范謀寅,王 渠,洪俊浩,楊仕英,李灝帆,李傳旭,肖 莉
(湖州師范學(xué)院 生命科學(xué)學(xué)院,浙江 湖州 313000)
川芎為植物L(fēng)igusticum chuanxiong hort.的干燥根莖,氣香濃,性溫味苦[1]?,F(xiàn)代藥理研究結(jié)果顯示,川芎富含阿魏酸、藁本內(nèi)酯、川芎嗪等活性成分,臨床上用于治療高血壓、心絞痛、偏頭痛、動(dòng)脈粥樣硬化等各種心腦血管疾病[2-3]??诒榔侵冈诳谇粌?nèi)唾液作用下即能迅速崩解或溶解的片劑,與普通片劑相比,口崩片具有起效快及生物利用度高等優(yōu)點(diǎn)[4-5]。本課題以自制的川芎提取物固體分散體為原料,采用粉末直接壓片法制備川芎口崩片,并通過HPLC測定阿魏酸的含量,建立川芎口崩片的含量測定方法,為川芎口崩片的工業(yè)化生產(chǎn)提供理論依據(jù)。
DZG-401真空干燥箱(天津天宇),AL204電子天平(瑞士Mettler-Toledo公司),DP30單沖壓片機(jī)(北京國藥龍立),LC-6A高效液相色譜儀(日本島津) ,ZPJ-4智能片劑四用儀(上海精科)。
阿魏酸對照品(上海哈靈生物,批號:110671);川芎提取物固體分散體(自制);微晶纖維素pH301(MCC),低取代羥丙基纖維素(L-HPC),交聯(lián)聚維酮(PVPP),微粉硅膠,阿司巴甜均購自國藥集團(tuán)化學(xué)試劑公司,甲醇、冰醋酸均購自阿拉丁公司。
2.1.1 制備方法
根據(jù)前期實(shí)驗(yàn)篩選,初步確定川芎口崩片基本處方組成:矯味劑為2%阿斯巴甜,潤滑劑為1%微粉硅膠,崩解劑為PVPP和L-HPC,填充劑兼崩解劑為MCC。按處方量稱取過80目篩的川芎提取物固體分散體與輔料,采用等量遞加混合法混合均勻后直接粉末壓片,片劑沖模為10mm。
在預(yù)實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)上,以崩解時(shí)間(S)作為指標(biāo),選擇對口崩片質(zhì)量影響較大的填充劑兼崩解劑MCC(A)、崩解劑PVPP(B)及崩解劑L-HPC(C)為考察因素,采用L9(34)進(jìn)行正交設(shè)計(jì)優(yōu)化實(shí)驗(yàn)。因素水平表見表1,正交實(shí)驗(yàn)安排及結(jié)果見表2。
表1 正交實(shí)驗(yàn)因素水平表
表2 正交實(shí)驗(yàn)安排與結(jié)果
表2(續(xù))
由表1、表2可知,各因素對川芎口崩片的影響因素大小依次為B>C>A。考慮到口崩片的崩解時(shí)間越短質(zhì)量越好,因此可以確定最優(yōu)處方為A3B3C2,即MCC的質(zhì)量分?jǐn)?shù)為40%,PVPP的質(zhì)量分?jǐn)?shù)為15%,L-HPC的質(zhì)量分?jǐn)?shù)為10%。
按照最優(yōu)制備工藝,采用粉末直接壓片法制備3批川芎口崩片(20190921,20190923,20190925)進(jìn)行驗(yàn)證實(shí)驗(yàn),所得三批樣品外觀均光潔完整,色澤均勻,口感微甜,在24s內(nèi)均能完全崩解,表明該口崩片制備工藝穩(wěn)定可靠,重現(xiàn)性好。
2.4.1 色譜條件
色譜柱:ZORBAX SB-C18(4.6mm×250mm×5μm);流動(dòng)相:甲醇-0.1%冰醋酸(45∶55);檢測波長:313nm;流速:1.0mL·min-1;柱溫:25℃;進(jìn)樣量:20μL。
2.4.2 溶液的配制
2.4.2.1 對照品溶液
精密稱取阿魏酸標(biāo)準(zhǔn)品0.0122g至50mL容量瓶中,加入流動(dòng)相甲醇-0.1 %冰醋酸(45∶55) 超聲使之溶解,放冷,并用流動(dòng)相定容。精密量取標(biāo)準(zhǔn)品溶液1mL置50mL容量瓶中,用流動(dòng)相稀釋至刻度,搖勻,得濃度為4.88μg/mL對照品溶液。
2.4.2.2 供試品溶液
取15片自制口崩片粉碎,稱取片粉0.5186g至25mL容量瓶中,加入流動(dòng)相超聲溶解, 40min,放冷,流動(dòng)相稀釋至刻度,搖勻。高速離心機(jī)10000r/min離心30min,取上清液,過0.45μm微孔濾膜,即得,備用。
2.4.3 系統(tǒng)適應(yīng)性試驗(yàn)
取處方量輔料,按照2.2.2.1項(xiàng)中方法制備陰性對照溶液。分別將20μL對照品溶液及陰性對照品溶液進(jìn)樣,按2.4.1項(xiàng)下色譜條件,考察系統(tǒng)適應(yīng)性。結(jié)果顯示,川芎提取物中阿魏酸分離良好,理論塔板數(shù)按照阿魏酸計(jì)算達(dá)到3500,且輔料對測定不產(chǎn)生干擾。
2.4.4 線性關(guān)系試驗(yàn)
分別精密量取1.0,2.0,3.0,4.0,5.0, 6.0,7.0mL 2.4.2.1項(xiàng)下對照品溶液,用流動(dòng)相稀釋定容至10mL。以阿魏酸峰面積作為縱坐標(biāo)(Y),以阿魏酸標(biāo)準(zhǔn)品濃度作為橫坐標(biāo)(X),繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線,得回歸方程y=96470x+29544,r=0.9997。表明阿魏酸在0.488~3.416μg/mL范圍內(nèi)具有線性良好。
2.4.5 精密度試驗(yàn)
取對照品溶液20μL,注入液相色譜儀,連續(xù)測定6次,通過記錄阿魏酸峰面積,計(jì)算其RSD為0.89%,表明儀器精密度良好。
2.4.6 穩(wěn)定性試驗(yàn)
取供試品溶液,分別在第0,1,2,4,6,8 h注入液相色譜儀,計(jì)算阿魏酸峰面積的RSD為0.91%,表明供試品溶液在8小時(shí)內(nèi)穩(wěn)定性良好。
2.4.7 重復(fù)性試驗(yàn)
分別取自制口崩片樣品6份,每份15片,按照2.2.2.2項(xiàng)下制備6份供試品溶液,注入液相色譜儀,記錄液相色譜圖,計(jì)算阿魏酸峰含量為0.88%,RSD為0.73% 。
2.4.8 加樣回收率試驗(yàn)
精密稱取已知含量的川芎口崩片粉末9份,分為3組。將片粉置于25mL容量瓶中,加入流動(dòng)相超聲溶解后,分別加入阿魏酸標(biāo)準(zhǔn)品溶液0.6,1.0,1.4mL,流動(dòng)相稀釋至刻度,搖勻。10000r/min高速離心30min后,0.45μm微孔濾膜過濾上清液。取續(xù)濾液20μL注入液相色譜儀,計(jì)算阿魏酸的回收率,結(jié)果顯示高、中、低3個(gè)濃度的平均回收率分別為100.9%,100.5%及100.5%,RSD分別為0.97%,0.53%,0.46%。
2.4.9 含量均勻度的測定
取自制川芎口崩片6批,按照2.4.2.2項(xiàng)下制備供試品溶液,20μL注入液相色譜儀,計(jì)算片劑中阿魏酸含量,結(jié)果見下表,實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示采用本制備工藝得到的川芎口崩片質(zhì)量穩(wěn)定,批間差異小。
表3 川芎口崩片中阿魏酸含量
(1) 本研究在預(yù)實(shí)驗(yàn)的基礎(chǔ)上初步確定了川芎口崩片的處方,進(jìn)而通過正交實(shí)驗(yàn)優(yōu)化篩選得到最優(yōu)制備工藝為:MCC的用量為40%,PVPP的用量為15%,L-HPC的用量為10%,阿斯巴甜的用量為2%,微粉硅膠的用量為1%。采用10mm沖模粉末直接壓片法制備,最終得到的川芎口崩片表面光潔崩解,崩解時(shí)間為24s以內(nèi),符合要求。
(2) 以阿魏酸為指標(biāo),建立了川芎口崩片含量測定方法。方法學(xué)實(shí)驗(yàn)結(jié)果均顯示本檢測方法重復(fù)性好,專屬性強(qiáng), 可用于準(zhǔn)確控制川芎口崩片的含量,為進(jìn)一步制定質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)提供依據(jù)。