彭臻菲 黃慧 李泳寧

摘要 [目的]建立一種超高效液相色譜快速測定茶葉中三氯殺螨醇的方法。[方法]采用Waters H-Class超高效液相色譜儀，ACQUITY UPLC BEH C18色譜柱（100 mm×2.1 mm，1.7 μm），測定波長230 nm，流動相為A（甲醇）∶B（1%乙酸水）=90∶10，流速0.5 mL/min。茶葉中的三氯殺螨醇采用丙酮和正己烷進(jìn)行提取，經(jīng)濃硫酸凈化和濃縮后，用甲醇定容后進(jìn)行分析檢測。[結(jié)果]三氯殺螨醇在0.05～1000 mg/L具有較好的線性關(guān)系（R2=0.999 2），檢測限為0.05 mg/L。茶葉樣品中添加3個(gè)濃度三氯殺螨醇的平均回收率為93.9%～106.0%，變異系數(shù)為3.3%～11.1%。[結(jié)論]該方法快速、準(zhǔn)確、靈敏，可用于茶葉中三氯殺螨醇的分析檢測。

關(guān)鍵詞 超高效液相色譜;三氯殺螨醇;茶葉

中圖分類號 O657.7;TS272.7 文獻(xiàn)標(biāo)識碼 A 文章編號 0517-6611（2020）03-0200-03

Abstract [Objective]The research aimed to establish a method for the rapid determination of dicofol in tea by ultra performance liquid chromatography（UPLC）. [Method]The system composed of a Waters HClass UPLC and a ACQUITY UPLC BEH C18 column （100 mm×2.1 mm， 1.7 μm）， and detection wavelength was set at 230 nm. The mobile phase was A （methanol）：B （water containing 1% acetic acid）=90∶10 and the flow rate was 0.5 mL/min. The dicofol residues in the tea were extracted by acetone and hexane， and purified by concentrated sulfuric acid. The final residues were fixed in methanol for detection. [Result]The good linear range was 0.05-10.00 mg/L （R2=0.999 2）. The limit of detection was 0.05 mg/L. The average recoveries of dicofol which were added into the tea were 93.9%-106.0% and variation coefficients （CVs） ranged from 3.3%-11.1%. [Conclusion]The method is rapid， accurate and high sensitivity， which can be used for the detection of dicofol in the tea.

Key words Ultra performance liquid chromatography;Dicofol;Tea

三氯殺螨醇是一種具有殺螨譜廣、高效的有機(jī)氯殺螨劑，被廣泛應(yīng)用于蔬菜、果樹和棉花等種植中病蟲害的防治。但近年來研究發(fā)現(xiàn)，由于三氯殺螨醇具有不易分解、殘留量高，對動物和人類有毒性和雌激素效應(yīng)等作用而受到關(guān)注[1-3]。我國是茶葉產(chǎn)品生產(chǎn)和出口大國，大量茶葉因農(nóng)藥殘留不達(dá)標(biāo)而被阻止出口，其產(chǎn)生的綠色壁壘對我國茶葉出口貿(mào)易具有一定的制約作用[4-6]。目前，由于三氯殺螨醇使用效果顯著，部分茶葉中仍可檢出三氯殺螨醇，因此茶葉中三氯殺螨醇的殘留情況越來越受到關(guān)注[7-8]。

三氯殺螨醇的檢測方法主要有氣相色譜法[9-10]、氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用法[11-12]和液相色譜法等[13-14]。氣相色譜法為最常用的檢測方法，靈敏度高，但檢測時(shí)間較長;氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用法更為準(zhǔn)確和靈敏，但其對儀器有較高的要求;液相色譜法是目前進(jìn)出口茶葉中三氯殺螨醇?xì)埩袅康臋z測方法，其檢測準(zhǔn)確度和靈敏度也相對較高。超高效液相色譜（ultra performance liquid chromatography，UPLC）是近年來快速發(fā)展的一種基于1.7 μm 顆粒度填料的液相色譜技術(shù)，比高效液相色譜分析速度更快更靈敏，具有更高的柱效、分析時(shí)間短、減少溶劑消耗等優(yōu)點(diǎn)[15]，被廣泛應(yīng)用于中草藥、農(nóng)藥和藥物的檢測分析[16-20]。筆者采用超高效液相色譜法，建立三氯殺螨醇?xì)埩袅康臋z測方法，以期為檢測茶葉中三氯殺螨醇?xì)埩袅刻峁┯行Х椒ā?/p>

1 材料與方法

1.1 材料與儀器

三氯殺螨醇標(biāo)準(zhǔn)品購自上海源葉生物科技有限公司;甲醇為色譜純;其他試劑均為分析純。

超高效液相色譜系統(tǒng)H-class，配二極管陣列檢測器，美國Waters 公司。

1.2 方法

1.2.1 色譜條件。

色譜柱為ACQUITY UPLC BEH C18（100 mm×2.1 mm，1.7 μm），柱溫25 ℃，進(jìn)樣量5 μL，檢測波長230 nm。流動相為A（甲醇）∶B（1%乙酸水）=90∶10;流速0.5 mL/min。

1.2.2 三氯殺螨醇標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制。

先配制三氯殺螨醇標(biāo)準(zhǔn)溶液10.0 mg/L，再稀釋成一系列不同濃度的標(biāo)準(zhǔn)溶液（001、0.05、0.10、0.50、1.00、2.50、5.00 mg/L），在“1.2.1”色譜條件下進(jìn)樣檢測，將不同三氯殺螨醇濃度與峰面積作圖，計(jì)算出回歸方程式。

1.2.3 茶葉中三氯殺螨醇的提取方法。

準(zhǔn)確稱取1.000 g茶葉樣品于10 mL試管中，加入1.0 mL丙酮和2.0 mL正己烷。置于旋渦振蕩器上劇烈振蕩30 s。3 000 r/min離心2 min，將上清移入另一10 mL試管中。殘?jiān)僦貜?fù)提取2次，將提取上清液合并。將合并的上清液置于恒溫水浴中，60 ℃恒溫蒸發(fā)、濃縮至4～5 mL，取出。往試管中緩慢加入1.5 mL濃硫酸，輕輕混勻后，3 500 r/min離心2 min，取出。將下層磺化液吸出，再加入1.5 mL濃硫酸，重復(fù)1次，最后將上清液移入一干凈試管中，在取出上清液的原試管中再加入2.0 mL正己烷，混勻30 s，3 500 r/min離心2 min，取出，將上清液小心移入同一干凈試管中。將試管于50 ℃恒溫水浴中，空氣流下，蒸干，準(zhǔn)確加入1.0 mL甲醇溶解殘留物，作為待測液。

1.2.4 加標(biāo)回收率試驗(yàn)。

準(zhǔn)確稱取1.000 g未檢出三氯殺螨醇的茶葉樣品，向樣品中添加三氯殺螨醇標(biāo)準(zhǔn)品（通過液體稀釋后加入），得到0.1、1.0和10.0 mg/kg。按“1.2.3”的方法進(jìn)行提取，進(jìn)行液相分析。根據(jù)三氯殺螨醇標(biāo)準(zhǔn)曲線，計(jì)算出樣品的三氯殺螨醇含量。每個(gè)樣品設(shè)6個(gè)重復(fù)，以回收率和變異系數(shù)確定其準(zhǔn)確度。

2 結(jié)果與分析

2.1 三氯殺螨醇標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制

按照“1.2.2”方法進(jìn)行色譜檢測，色譜結(jié)果如圖1所示。從圖1可以看出，在該色譜條件下，三氯殺螨醇標(biāo)準(zhǔn)品（1.0 mg/L）的保留時(shí)間為3386 min，峰型較好。不同濃度下測定的結(jié)果表明，在三氯殺螨0.05～10.00 mg/L具有較好的線性關(guān)系，線性方程為y=79.268x-0.803 4（R2=0.999 2），檢測限為0.05 mg/L。茶葉樣品中加入三氯殺螨醇標(biāo)準(zhǔn)品，提取后采用超高效液相色譜檢測的色譜圖見圖2所示。從圖2可以看出，提取后茶葉樣品中的三氯殺螨醇峰型較好，未與其他雜質(zhì)干擾，可用于茶葉樣品中三氯殺螨醇的分析檢測。

2.2 茶葉中三氯殺螨醇加標(biāo)回收率

按照“1.2.4”方法操作，通過提取后采用超高效液相色譜儀進(jìn)行測定樣品的三氯殺螨醇含量，計(jì)算茶葉樣品的三氯殺螨醇回收率，結(jié)果如表1所示。從表1可以看出，在添加3個(gè)濃度的三氯殺螨醇標(biāo)準(zhǔn)品的平均回收率為93.9%～106.0%，回收率較高，CV值 為33%～11.1%，具有較好的重復(fù)性。表明該研究建立的超高效液相色譜法檢測具有較高的準(zhǔn)確度和重復(fù)性。

3 討論

近年來，隨著經(jīng)濟(jì)全球化和貿(mào)易自由化的發(fā)展，各國對我國茶葉進(jìn)入國際市場提出了更苛刻的要求，綠色貿(mào)易壁壘成為茶葉貿(mào)易出口的主要障礙[21-22]。我國農(nóng)業(yè)部發(fā)布自2018年10月1日起，全面禁止三氯殺螨醇銷售和使用，世界衛(wèi)生組織國際癌癥研究機(jī)構(gòu)將三氯殺螨醇列在3類致癌物清單中。但由于長期以來茶樹病蟲的發(fā)生，而三氯殺螨醇的使用效果顯著，目前仍有被違法使用于茶葉種植中，使得在部分茶葉中仍可檢出三氯殺螨醇?xì)埩?。河南省茶葉中重金屬污染和農(nóng)藥殘留狀況調(diào)查分析，結(jié)果表明，茶葉中可檢測到禁用農(nóng)藥三氯殺螨醇，檢出率為5.00%[8]?？梢?，由于我國茶葉的農(nóng)藥殘留問題長期以來未被得到重視和解決，導(dǎo)致大量茶葉因不達(dá)標(biāo)而被阻止出口[23]。因此，建立快速、靈敏的農(nóng)藥殘留檢測方法是目前工作的一個(gè)重點(diǎn)。

目前，在茶葉的有機(jī)農(nóng)藥殘留檢測中，其中有機(jī)類農(nóng)藥包括有機(jī)氯農(nóng)藥、有機(jī)磷農(nóng)藥、有機(jī)金屬類農(nóng)藥、氨基甲酸脂類農(nóng)藥和擬除蟲菊酯類農(nóng)藥等[24]。多數(shù)具有熱穩(wěn)定、弱極性和揮發(fā)性的農(nóng)藥如有機(jī)磷、有機(jī)氯和擬除蟲菊酯等則采用氣相色譜法進(jìn)行檢測[25]，一些熱不穩(wěn)定或蒸汽壓較低的殺蟲劑，如氨基甲酸酯類和N-甲基氨基甲酸酯類，則可采用液相色譜法[26]。三氯殺螨醇報(bào)道的較多是氣相色譜法，而液相色譜法報(bào)道的較少。倪曉琳等[13]建立了液相色譜法測定茶葉中三氯殺螨醇的方法，在0.1～10.0 mg/L具有良好的線性關(guān)系，檢出限為0.02 mg/kg，加標(biāo)回收率為95.4%～1052%，RSD為1.4%～5.5%，該方法操作簡便、快速、準(zhǔn)確度高。張雷等[14]建立了茶葉中三氯殺螨醇?xì)埩袅康母咝б合嗌V快速檢測方法，在0.02～5.00 mg/kg，三氯殺螨醇線性關(guān)系良好，在綠茶、紅茶、黃茶、青茶、白茶、黑茶6種茶葉中的加標(biāo)回收率為80.9%～108.3%，RSD為1.2%～140%。目前，已經(jīng)有部分液相色譜法被應(yīng)用于成品茶（干茶）和茶制品的農(nóng)殘定量分析[25]。

UPLC是以小顆粒填料（<2 μm）和超高壓系統(tǒng)（>105 kPa）為特征的超高效液相色譜，可以獲得更加高效和快速的色譜分離性能[27]。UPLC由于其具有的速度、靈敏度及分離度均比HPLC有數(shù)倍的提高，近年來被廣泛應(yīng)用于各種中藥、藥物、化妝品和環(huán)境等領(lǐng)域的分析檢測中，而結(jié)合質(zhì)譜的超高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜（UPLC-MS）檢測方法更被廣泛應(yīng)用于食品、蔬菜、水果和茶葉中多菌靈、啶蟲脒、氟蟲腈等氨基甲酸酯類和有機(jī)磷類等農(nóng)藥殘留檢測中[27-31]。因此，UPLC的應(yīng)用越來越廣泛。該研究應(yīng)用UPLC建立的檢測三氯殺螨醇的方法，出峰時(shí)間短、靈敏度高、重復(fù)性好，該方法可用于茶葉中三氯殺螨醇的快速檢測。

4 結(jié)論

該研究中采用UPLC建立了一種快速檢測茶葉中三氯殺螨醇的方法，三氯殺螨醇濃度在0.05～10.00 mg/L具有較好的線性范圍，最低檢測限為0.05 mg/L。茶葉樣品中添加3個(gè)濃度的三氯殺螨醇平均回收率為93.9%～106.0%，CV值為3.3%～11.1%。該方法快速、準(zhǔn)確、靈敏，可用于茶葉樣品中三氯殺螨醇的分析檢測。

參考文獻(xiàn)

[1] DEBABRATA P，SIVAKUMAR M.Sonochemical degradation of endocrinedisrupting organochlorine pesticide Dicofol：Investigations on the transformation pathways of dechlorination and the influencing operating parameters[J].Chemosphere，2018，204：101-108.

[2] THIEL A，GUTH S，BHM S，et al.Dicofol degradation to p，p′dichlorobenzophenoneA potential antiandrogen[J].Toxicology，2011，282（3）：88-93.

[3] AHMAD A，AHMAD M.Deciphering the toxic effects of organochlorine pesticide，dicofol on human RBCs and lymphocytes[J].Pesticide biochemistry and physiology，2017，143：127-134.

[4] 王健，劉路，申流柱，等.畢節(jié)市茶葉農(nóng)藥殘留監(jiān)測與對策分析[J].安徽農(nóng)業(yè)科學(xué)，2018，46（11）：164-166.

[5] 崔磊.綠色貿(mào)易壁壘對我國茶葉出口的影響及對策[J].財(cái)會學(xué)習(xí)，2018（15）：191-193.

[6] 呂小東.綠色貿(mào)易壁壘對我國茶葉出口影響及對策分析[J].管理觀察，2017（13）：87-88.

[7] LI Y，WANG Z B，GAO F M，et al.Selection of representative matrices for the multiresidue analysis of pesticides in tea by GC-MS/MS[J].Analytical methods，2018，10：855-866.

[8] 付鵬鈺，李杉，楊麗，等.河南省茶葉中重金屬污染和農(nóng)藥殘留狀況調(diào)查分析[J].河南預(yù)防醫(yī)學(xué)雜志，2018，29（9）：651-653.

[9] 崔泓，張堯.QuEChERS-GC法測定茶葉中三氯殺螨醇和擬除蟲菊酯農(nóng)藥[J].中國衛(wèi)生檢驗(yàn)雜志，2010，20（10）：2459-2460.

[10] 李曉晶，于鴻，賀小平，等.固相萃取結(jié)合氣相色譜法測定茶葉中三氯殺螨醇和擬除蟲菊酯類農(nóng)藥殘留[J].中國食品衛(wèi)生雜志，2011，23（4）：326-329.

[11] 仲岳桐，陳春曉，康莉.氣質(zhì)聯(lián)用儀法檢測茶葉中三氯殺螨醇等多種農(nóng)藥[J].中國熱帶醫(yī)學(xué)，2011，11（11）：1346-1347.

[12] KURTH D，KRAUSS M，SCHULZE T，et al.Measuring the internal concentration of volatile organic compounds in small organisms using microQuEChERS coupled to LVIGCMS/MS[J].Analytical and bioanalytical chemistry，2017，409（25）：6041-6052.

[13] 倪曉琳，石聲鑫，胡慶蓉.高效液相色譜法測定茶葉中三氯殺螨醇含量[J].食品安全導(dǎo)刊，2017（9）：137.

[14] 張雷，曹淑瑞，譚斯勻，等.高效液相色譜法快速檢測茶葉中三氯殺螨醇[J].分析試驗(yàn)室，2017，36（9）：1048-1052.

[15] 陳佳，王鋼力，姚令文，等.超高效液相色譜（UPLC）在藥物分析領(lǐng)域中的應(yīng)用[J].藥物分析雜志，2008，28（11）：1976-1981.

[16] 畢丹，張水英，任晉，等.超高效液相色譜法同時(shí)測定廣藿香中6個(gè)成分的含量[J].藥物分析雜志，2018，38（8）：1331-1336.

[17] 伍世恒，黃志海，龔又明.UPLC法測定不同產(chǎn)地五指毛桃中補(bǔ)骨脂素的含量[J].新中醫(yī)，2017，49（8）：16-19.

[18] 蔣芳，向仲朝，楊文婉.超高效液相色譜法測定水中的2，4-二氨基甲苯和2，6-二氨基甲苯[J].中國衛(wèi)生檢驗(yàn)雜志，2017，27（3）：341-343.

[19] 禤開智，紀(jì)少凡，符靈梅.超高效液相色譜測定魚體中的苯佐卡因殘留量研究[J].食品工業(yè)，2018，39（1）：308-311.

[20] 趙坤，梅升輝，李新剛，等.超高效液相色譜法測定阿司匹林和水楊酸的血藥濃度[J].中國醫(yī)院藥學(xué)雜志，2017，37（3）：207-210，243.

[21] 寧坤，林冬冬.綠色貿(mào)易壁壘對我國茶葉出口影響及對策分析[J].學(xué)理論，2015（30）：34-35.

[22] 王敬濤.綠色貿(mào)易壁壘對福建省茶葉貿(mào)易出口的影響及法律應(yīng)對策略[J].中國市場，2018（4）：94，96.

[23] 劉云，高凜.論擴(kuò)大茶葉出口的農(nóng)藥殘留限量問題及法律應(yīng)對措施[J].安徽農(nóng)學(xué)通報(bào)，2017，23（20）：3-7.

[24] 黎洪霞，晏嫦妤.茶葉農(nóng)藥殘留研究進(jìn)展[J].廣東茶業(yè)，2017（3）：6-9.

[25] 文洋，譚君，譚斌，等.茶葉中農(nóng)藥殘留檢測方法研究進(jìn)展[J].食品安全質(zhì)量檢測學(xué)報(bào)，2017，8（3）：826-831.

[26] 施杰，來慶華，郭思聰，等.茶葉農(nóng)藥殘留與檢測技術(shù)[J].食品安全質(zhì)量檢測學(xué)報(bào)，2019，10（5）：1243-1249.

[27] 許紫婷，陳珠靈，孫建軍.ACQUITY Arc液相色譜系統(tǒng)的使用與維護(hù)[J].分析測試技術(shù)與儀器，2017，23（3）：195-200.

[28] 董亞蕾，劉文婧，曹進(jìn)，等.QuEChERS-超高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法測定堅(jiān)果中38種農(nóng)藥殘留[J].分析化學(xué)，2017，45（9）：1397-1404.

[29] 吳延燦，戚傳勇，操海群，等.QuEChERS-超高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法測定香菇中56種農(nóng)藥殘留[J].農(nóng)藥學(xué)學(xué)報(bào)，2018，20（1）：58-66.

[30] 馬琳，黃蘭淇，陳建波，等.超高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法測定草莓中19種農(nóng)藥殘留量[J].分析測試學(xué)報(bào)，2016，35（6）：698-703.

[31] 仲伶俐，胡莉，雷紹榮，等.超高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法測定茶葉中6種農(nóng)藥殘留[J].食品安全質(zhì)量檢測學(xué)報(bào)，2016，7（5）：2081-2086.