關(guān)系研究鮮有報(bào)道，仍缺乏循證學(xué)依據(jù)[3-4]。本研究通過(guò)檢測(cè)AD患者血清Lp-PLA2和NLRP3的表達(dá)水平，探討其對(duì)認(rèn)知功能損害的影響，現(xiàn)報(bào)道如下。

1 材料與方法

1.1 研究對(duì)象 選擇2016年1月～2018年12月在我院精神病科住院的AD患者110例。入組標(biāo)準(zhǔn)：①均符合美國(guó)精神病協(xié)會(huì)《精神障礙診斷和統(tǒng)計(jì)工作手冊(cè)第四版修正版(DSM-Ⅳ-R)》中AD的診斷標(biāo)準(zhǔn)[5]；②年齡≥65歲，且臨床資料齊全；③排除自身免疫性疾病、語(yǔ)言交流障礙、并發(fā)精神分裂癥或其他精神疾病，或嚴(yán)重軀體疾病的患者。其中男性61例，女性49例；年齡65～82(69.4±3.8)歲；病程1～12(6.9±1.2)年；文化程度：小學(xué)及以下36例，初中、高中54例，大專(zhuān)及以上20例。另選擇本院同期健康體檢者50例作為對(duì)照組，均無(wú)精神病家族史及既往史。其中男性25例，女性25例；年齡65～80(69.1±4.2)歲；文化程度：小學(xué)及以下12例，初中、高中26例，大專(zhuān)及以上12例。兩組患者在年齡、性別構(gòu)成比、文化程度等方面差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。本研究均符合《赫爾辛基宣言》，所有患者家屬均自愿參加，并簽署知情同意書(shū)。

1.2 試劑和儀器 人Lp-PLA2試劑盒(上海信帆生物科技有限公司)，NLRP3試劑盒(美國(guó)TPI公司)；貝克曼庫(kù)爾特AU400e自動(dòng)分析儀。

1.3 方法

1.3.1 認(rèn)知功能評(píng)估：采用蒙特利爾認(rèn)知評(píng)估量表(montreal cognitive assessment，MoCA)、簡(jiǎn)易精神狀態(tài)量表(mini-mental state examination，MMSE)和臨床癡呆量表(clinical dementia rating，CDR)進(jìn)行認(rèn)知功能評(píng)估。其中，MoCA量表包含語(yǔ)言、記憶、執(zhí)行功能等11個(gè)項(xiàng)目，分?jǐn)?shù)為0～30分，26分以上為正常。MMSE量表包含語(yǔ)言理解、即刻記憶、延遲記憶、定向、注意力和計(jì)算力及視空間等6個(gè)維度，共30個(gè)條目，總分30分。文盲<17分，小學(xué)<20分和中學(xué)及以上<24分視為存在認(rèn)知功能障礙。CDR量表評(píng)估項(xiàng)目包括記憶力、判斷和解決問(wèn)題能力、社會(huì)事務(wù)、家庭生活業(yè)余愛(ài)好和個(gè)人照料6個(gè)方面，每個(gè)方面均為無(wú)損害～重度損害五級(jí)評(píng)分，但評(píng)分不疊加，根據(jù)總評(píng)分標(biāo)準(zhǔn)將6個(gè)方面能力的評(píng)定綜合為一個(gè)總分，結(jié)果分為健康(0分)、可疑AD(0.5分)、輕度AD(1分)、中度AD(2分)和重度AD(3分)。 所有評(píng)估均由經(jīng)過(guò)專(zhuān)業(yè)培訓(xùn)的高年資精神科醫(yī)師完成。

1.3.2 Lp-PLA2和NLRP3炎癥小體檢測(cè)：分別抽取AD患者、對(duì)照組清晨空腹肘靜脈血3 ml，置于含EDTA的真空采血管中，4h內(nèi)3 000 r/min離心10 min后留取上層血漿置于-70℃冰箱凍存?zhèn)錂z。采用酶聯(lián)免疫吸附法測(cè)定血清中Lp-PLA2和NLRP3炎癥小體表達(dá)水平。

2 結(jié)果

2.1 不同病情程度的AD患者認(rèn)知功能障礙比較 見(jiàn)表1。與輕度組比較，中重度組MoCA，MMSE評(píng)分均明顯下降，CDR評(píng)分明顯升高，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。

2.2 不同病情程度的AD患者血清Lp-PLA2，NLRP3表達(dá)水平比較 見(jiàn)表2。方差分析顯示，三組血清Lp-PLA2，NLRP3表達(dá)水平比較，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。與對(duì)照組比較，輕度、中重度組血清Lp-PLA2，NLRP3水平均明顯升高，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。與輕度組比較，中重度組血清Lp-PLA2，NLRP3水平亦顯著升高，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。

2.3 Lp-PLA2，NLRP3與認(rèn)知功能障礙的相關(guān)性分析 Pearson線性相關(guān)分析顯示，AD患者血清Lp-PLA2，NLRP3水平與MoCA，MMSE評(píng)分均呈顯著正相關(guān)，與CDR評(píng)分呈顯著負(fù)相關(guān)(P<0.05)。見(jiàn)表3。

3 討論

AD是我國(guó)中老年人群常見(jiàn)的致殘性疾病，目前患病人數(shù)高達(dá)950萬(wàn)，位居全球首位[6]。本研究顯示，隨著AD程度的加重，MoCA，MMSE評(píng)分均明顯下降，CDR評(píng)分明顯升高(P<0.05)，由此可見(jiàn)AD患者主要表現(xiàn)為不同程度的認(rèn)知功能障礙。研究認(rèn)為，認(rèn)知功能障礙早期階段是治療的關(guān)鍵窗口期，但因癥狀相對(duì)較輕，缺乏特異性表現(xiàn)，早期診斷困難，易被臨床忽視[7-8]。一旦進(jìn)展為AD，臨床尚無(wú)特殊有效藥物，治療效果不理想。實(shí)驗(yàn)室指標(biāo)的變化通常先于臨床癥狀的出現(xiàn)，有助于靈敏反映機(jī)體病變的發(fā)生，故尋找AD患者認(rèn)知功能損害的特異性生物學(xué)標(biāo)記物一直是國(guó)內(nèi)外研究的熱門(mén)話題[9]。

表1不同病情程度的AD患者認(rèn)知功能分)

表2 不同病情程度的AD患者血清Lp-PLA2，NLRP3表達(dá)水平比較

表3 血清Lp-PLA2，NLRP3與認(rèn)知功能障礙的相關(guān)性

近年來(lái)，Lp-PLA2已被大量研究證實(shí)為腦血管病的獨(dú)立危險(xiǎn)因素之一，而腦血管病又與認(rèn)知功能損害及AD密切相關(guān)[10]。Lp-PLA2是一種血管特異性炎癥酶，可反映動(dòng)脈內(nèi)膜的炎癥反應(yīng)，進(jìn)而造成血管異常收縮﹑水鈉潴留、血壓升高，從而增加腦卒中等腦血管意外的發(fā)生風(fēng)險(xiǎn)。此外，Lp-PLA2亦屬于磷脂水解酶家族，可與低密度脂蛋白膽固醇結(jié)合形成炎癥信號(hào)傳導(dǎo)通路，促進(jìn)動(dòng)脈粥樣硬化斑塊并降低其穩(wěn)定性，影響缺血性腦卒中的發(fā)生。上述兩種作用機(jī)制均可使大腦因結(jié)構(gòu)和功能改變而出現(xiàn)認(rèn)知功能異常，最終促進(jìn)血管性AD的發(fā)生[11-12]。本研究中，AD患者血清Lp-PLA2較對(duì)照組明顯升高，且隨著病情加重依次升高，相關(guān)性分析結(jié)果顯示，血清Lp-PLA2水平與MoCA，MMSE評(píng)分均呈顯著正相關(guān)，與CDR評(píng)分呈顯著負(fù)相關(guān)(P<0.05)，與尹楠等[13]研究結(jié)果基本相符，進(jìn)一步說(shuō)明Lp-PLA2在AD患者認(rèn)知功能減退中發(fā)揮著重要作用。

最近研究報(bào)道顯示，NLRP3炎癥小體作為NLRs家族的一個(gè)重要成員，由10號(hào)染色體NLRP3編碼的蛋白質(zhì)結(jié)合半胱氨酸蛋白酶、凋亡相關(guān)微粒蛋白共同組成[14]。學(xué)者認(rèn)為其主要通過(guò)以下兩個(gè)方面影響認(rèn)知功能：(1)調(diào)控IL-1水平及神經(jīng)元變性相關(guān)神經(jīng)毒素的合成與分泌；(2)減少β-淀粉樣蛋白之間的間隙，促進(jìn)沉積的增加，從而誘導(dǎo)正反饋循環(huán)，最終導(dǎo)致認(rèn)知功能障礙進(jìn)展及AD發(fā)生[15]。本研究結(jié)果發(fā)現(xiàn)，AD患者NLRP3表達(dá)水平高于正常人群，AD程度與認(rèn)知功能損害顯著相關(guān)。這一結(jié)果提示，NLRP3可能參與了AD患者認(rèn)知功能損害的發(fā)生發(fā)展，其水平升高可能作為認(rèn)知功能障礙的早期輔助診斷指標(biāo)，對(duì)正確識(shí)別和早期治療具有一定指導(dǎo)意義。SARESELLA等[16]研究認(rèn)為，NLRP3可激活促炎蛋白酶，促進(jìn)C反應(yīng)蛋白、IL-6和腫瘤壞死因子-α(tumor necrosis factor factor-α，TNF-α)等多種促炎細(xì)胞因子合成釋放，其中TNF-α可使T淋巴細(xì)胞激活，啟動(dòng)適應(yīng)性免疫應(yīng)答而產(chǎn)生強(qiáng)烈的局灶性炎性反應(yīng)，造成神經(jīng)細(xì)胞凋亡。ROSSOL等[17]實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，NLRP3敲除小鼠中，β-淀粉樣蛋白沉積減少，空間記憶有所改善。由此推測(cè)，從抑制NLRP3炎癥小體活化聚集角度防治AD認(rèn)知功能障礙是一條值得探索的新路徑。

綜上所述，AD患者血清Lp-PLA2，NLRP3表達(dá)異常升高，與認(rèn)知功能損害密切相關(guān)，可作為反映認(rèn)知功能損害程度的早期血清學(xué)標(biāo)志物。