楊雪

（貴陽市婦幼保健院優(yōu)生遺傳科，貴州 貴陽 550001）

在男性和女性新生兒群體中，脆性X染色體綜合征（FXS）是最常見的一種遺傳性智力低下疾病，其中男性與女性患兒的發(fā)病率分別為1/2000和1/4000，該疾病的發(fā)病率在新生兒遺傳疾病中的發(fā)病率僅次于唐氏綜合征（1/1000）[1]。據(jù)臨床結(jié)果顯示，脆性X染色體綜合征發(fā)病時經(jīng)常會出現(xiàn)重度智力低下、大耳朵以及大下巴等表現(xiàn)。由于該疾病不僅是一種單基因遺傳病，而且殘疾率非常高，因此嚴(yán)重影響新生兒的生命安全及生存質(zhì)量[2]。脆性X染色體綜合征的致病基因源于X染色體長臂上的脆性X智力低下1號基因（FMR1），當(dāng)該基因中發(fā)生CGG重復(fù)且擴(kuò)增異常以及高度甲基突變的情況時，F(xiàn)MR1會因此轉(zhuǎn)錄沉默，進(jìn)而影響脆性X智障蛋白（FMRP）的生成。FMRP是一種促進(jìn)神經(jīng)發(fā)育的主要蛋白之一，該蛋白的缺乏能夠誘發(fā)嚴(yán)重性智力障礙。對于正常人來說，F(xiàn)MR1基因CGG的重復(fù)次數(shù)一般在6-14次左右，而當(dāng)CGG重復(fù)次數(shù)在200次以上且FMR1發(fā)生甲基化時，患兒的FMR1基因便會產(chǎn)生全突變[3]。本研究針對育齡期婦女FMR1基因突變攜帶頻率進(jìn)行相關(guān)研究，旨在探究FMR1基因功能以及調(diào)控的基礎(chǔ)，并為日后產(chǎn)前檢查是否將其列入產(chǎn)前篩查提供理論依據(jù)。

1 資料與方法

1.1 一般資料 本院針對該項研究共選取200例于2016年7月-2019年7月進(jìn)行產(chǎn)前檢查的育齡期婦女作為研究對象，采取所有研究對象的外周血進(jìn)行標(biāo)本檢驗，并與同期已確診的6例突變攜帶者進(jìn)行比較。所有接受檢查的研究對象均已對研究內(nèi)容有詳細(xì)了解，且在自愿條件下簽署知情同意書。

1.2 方法

1.2.1 提取DNA 利用DNA提取試劑盒（德國QiaGen公司）對標(biāo)本進(jìn)行基因提取，取其溶解后1 μL DNA溶液，與等量的蒸餾水進(jìn)行比較，當(dāng)檢測DNA純度合格后，將其濃度稀釋至20 ng/μL并備用。

1.2.2 PCR反應(yīng) 利用AmplideX FMR1 PCR Kit試劑盒對其進(jìn)行擴(kuò)增，同時按照說明書內(nèi)容對CGG重復(fù)引物聚合酶反應(yīng)進(jìn)行分析，其擴(kuò)增后的產(chǎn)物需利用3730DNA分析儀實施毛細(xì)管電泳，并利用GeneMapper 4.0軟件進(jìn)行片段分析。

1.3 觀察指標(biāo) 觀察樣本中的CGG重復(fù)數(shù)、最大頻率等位基因數(shù)及其所占比例。

2 結(jié)果

本研究的200例受試者中，CGG重復(fù)數(shù)范圍為21-44；最大頻率等位基因數(shù)分別為32、39，其所占比例分別為32.65%與39.78%。其詳細(xì)情況見表1。

表1 標(biāo)本檢驗結(jié)果

3 討論

有研究資料顯示，在FMR1基因5'非翻譯區(qū)的基因中，已有的脆性X綜合征會產(chǎn)生影響，在正常群體中，CGG的重復(fù)序列個數(shù)在55個以下，當(dāng)其個數(shù)超過50個時，將出現(xiàn)異常狀況，依據(jù)序列的重復(fù)個數(shù)，可將其分成兩種類型，即前突變及全突變，在前途變中，（CGG）n的重復(fù)個數(shù)在55-200個間，與智力問題不存在聯(lián)系，但是，當(dāng)患者原發(fā)性卵巢發(fā)育不全與脆性X有關(guān)時，前突變會對其產(chǎn)生影響，同時還能夠在與脆性X相關(guān)的震顫共濟(jì)失調(diào)綜合征中發(fā)揮作用，所以，以育齡期女性作為研究對象，對其展開FMR1基因突變攜帶水平的探究，對其生育的正確指導(dǎo)具有重要意義[4]。

目前，研究者在對FMR1基因的克隆復(fù)制進(jìn)行研究的同時，也對脆性X綜合征的分子病理作用機(jī)理進(jìn)行了闡述，且臨床上的細(xì)胞遺傳學(xué)的診斷已經(jīng)被分子診斷所代替，其中分子診斷學(xué)就包括兩種方式，如PCR檢測（CGG）n重復(fù)序列個數(shù)的技術(shù)以及Southern印跡雜交技術(shù)檢測。在臨床上，使用率最高的檢測方法是（CGG）n擴(kuò)增和CpG島的甲基化[5]。實際使用中，研究者發(fā)現(xiàn)（CGG）n擴(kuò)增能夠簡便、迅速、經(jīng)濟(jì)的對目標(biāo)進(jìn)行篩查，并且對篩查目標(biāo)具有特異性，適合使用在篩查范圍較廣的人群中。CpG島的甲基化可對患者進(jìn)行篩除診斷或者對患者的疾病進(jìn)行確診。PCR作為一類分子生物學(xué)技術(shù)，在臨床和科研工作中可發(fā)揮重要作用，且在脆性X染色體綜合征上，該技術(shù)已經(jīng)得到了廣泛運用，早在1990年時期，就有研究者運用PCR檢驗手段來監(jiān)測（CGG）n的重復(fù)序列個數(shù)，后來又有眾多的學(xué)者對該技術(shù)的運用進(jìn)行研究，結(jié)果顯示，在檢測正常的等位基因和大多數(shù)的前突變基因時，PCR技術(shù)的運用效果較為良好，可廣泛的運用，但是在技術(shù)層面上，對大多數(shù)的前突變和全突變基因的擴(kuò)增進(jìn)行檢驗時，會存在一定的難度[6]。

本研究結(jié)果顯示，最大頻率等位基因數(shù)分別為32、39，其所占比例分別為32.65%與39.78%，這或許是由于采用的DNA擴(kuò)增或檢測方法的類型不同所造成的。但也可能也與研究對象（CGG）n重復(fù)序列個數(shù)分布特點的獨特性存在關(guān)聯(lián)。

綜上所述，本研究將本院育齡婦女作為研究對象，使用熒光PCR結(jié)合毛細(xì)管電泳法的方法，檢測FMR1基因突變的情況。檢測所得出的結(jié)果與國內(nèi)外的參考文獻(xiàn)稍有不同，我們推測這或許是因為此次搜集的標(biāo)本數(shù)量少，所以研究結(jié)果存在一定的缺陷，期望未來有大樣本、多中心的探究。