張獻輝，劉 蕾，尚寧寧

（1.河北科技師范學院，河北 秦皇島 066000；2.佳木斯大學，黑龍江 佳木斯 154000）

血乳酸、血清尿素氮及肝糖原水平等參數(shù)的參考價值較高，能夠有效體現(xiàn)運動過程中物質(zhì)代謝現(xiàn)象及能量物質(zhì)狀態(tài)[1]。此外，和疲勞形成機理存在較大關聯(lián)性的生物化學參數(shù)能夠有效反映某一保健食品或是抗疲勞的具體成效。郝瑞芳以裂褶菌子實體干粉試驗組和試驗組和裂褶菌發(fā)酵液試驗組飼喂小鼠，檢測裂褶菌子實體干粉和發(fā)酵液對小鼠肝糖原含量、肌糖原含量、唬拍酸脫氫酶活力、乳酸脫氫酶活力、血清尿素氮含量及血乳酸含量的影響[1]。

1 材料和方法

1.1 裂褶菌子實體干粉

人工栽培的裂褶菌子實體干粉，由云南農(nóng)業(yè)大學食用菌研究所提供。

1.2 裂褶菌發(fā)酵液

液體培養(yǎng)基配方：葡萄糖20.0 g，蛋白胨2 g，KH2PO41.0 g，MgSO40.5 g，酵母浸膏 3.0 g，蒸餾水1 000 mL，pH 6。

裂褶菌菌種，由云南農(nóng)業(yè)大學食用菌研究所提供。500 mL培養(yǎng)瓶培養(yǎng)基裝量335 mL，接種量為1%，25℃靜置培養(yǎng)2 d，然后置于搖床160 r·min-1振蕩培養(yǎng)，直至菌絲球充滿整個培養(yǎng)基（約7天）。培養(yǎng)結束后，發(fā)酵液（含菌絲體） 4℃冰箱冷藏待用。

1.3 試驗方法

1.3.1 實驗動物

40只健康昆明種小鼠，平均體重（20±2）g，由山西醫(yī)科大學實驗動物中心提供。飼喂基礎飼料1周后，分為4組（分籠飼養(yǎng)），每組、10只，雌雄各半。試驗I組：基礎飼料95%，裂褶菌子實體干粉5%，飲自來水；試驗Ⅱ組：基礎飼料90%，裂褶菌子實體干粉10%，飲自來水；試驗Ⅲ組：基礎飼料100%，用裂褶菌發(fā)酵液的稀釋液（發(fā)酵液：水比例為1∶1）代替自來水飲用；對照組（CK）：基礎飼料100%，飲自來水。每組每日早晚各喂一次，自由飲水[2]。

1.3.2 體重指標檢測

在開始試驗的時候開始計算，6 d進行一次小鼠體重測定，如實將相關數(shù)據(jù)記錄下來。

1.3.3 負重游泳測試

最后一次給樣30 min之后，將小鼠體重5%的重物系在其尾根部，并且準備一個水深超過30 cm、溫度為24℃～26℃的游泳箱，小鼠就在其中展開負重游泳運動，讓小鼠四肢持續(xù)性運動，借助秒表將小鼠從開始入水到頭部完全呈現(xiàn)入水狀態(tài)并且8 s未從水面浮出的時長記錄下來，這就是小鼠力竭游泳的實際時長。

1.3.4 血乳酸測定

最后一次給受試樣品30 min之后，不負重游泳600 s之后停止，在游泳之前及之后、休息20 min之后進行血液樣本采集，并且進行SOIL測定，主要是借助全血乳酸試劑盒進行乳酸水平的檢測[3]。

1.3.5 血尿素氮檢測

最后一次給樣30 min之后，在30℃的水箱內(nèi)以零負重的方式進行游泳運動，時間是1.5 h，在1 h的休息之后，采取拔眼球的方式進行血液采集，在不使用抗凝劑的情況下，在4℃的冷藏箱內(nèi)進行存儲，存儲時間是3 h，采取離心措施，轉速是2 000 r·min-1，共進行15 min的離心操作，進而獲得血清，采取二乙酞-肟法完成檢測[4]。

表1 血尿素氮測試盒測定步驟Tab.1 Determination steps of blood urea nitrogen test box

徹底混勻，以沸水浴的方式進行15 min的水浴，以雙蒸水為溶劑進行調(diào)零，并且檢測520 nm的吸光度值。

1.3.6 肝糖原檢測

借助蒽銅法進行肝糖原的測定，若是加熱蒽銅，蒽銅就會和游離糖或是多糖反應，溶液顏色也會因此改變，變成藍綠色，620 nm能檢測到最大吸收峰，因此能采取比色技術分析糖原水平[1]。

1.3.7 數(shù)據(jù)分析與結果評估

游泳時長、血乳酸水平、血尿素氮水平及肝糖原水平都屬于計量數(shù)據(jù)，借助方差分析的方法處理計量資料，以SPSS 19.0分析相關數(shù)據(jù)，并且以（±s）呈現(xiàn)。負重游泳測試數(shù)據(jù)是陽性，血乳酸水平、血尿素氮水平及肝糖原水平為任意一個數(shù)值，若結果仍為陽性，就能表明此受試樣品的治療作用中包括改善疲勞。

2 結果及分析

2.1 裂褶菌對小鼠血乳酸含量的影響

試驗I組、試驗Ⅱ組小鼠泳后20 min，其LD含量極顯著低于對照組小鼠，試驗Ⅲ組小鼠LD含量顯著低于對照組小鼠；泳后50min，試驗I組、試驗Ⅱ組和試驗Ⅲ組小鼠的LD含量均極顯著低于對照組小鼠，詳見表2。

由表2可知，小鼠停止游泳后20 min～50 min，試驗I組、試驗Ⅱ組和試驗Ⅲ組的血乳酸消除速率分別比對照組提高75%、83%和67%，說明裂褶菌具有極顯著提高LD消除速率的作用。

2.2 負重游泳試驗結果分析

負重游泳試驗結果見表3。

如表3所示，低、中及高劑量組相對于對照組而言，游泳時長分別提升了16.01%、79.66%、17.68%。并且相對于對照組而言，中劑量組顯著提升（P<0.05）。

表2 褶菌對小鼠血乳酸含量的影響Tab.2 Effect of pleated bacteria on blood lactate content in mice

表3 負重游泳試驗結果Tab.3 Experimental results of weight-bearing swimming

I組及Ⅱ組小鼠游泳時長雖然得到提升，可是相對于對照組而言，這兩組的提升并不存在明顯的差異。這就表示裂褶菌可以使得小鼠運動耐力得到強化，并能夠因此使得運動時長得到延長。多糖能夠借助機體糖儲備水平的提升，使得運動功能增強，而運動疲勞也能因此改善，此外，還能夠使得運動期間對蛋白質(zhì)的過度利用效應降低。

2.3 生化指標檢測結果分析

試驗小鼠的生化指標測定結果見表4。

表4 生化指標測定結果Tab.4 Determination results of biochemical indexes

由表4可知，相對于陰性對照組而言，Ⅱ組相關參數(shù)的水平與對照組相比，差異并不明顯；Ⅲ組內(nèi)血乳酸水平與肝糖原水平，相對于對照組來說，差異存在統(tǒng)計學研究價值（P<0.05），血尿素氮水平相對于對照組而言，差異存在統(tǒng)計學研究價值（P<0.01）；高劑量組血尿素氮水平相對于對照組來說，差異存在統(tǒng)計學研究價值（P<0.05）。

血乳酸在機體供能環(huán)節(jié)中發(fā)揮關鍵性作用，糖酵解及有氧代謝期間都會合成血乳酸，并且能夠借助糖異生產(chǎn)生糖，因此實現(xiàn)能量供給。劇烈運動時間若是相對較長，機體就會處于氧氣相對缺乏的狀態(tài)，這就會促進糖酵解，并因此使得乳酸水平顯著提升，體內(nèi)乳酸含量也會顯著升高，內(nèi)環(huán)境的穩(wěn)定性也會因此得不到保障；乳酸出現(xiàn)嚴重的堆積現(xiàn)象，而肌肉內(nèi)的H+及Pi水平明顯提升，機體的pH就會顯著降低，糖酵解或是其他代謝方式也會因此受到影響，體內(nèi)代謝也因此會出現(xiàn)失衡的現(xiàn)象，機體就會出現(xiàn)疲勞。

3 結論

試驗I組小鼠抗疲勞效果優(yōu)于試驗Ⅱ組，說明食用裂褶茵的最佳劑量低于10%，超過最佳劑量反而影響裂褶菌在小鼠體內(nèi)的消化和吸收，最佳劑量還有待于進一步的試驗研究。

另外，小鼠食用裂褶菌發(fā)酵液的抗疲勞效果較食用子實體干粉的稍差一些，原因可能是由于飲用發(fā)酵液的小鼠對裂褶菌有效成分的吸收比食用子實體干粉混合飼料的差，故而作用效果不明顯，如果對小鼠采取灌胃，效果將會更好。