曾曉丹，馬明碩，金 星

(吉林化工學(xué)院 分析測試中心，吉林 吉林 132022)

硒(Se)是人體必需的微量元素之一，可以增強(qiáng)人體免疫力，預(yù)防癌癥[1-4].硒是動(dòng)物和人體中抗氧化酶和硒-P蛋白的重要組成部分[5]，對于體內(nèi)氧化還原狀態(tài)起著平衡的作用.同時(shí)，硒還參與許多生理活動(dòng)，防止細(xì)胞膜受氧化損傷、參與甲狀腺激素的代謝、DNA的合成以及可以抵抗感染等[6].

中藥川芎是傘形科植物川芎的根莖，性溫，味辛，微苦，具有活血行氣祛風(fēng)止痛的功效[7].目前對于川芎的研究主要集中在生物堿、含酚酸類及苯酞類等成分上[8-10]，但對于川芎中微量元素研究的比較少.通過對川芎微量元素的分析，可以對藥材中的微量元素的含量進(jìn)行準(zhǔn)確地測定，同時(shí)也可以提高中藥質(zhì)量.本文應(yīng)用原子熒光光譜測定了川芎中硒的含量，以期為研究川芎的藥理藥效提供更合理有效的數(shù)據(jù).

1 實(shí)驗(yàn)部分

1.1 試劑與儀器

原子熒光分析儀(SK2003北京金索坤技術(shù)開發(fā)有限公司)，電子天平(AEG-220島津制作所).硝酸、鹽酸、氫氧化鉀、硼氫化鉀、過氧化氫、硫脲和抗壞血酸(天津永大化學(xué)試劑有限公司)等都為優(yōu)級純.實(shí)驗(yàn)用水為娃哈哈純凈水.

1.2 實(shí)驗(yàn)過程

1.2.1 儀器工作條件

表1為最優(yōu)的儀器工作條件.

表1 儀器工作條件

1.2.2 樣品前處理

準(zhǔn)確稱取三份0.500 0 g川芎樣品，置于50 mL燒杯中，加入硝酸與過氧化氫混合液(5：1)10 mL，保鮮膜密封燒杯口，蓋上表面皿，放置陰暗處12 h以上，冷消解過夜，同時(shí)做空白.次日在電爐上緩慢加熱，此過程不斷加入硝酸與過氧化氫混合物，直至溶液澄清透明，取下冷卻，加入6 mol/L鹽酸2 mL，加熱煮沸5 min，冷卻后移入20 mL比色管中，3 mol/L鹽酸稀釋至刻度，搖勻，靜置備用.

1.2.3 標(biāo)準(zhǔn)曲線配制及繪制

吸取1.00 mL濃度為1 000 μg/mL的標(biāo)準(zhǔn)儲備液移入100 mL容量瓶中，加入5 mLHCl，用去離子水定容至100 mL，此時(shí)的濃度為10.0 μg/mL.吸取1.00 mL濃度為10.0 μg/mL的標(biāo)準(zhǔn)儲備液移入100 mL容量瓶中，加入5 mLHCl，用去離子水定容至100 mL，此時(shí)的濃度為100 ng/mL.

分別準(zhǔn)確吸取0.00，1.50，2.50，5.00，7.50 mL濃度為100 ng/mL 硒標(biāo)準(zhǔn)溶液于50 mL容量瓶中，分別加入10 mL HCl，用去離子水定容，混勻，標(biāo)準(zhǔn)溶液中硒的濃度為0.00，3.00，5.00，10.00，15.00 ng/mL，放置30 min后，進(jìn)行熒光強(qiáng)度測定，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線.

1.2.4 樣品溶液配制

從20 mL比色管中分別吸取16 mL硒樣品溶液到50 mL容量瓶，加鹽酸(36%)10 mL，最后用去離子水定容至刻度，放置備用.

2 結(jié)果與討論

2.1 儀器工作條件的選擇

討論了光電倍增管負(fù)高壓和燈電流的選擇對測試結(jié)果的影響.隨著負(fù)高壓的增加，硒的熒光強(qiáng)度也會增加，但同時(shí)噪聲也會增加.因此在滿足靈敏度的情況下應(yīng)該盡量選用較低的負(fù)高壓.

燈電流較低時(shí)熒光強(qiáng)度低且不穩(wěn)定，隨著燈電流增大，熒光強(qiáng)度也增大.本實(shí)驗(yàn)確定硒負(fù)高壓為280 V，硒燈電流為80 mA時(shí)所得結(jié)果最好.

2.2 化學(xué)反應(yīng)體系的選定

2.2.1 硼氫化鉀濃度的選擇

硒化氫生成速度主要受硼氫化鉀濃度的影響.用量小時(shí)，由于還原能力弱，氣態(tài)物難以形成，靈敏度低.用量過多時(shí)，由于發(fā)生大量氫氣，產(chǎn)生稀釋作用稀釋了氫化物濃度，靈敏度也降低.實(shí)驗(yàn)表明，2.0%硼氫化鉀溶液和0.5%氫氧化鉀混合液為硒還原劑時(shí)效果最好.

2.2.2 預(yù)還原劑影響

硒主要有0價(jià)、4價(jià)、6價(jià)等三種價(jià)態(tài)，但是只有Se(Ⅳ)能夠與硼氫化鉀反應(yīng)，被還原為氫化物，并且硒熒光強(qiáng)度較高.加熱條件下，濃鹽酸可以對硒有還原作用，能把6價(jià)硒還原為4價(jià)硒.本實(shí)驗(yàn)選擇鹽酸為預(yù)還原劑.

2.3 測定結(jié)果

2.3.1 回歸方程、相關(guān)系數(shù)、檢出限、精密度實(shí)驗(yàn)

實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，在0～15 ng/mL濃度范圍內(nèi)與熒光強(qiáng)度呈良好的線性關(guān)系.得到硒回歸方程為y=0.78x+31.35，相關(guān)系數(shù)為0.990 2.測量10次空白溶液的熒光強(qiáng)度，計(jì)算標(biāo)準(zhǔn)偏差(σ)為0.25，根據(jù)檢出限的計(jì)算公式(3 σ/L，L為標(biāo)準(zhǔn)曲線的斜率)，得到檢出限為0.96 ng/mL.

2.3.2 測定結(jié)果

在最優(yōu)化的實(shí)驗(yàn)條件與儀器工作條件下，測得三份川芎中硒含量分別為1.368 ng/g，1.452 ng/g，1.242 ng/g，求得平均值為1.354 ng/g.

2.4 加標(biāo)回收實(shí)驗(yàn)

為了確定本方法的可行性，進(jìn)行了加標(biāo)回收實(shí)驗(yàn)，根據(jù)回收率測定公式(測定值/(含量值+加標(biāo)量))，得到回收率，結(jié)果列于表2.從表2可見加標(biāo)回收率在83.33%～125.00%之間，說明本文建立的川芎中硒的測定方法達(dá)到令人滿意的結(jié)果.

表2 硒回收率測定結(jié)果(n=3)

3 結(jié) 論

采用氫化物發(fā)生-原子熒光光譜法測定了中藥材川芎中硒的含量.實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，硒含量為1.345 ng/g，檢出限為0.96 ng/mL，加標(biāo)回收率在83.33%～125.00%之間.證明氫化物發(fā)生-原子熒光光譜法測硒含量具有靈敏度高、檢出限低等優(yōu)點(diǎn),為川芎的質(zhì)量評估以及藥理研究提供了合理的科學(xué)數(shù)據(jù).