王惠君，秦學(xué)瑾，潘倩

（中國(guó)人民解放軍陸軍第七十一集團(tuán)軍醫(yī)院，江蘇 徐州）

0 引言

乙肝屬于常見(jiàn)的一種病毒性肝炎，主要是HBV（乙肝病毒）感染所致，具有極強(qiáng)的傳染性[1]。統(tǒng)計(jì)數(shù)據(jù)表明，我國(guó)目前高達(dá)9000 多萬(wàn)人攜帶HBV，HBV 長(zhǎng)期潛伏在人體內(nèi)，部分?jǐn)y帶HBV 者因體內(nèi)HBV 被激活而成為乙型肝炎，若不能及時(shí)診斷、治療可能會(huì)繼續(xù)發(fā)展成肝衰竭、肝硬化、癌變等嚴(yán)重后果，構(gòu)成生命威脅[2]。臨床上主張積極預(yù)防和治療乙肝，研究報(bào)道表明人類免疫系統(tǒng)對(duì)HBV 有特異性免疫反應(yīng)，檢測(cè)和評(píng)估HBV、DNA 和HBV 血清學(xué)指標(biāo)是診斷乙肝和評(píng)估預(yù)后的重要依據(jù)[3]。CLIA 及ELISA 是檢驗(yàn)HBV 的常用方法，但關(guān)于兩種檢測(cè)方法對(duì)乙肝病毒血清學(xué)指標(biāo)的檢驗(yàn)價(jià)值存在爭(zhēng)議，尚未達(dá)成共識(shí)[4]?，F(xiàn)就CLIA 及ELISA 在乙肝病毒血清學(xué)檢驗(yàn)中的應(yīng)用情況進(jìn)行詳細(xì)分析，詳細(xì)報(bào)道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選擇2018 年1 月至12 月我院檢驗(yàn)接收的500 份乙肝病毒血清學(xué)檢驗(yàn)標(biāo)本為研究對(duì)象，其中男性221 例，女性279例；年齡20～81 歲，平均（51.8±2.2）歲。

1.2 研究方法

①采集標(biāo)本：所有患者均空腹采用靜脈采血方式，抽取5 mL 血液，并在4 ℃、3000 r/min 條件下離心處理5 min，取上層清液待檢。②ELISA 試驗(yàn)：室溫下將ELISA 檢驗(yàn)試劑、微孔反應(yīng)條（科華）放置0.5 h，再在微孔反應(yīng)條內(nèi)加入待測(cè)血清標(biāo)本，以封片進(jìn)行封鎖后置于37 ℃水浴箱內(nèi)1 h，去除微孔反應(yīng)條內(nèi)液體，反復(fù)洗滌5 次，再在微孔反應(yīng)條中加入試劑、封片封鎖，置于37 ℃水浴箱內(nèi)0.5 h，最后加進(jìn)終止液。若所得的血清值超過(guò)臨界值則為陽(yáng)性。③CLIA 試驗(yàn)：嚴(yán)格按照試劑盒操作說(shuō)明書進(jìn)行操作。④PCR 定量分析：以實(shí)時(shí)熒光分析儀及配套試劑按照說(shuō)明書測(cè)定。

1.3 觀察指標(biāo)

以熒光定量PCR 檢測(cè)技術(shù)為參照，對(duì)比CLIA、ELISA 法測(cè)定乙肝病毒血清學(xué)標(biāo)志物的準(zhǔn)確性、靈敏性及特異性。其中靈敏性=真陽(yáng)性/（真陽(yáng)性+假陰性），特異性=真陰性/（真陰性+假陽(yáng)性），準(zhǔn)確性=（真陽(yáng)性+真陰性）/總例數(shù)。乙肝病毒血清學(xué)標(biāo)志物包括乙肝病毒表面抗原、乙肝病毒表面抗體、乙肝病毒e 抗原、乙肝病毒e 抗體IgG、乙肝病毒核心抗體IgG 等，其正常值上限為1 index/mL、10 mIU/mL、15 index/mL、100 index/mL、100 index/mL，檢測(cè)結(jié)果高于正常值上限為陽(yáng)性，在正常范圍內(nèi)為陰性。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

數(shù)據(jù)處理采用SPSS 17.0 統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件，計(jì)量資料用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（）表示，計(jì)數(shù)資料用率（%）表示，采用t 和χ2檢驗(yàn)，以P＜0.05 為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

500 例患者PCR 測(cè)定乙肝病毒血清學(xué)標(biāo)志物陽(yáng)性362例、陰性138 例。兩種檢測(cè)方法對(duì)乙肝病毒血清學(xué)指標(biāo)檢測(cè)準(zhǔn)確率、靈敏性、特異性均無(wú)明顯差異（P＞0.05），見(jiàn)表1、表2。

表1 CLIA、ELISA 法測(cè)定結(jié)果與PCR 結(jié)果對(duì)比（n）

表2 兩種檢測(cè)方法的準(zhǔn)確性、靈敏性及特異性對(duì)比（n, %）

3 討論

CLIA 和ELISA 是檢驗(yàn)科常用的檢測(cè)方法，其中化學(xué)發(fā)光免疫檢測(cè)原理是：用酶標(biāo)記物或化學(xué)發(fā)光物對(duì)抗體、抗原進(jìn)行標(biāo)記，發(fā)生免疫反應(yīng)，再在復(fù)合物中置入化學(xué)發(fā)光劑或氧化劑來(lái)讓其發(fā)光，最后經(jīng)儀器檢測(cè)發(fā)光強(qiáng)度，計(jì)算出待測(cè)標(biāo)本濃度[5]。有機(jī)化合物是最常用的化學(xué)發(fā)光物，利用氧化反應(yīng)使其發(fā)光[6]。上個(gè)世紀(jì)化學(xué)發(fā)光免疫檢測(cè)法就已用于臨床檢驗(yàn)，但只是將其作為示蹤信號(hào)，且發(fā)光時(shí)間、靈敏度均較差[7]。隨著現(xiàn)代醫(yī)學(xué)快速發(fā)展，化學(xué)發(fā)光免疫檢測(cè)信號(hào)強(qiáng)度大幅度提升、發(fā)光時(shí)間顯著延長(zhǎng)[8-9]。酶聯(lián)免疫吸附法檢驗(yàn)快速、成本低，不會(huì)對(duì)患者產(chǎn)生危害，但其重復(fù)性不佳、靈敏性差，假陽(yáng)性率及漏檢率均較高，加上酶純度極易受多種因素影響，使得其臨床檢驗(yàn)價(jià)值受到一定限制[10-11]。本組對(duì)比發(fā)現(xiàn)CLIA、ELISA 檢測(cè)結(jié)果的準(zhǔn)確性、靈敏性、特異性均較高，且二者差異并不明顯。與ELISA 相比，CLIA 操作更加簡(jiǎn)單、實(shí)用性更強(qiáng)，在乙肝病毒檢測(cè)、梅毒螺旋體檢測(cè)、腫瘤標(biāo)志物檢測(cè)及心臟疾病檢測(cè)中都具有極高的臨床應(yīng)用價(jià)值。

綜上所述，CLIA 在乙肝病毒血清學(xué)檢測(cè)中的臨床應(yīng)用價(jià)值極高，對(duì)疾病診斷、治療都具有重要指導(dǎo)意義，其應(yīng)用前景廣闊，為了進(jìn)一步擴(kuò)大化學(xué)發(fā)光免疫檢測(cè)法的應(yīng)用范圍和提高其檢測(cè)靈敏度，還有待進(jìn)一步深入開(kāi)發(fā)新型催化劑及發(fā)光物。