陳 玲 林 寧 董云云 石 慧 馮 如 趙 霞 章 琴 王保涯 吳玉璘*

1.江蘇省南京市溧水區(qū)婦幼保健所(211200)；2.江蘇省計(jì)劃生育科學(xué)技術(shù)研究所

耳聾60%發(fā)病都與遺傳相關(guān)[1]。遺傳性耳聾可分非綜合征型耳聾(NSHL)和綜合征型耳聾 (SHL)[2]。非綜合征性耳聾(NSHL)是指臨床上僅有遺傳性耳聾不伴有其他癥狀者，約占70%[3]。非綜合征性耳聾具有高度的遺傳異質(zhì)性，到目前為止，已定位的非綜合征型耳聾致病基因位點(diǎn)有136 個(gè)[4-5]。研究表明我國(guó)遺傳性耳聾常見(jiàn)的致聾基因主要是GJB2、 SLC 26A4、線粒體12SrRNA及GJB3[6]。本文開(kāi)展對(duì)南京市溧水區(qū)聾人及高危人群遺傳性耳聾致病基因篩查和分析，為預(yù)防和減少NSHL發(fā)生，提高出生人口素質(zhì)提供科學(xué)依據(jù)。

1 對(duì)象與方法

1.1 研究對(duì)象

2018年11月—2019年12月以南京市溧水區(qū)耳聾人群和高危人群共200例為研究對(duì)象，具有耳聾家族史、生育過(guò)聾兒的健聽(tīng)人和新生兒耳聲發(fā)射(OAE)篩查未通過(guò)者納入高危組(n=98)，有聽(tīng)力障礙的人納入耳聾組(n=102)。所有研究對(duì)象均簽署知情同意書(shū)。

1.2 研究方法

1.2.1標(biāo)本采集兒童和成人均采外周靜脈血3～ 5ml EDTA抗凝；新生兒采集直徑5mm 足跟血血斑4個(gè)，靜脈血-20 ℃冷凍，血片冷藏保存?zhèn)洳椤?/p>

1.2.2耳聾基因檢測(cè)對(duì)遺傳性耳聾基因DNA進(jìn)行GJB2、GJB3、SLC26A4、mtDNA中的15個(gè)位點(diǎn)檢測(cè)：GJB2(35delG、176del16、235delC、299delAT)、GJB3(538C>T)、SLC26A4(2168A>G、IVS7-2A>G 、1174A>T、1226G>A、1229C>T、1975G>C、2027T>A、IVS15+5G>A)、線粒體12SrRNA(1555A>G、1494C>T)檢測(cè)。

1.2.3遺傳咨詢由專業(yè)醫(yī)療技術(shù)人員為耳聾人群和高危人群提供檢測(cè)結(jié)果解讀及遺傳咨詢。

2 結(jié)果

2.1 一般情況

對(duì)象年齡(28.8±13.0)歲，男性96人，女性104人。

2.2 耳聾致病基因變異檢出情況

200例樣本中共檢測(cè)出耳聾基因突變66例，檢出率為33.0%(66/200)。其中GJB2基因突變23例占11.5%(23/200)，包含1例1555A>G均質(zhì)/235del C雜合復(fù)合突變；SLC26A4基因突變19例占9.5%(19/200)；線粒體基因突變25例占12.5%(25/200)，包含1例1555A>G均質(zhì)/235del C雜合復(fù)合突變。未檢出GJB3基因突變。66例耳聾致病基因分型及其頻率見(jiàn)表1。 檢測(cè)發(fā)現(xiàn)GJB2基因突變以c.235delC為主要形式占78.3%(18/23)；SLC26A4基因突變以SLC26A4 IVS7-2A>G為主要形式占89.5%(17/19)；1555A>G為線粒體基因突變主要形式高達(dá)92.0%(23/25)；GJB3基因突變位點(diǎn)檢測(cè)為零。

表1 66例耳聾致病基因分型及其頻率

2.3 兩組耳聾基因突變情況

耳聾患者中，共檢測(cè)出基因突變47例，檢出率為46.1%(47/102)；耳聾高危人群中，共檢測(cè)出基因突變19例，檢出率為19.4%(19/98)。耳聾和高危人群不同耳聾致病基因變異分布見(jiàn)表2。

表2 不同人群不同耳聾致病基因變異分布[例(%)]

3 討論

流行病學(xué)調(diào)查發(fā)現(xiàn)：我國(guó)有21%的聾人帶有GJB2基因突變；14.5%的聾人有SLC26A4基因突變；另分別有3.8%和0.6%的聾人帶有線粒體DNA A1555G和C1494T突變[7]。GJB2基因的突變導(dǎo)致NSHL發(fā)生，并且是NSHL的最主要致病基因[8]。SLC26A4基因突變與大前庭水管綜合征(EVAS)的發(fā)生關(guān)系密切[9]，線粒體12SrRNA基因遺傳方式為母系遺傳，接觸氨基糖苷類藥物導(dǎo)致線粒體組織的破壞，能引起藥物性聽(tīng)力障礙的發(fā)生[10]。本研究耳聾人群GJB2基因突變率略低于全國(guó)水平，SLC26A4基因突變率與全國(guó)水平大致相符，但線粒體12SrRNA基因有關(guān)的熱點(diǎn)突變檢出率明顯高于全國(guó)基因突變率平均水平4.4%，也高于江蘇省地區(qū)基因突變率11.89%[11]。

本研究結(jié)果顯示：基因變異位點(diǎn)中，線粒體mtDNA基因有關(guān)的位點(diǎn)突變檢出率最高，共25例，其中A1555G基因突變位點(diǎn)有23例。 mtDNA突變是核苷酸序列和空間結(jié)構(gòu)發(fā)生改變，改變了結(jié)構(gòu)的亞單位rRNA與氨基糖苷類抗生素有極高的親和力，這是氨基糖苷類抗生素致聾的機(jī)制之一[12]。高突變線粒體 mtDNAA1555G位點(diǎn)存在，說(shuō)明本地區(qū)具有線粒體mtDNAA1555G高突變率的遺傳學(xué)因素，這可能是本地區(qū)藥物聾發(fā)生率偏高的原因。鑒于線粒體基因的遺傳特征，對(duì)孕前、孕早期婦女進(jìn)行此基因檢測(cè)，及時(shí)預(yù)防子代發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)，同時(shí)對(duì)其母系成員追蹤，發(fā)放用藥指南，規(guī)避禁忌藥物，可避免約10倍家庭高危人群藥物聾發(fā)生[13]，實(shí)現(xiàn)藥物性耳聾的科學(xué)預(yù)警[14]，母系家系成員在進(jìn)行遺傳咨詢后，接受基因檢測(cè)以確認(rèn)[15]，從根本上干預(yù)藥物因素造成的聽(tīng)力損害，真正實(shí)現(xiàn)聾病經(jīng)濟(jì)有效的一級(jí)預(yù)防，對(duì)聾病防治具有積極深遠(yuǎn)意義。

我國(guó)每年新生兒耳聾發(fā)病率約為0.1%～0.3%[16-17]。根據(jù)我區(qū)接產(chǎn)醫(yī)院提供的數(shù)據(jù)，近3年約有0.2%～0.3%新生兒未通過(guò)聽(tīng)性腦干反應(yīng)(ABR)復(fù)篩，之后隨訪確診為聽(tīng)力異常。本研究將有耳聾家族史、聽(tīng)力初篩不通過(guò)的新生兒納入高危組進(jìn)行耳聾基因篩查，篩查出的陽(yáng)性患者，從而可以早發(fā)現(xiàn)、早診斷、早干預(yù)，提高了遺傳性耳聾三級(jí)預(yù)防水平[18-19]。因此新生兒耳聾基因檢測(cè)聯(lián)合聽(tīng)力篩查提高高危聾兒的檢出率，擴(kuò)大聾兒的防治與干預(yù)范圍，同時(shí)給家長(zhǎng)提供科學(xué)合理的遺傳咨詢，能最大限度地使患兒、家庭和社會(huì)受益。

本研究與臨床實(shí)踐相結(jié)合，開(kāi)展針對(duì)性群體篩查，充分發(fā)揮先進(jìn)檢測(cè)技術(shù)從科研到臨床的轉(zhuǎn)化應(yīng)用，建立健全本地區(qū)遺傳性耳聾基因突變譜，對(duì)攜帶遺傳性耳聾突變基因人群進(jìn)行跟蹤指導(dǎo)，從婚育前開(kāi)始進(jìn)行宣教，將預(yù)防保健關(guān)口前移，從根源上降低聾病的發(fā)生，實(shí)現(xiàn)提高出生人口素質(zhì)的目標(biāo)。