李俊燕

【摘要】目的：分析櫟樹桑黃提取物（OPL）在誘導(dǎo)胃癌細(xì)胞凋靈過程當(dāng)中的作用。方法：采用實(shí)驗(yàn)研究方法，對于不同濃度OPL對人癌細(xì)胞增值率抑制作用進(jìn)行分析，通過流式細(xì)胞檢查術(shù)，對細(xì)胞雙染色流式進(jìn)行SGC-7901周期蛋白檢測，并通過Cyclindl表達(dá)方式，對蛋白質(zhì)的凋零進(jìn)行表達(dá)，分析周期阻滯作用。結(jié)果：OPL可以明顯抑制人癌細(xì)胞增生，并且對細(xì)胞凋零產(chǎn)生誘導(dǎo)作用，細(xì)胞在阻滯蛋白GO-G1周期內(nèi)（P<0.05），蛋白表達(dá)PARP下降幅度（P<0.05）。結(jié)論：不同濃度OPL對人癌細(xì)胞SGC-7901具有差異化誘導(dǎo)作用，可以有效將細(xì)胞阻滯在GO-G1周期內(nèi)。

【關(guān)鍵詞】櫟樹桑黃提取物;胃癌細(xì)胞;GO-G1周期

【中圖分類號】R735 【文獻(xiàn)標(biāo)識碼】A 【文章編號】1002-8714（2020）01-0160-01

前言：胃癌發(fā)病常見、致死率高，在世界常見胃癌類型當(dāng)中排名第4。目前臨床當(dāng)中，主要采用手術(shù)切除方法，來對胃癌進(jìn)行治療，但該種方法不僅會對患者生活造成嚴(yán)重影響，還有較高復(fù)發(fā)率。大部分患者及時(shí)進(jìn)行手術(shù)切除，仍需要進(jìn)行化學(xué)放療，該種放療不良反應(yīng)較多，患者白細(xì)胞以及肝腎功能都受到不同程度影響。本院主要結(jié)合櫟樹桑黃這種高等真菌藥物，對胃癌細(xì)胞凋靈作用進(jìn)行誘導(dǎo)分析，現(xiàn)報(bào)道如下：

1資料與方法

1.1一般資料

選擇南京凱基生物生命工程有限公司生產(chǎn)的人癌細(xì)胞株，以及美國高思生物生命工程公司生產(chǎn)的高糖培養(yǎng)基。人癌細(xì)胞凋亡和周期實(shí)驗(yàn)盒選擇上海貝博生命工程公司生產(chǎn)的蛋白濃度測試計(jì)、上海碧云生命工程公司生產(chǎn)的生物抗結(jié)劑。實(shí)驗(yàn)所用OPL為人工乙醇提取物，在95%濃度乙醇當(dāng)中提煉制取，提取率在6.75%-6.85之間，OPL為人工培養(yǎng)制取，產(chǎn)量、規(guī)模、品質(zhì)、具體含量均可控，在實(shí)驗(yàn)周期內(nèi)可以基本保持穩(wěn)定

1.2方法

將四種不同的腫瘤細(xì)胞在不同濃度的高糖培養(yǎng)基當(dāng)中，進(jìn)行系統(tǒng)培養(yǎng)，并按照編號，加入100U/ml鏈霉素和100U/ml青霉素，調(diào)整二氧化碳飽和濃度，在37℃的恒溫細(xì)胞培養(yǎng)箱當(dāng)中，對腫瘤細(xì)胞進(jìn)行培養(yǎng)。

MTT細(xì)胞增殖檢測。對不同類型的人癌細(xì)胞進(jìn)行增殖檢測，分析SGC-7901，HCT-113.DFD-231，hela細(xì)胞在四種濃度OPL當(dāng)中的生長數(shù)量。設(shè)置96孔培養(yǎng)基底盒，按照藥物濃度不同，進(jìn)行清液提取，通過酶聯(lián)免疫檢測方法，對增殖數(shù)值進(jìn)行檢測。

ANNEXIN-V/PI細(xì)胞凋亡檢測。通過96孔培養(yǎng)皿當(dāng)中細(xì)胞的收集情況，進(jìn)行避光孵育。48h之后，取出，通過PBS清洗，加入染色劑，進(jìn)行觀察。

1.3統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件為SPSS21.0。計(jì)量資料采用t檢驗(yàn)，以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（x±s）表示;計(jì)數(shù)資料以x²檢驗(yàn)，以率（%）表示。P<0.05表示差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2結(jié)果

OPL對四種不同人癌細(xì)胞的增生具有明顯抑制作用，但不同濃度的OPL抑制作用具有明顯差別，100чg/ml 與200чg/mlOPL抑制率之間，具有顯著差異（x²=13.121，P<0.05），200чg/ml與300чg/mlOPL抑制率之間，具有顯著差異（x²=14.923，P<0.05），300чg/ml與400чg/mlOPL抑制率之間，具有顯著差異（x²=11.231，P<0.05），100чg/ml與400чg/mlOPL抑制率之間，具有顯著差異（x²=14.176，P<0.05）

表1 不同濃度人癌細(xì)胞抑制率對比

通過48h培養(yǎng)之后，不同濃度OPL對人癌細(xì)胞的抑制作用明顯上升，細(xì)胞完整核膜被破壞，呈現(xiàn)出不規(guī)則收縮狀態(tài)，大部分細(xì)胞核碎裂，呈現(xiàn)出破碎的藍(lán)色熒光。

3討論

目前在胃癌治療當(dāng)中，通過化療大部分患者都會出現(xiàn)非常嚴(yán)重的不良反應(yīng)，因而，尋找低細(xì)胞毒性的抗腫瘤藥物，對于癌癥患者來說，需求非常迫切。很多醫(yī)院都向傳統(tǒng)中醫(yī)尋求答案，例如櫟樹桑黃就是一種低毒性真菌。桑黃提取物OPL可以對腫瘤細(xì)胞增殖起到不同濃度的抑制作用，從而對腫瘤細(xì)胞的發(fā)展周期起到一定阻滯。也就是說，應(yīng)用這種真菌，腫瘤細(xì)胞的無節(jié)制增值可以得到限制。細(xì)胞加速到程序性死亡階段，從變圓、片化，逐漸成為小體，凋亡細(xì)胞內(nèi)膜部分的線粒體電位發(fā)生改變。從本文研究可以看出，300чg/mlOPL作用在胃癌SGC-7901細(xì)胞48h之后，細(xì)胞凋亡的速度可以上升70%，細(xì)胞不受控制的增值可以得到明顯的抑制。

有研究指出，櫟樹桑黃可對細(xì)胞粒體途徑發(fā)生改變作用，通過粒體接入等方式，促進(jìn)正向調(diào)節(jié)作用發(fā)揮，提高凋亡蛋白產(chǎn)生效率。通過這種方式，胃癌SGC-7901細(xì)胞凋亡速度可提高60%-75%，這與本研究成果一致。

綜上所述，櫟樹桑黃具有良好的胃癌細(xì)胞凋零誘導(dǎo)作用，可降低化療不良反應(yīng)，利于患者預(yù)后，可推廣。