魏 毅

（南京森林警察學(xué)院，江蘇 南京 210023）

蜜環(huán)菌（Armillaria mellea） 又名榛蘑、臻蘑，主要產(chǎn)自我國北方地區(qū)，是一種常見的食用菌。蜜環(huán)菌兼具食用和藥用功效，其保健功效也日益浮現(xiàn)出來。而改善睡眠和提高免疫力是食用菌最為重要的保健功效之一，基于小鼠睡眠和免疫試驗(yàn)角度，從定量分析入手，剖析蜜環(huán)菌提取物改善睡眠和免疫調(diào)節(jié)的影響。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)樣品

蜜環(huán)菌提取物在實(shí)驗(yàn)室恒溫恒濕條件下，按照規(guī)范流程，進(jìn)行試驗(yàn)樣品前處理（分選，粉碎，提純，分裝等）。

1.2 試驗(yàn)動(dòng)物

雄性小鼠，每只小鼠體重（20±2） g，數(shù)量為120只。按照3種戊巴比妥鈉睡眠法分為3批，每批40只；然后將每批按照劑量高低，平均分為4組（包含空白對(duì)照組）。

1.3 試劑與劑量

試劑主要為戊巴比妥鈉、巴比妥鈉、無菌蒸餾水，純度均為實(shí)驗(yàn)生化類優(yōu)級(jí)純。蜜環(huán)菌提取物劑量從低到高為60 mg·kg-1、150 mg·kg-1、500 mg·kg-1，另外選擇無菌蒸餾水作為空白對(duì)照。

1.4 試驗(yàn)方法

1.4.1 直接睡眠法

將試驗(yàn)用的120只小鼠，按照劑量高低分別為CK、低、中、高，CK組為小鼠灌胃無菌蒸餾水，其他試劑組為小鼠灌入對(duì)應(yīng)劑量蜜環(huán)菌提取物，其是觀察小鼠的睡眠情況，并進(jìn)行統(tǒng)計(jì)。小鼠睡眠情況是通過翻正反射消失為衡量指標(biāo)，如果小鼠在1 min以內(nèi)不能翻正，則可以認(rèn)定小鼠入睡，如果小鼠恢復(fù)了正常姿態(tài)，即小鼠醒來，這個(gè)時(shí)間間隔即為小鼠睡眠時(shí)間。

1.4.2 戊巴比妥鈉睡眠法

1)延長戊巴比妥鈉睡眠時(shí)間試驗(yàn)

給小鼠針入戊巴比妥鈉（40 mg·kg-1），蜜環(huán)菌提取物針入量為0.2 mL·20-1g-1，判斷試驗(yàn)組小鼠的睡眠時(shí)間與CK組小鼠的睡眠時(shí)間是否具有統(tǒng)計(jì)學(xué)的關(guān)聯(lián)性。在做試驗(yàn)之前，根據(jù)翻正反射消失指標(biāo)，判斷小鼠是否入睡，只有當(dāng)小鼠翻正反射消失時(shí)，才可以進(jìn)行試驗(yàn)。

2)戊巴比妥鈉閾下劑量催眠試驗(yàn)

首先通過80%以上試驗(yàn)小鼠翻正反射不消失的指標(biāo)，確定戊巴比妥鈉閾下最大催眠劑量，然后給不同劑量組小鼠針入20 mg·kg-1溶液，通過觀察試驗(yàn)小鼠翻正反射消失指標(biāo)，如若超過1 min為小鼠入睡，以此來記錄30 min以內(nèi)入睡小鼠數(shù)量。該試驗(yàn)適宜在安靜恒溫恒濕環(huán)境中進(jìn)行，以保證最佳試驗(yàn)結(jié)果。

3)巴比妥鈉睡眠潛伏期試驗(yàn)

在上述兩個(gè)試驗(yàn)基礎(chǔ)上，在給試驗(yàn)小鼠灌入最后一次不同劑量蜜環(huán)菌提取物之后的20 min后，給試驗(yàn)小鼠針入巴比妥鈉（200 mg·kg-1），詳細(xì)錄入小鼠對(duì)該試驗(yàn)的影響。

1.4.3 遲發(fā)型超敏反應(yīng)法

通過外界誘發(fā)的一種細(xì)胞免疫超敏反應(yīng)法，觀察試驗(yàn)小鼠自身對(duì)于蜜環(huán)菌提取物的免疫調(diào)節(jié)作用。該方法的試驗(yàn)分組和試劑注射，與直接睡眠觀察法相同。按照國家標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行試驗(yàn)。

1.4.4 碳粒廓清試驗(yàn)法

基于將特定濃度含碳粒溶液注入到小鼠靜脈中，讓其與小鼠血液結(jié)合，進(jìn)而觀察小鼠重要臟器（肝、脾等）中免疫細(xì)胞的變化，該試驗(yàn)可以在一定程度上反映小鼠免疫調(diào)節(jié)作用。

2 結(jié)果與分析

2.1 蜜環(huán)菌提取物對(duì)改善睡眠的影響

2.1.1 蜜環(huán)菌提取物對(duì)小鼠體重以及直接睡眠的影響

在進(jìn)行其他試驗(yàn)之前，需要通過小鼠體重變化特征，來判斷蜜環(huán)菌提取物對(duì)于小鼠本身是否有影響。試驗(yàn)用不同分組的小鼠，4組小鼠體重變化詳見表1。

表1 蜜環(huán)菌提取物對(duì)小鼠體重的影響變化表Tab.1 Effect of Armillaria mellea extract on body weight of mice

如表1所示，灌喂30 d，小鼠體重變化沒有呈現(xiàn)統(tǒng)計(jì)學(xué)上的特征，說明蜜環(huán)菌提取物本身對(duì)于小鼠沒有致病性影響。通過觀察各組小鼠直接睡眠試驗(yàn)，4個(gè)分組中的小鼠，在2 h內(nèi)，均未發(fā)現(xiàn)明顯的直接睡眠情況。

2.1.2 蜜環(huán)菌提取物對(duì)戊巴比妥鈉睡眠的影響

蜜環(huán)菌提取物對(duì)戊巴比妥鈉睡眠的影響主要從3個(gè)方面來體現(xiàn)。

1)蜜環(huán)菌提取物在戊巴比妥鈉誘導(dǎo)睡眠時(shí)間試驗(yàn)中的作用

時(shí)間上，試驗(yàn)小鼠需要灌喂蜜環(huán)菌提取物30 d，戊巴比妥鈉誘導(dǎo)睡眠時(shí)間試驗(yàn)的結(jié)果詳見表2。

表2 蜜環(huán)菌提取物對(duì)睡眠時(shí)長的影響Tab.2 Effects of Armillaria mellea extracts on sleep duration

由表2可知，空白對(duì)照組相比于試劑劑量組，戊巴比妥鈉誘導(dǎo)睡眠時(shí)間是比較短的，即說明攝入一定劑量可以讓戊巴比妥鈉誘導(dǎo)睡眠時(shí)間在一定程度上變長；對(duì)比3組不同劑量組的數(shù)據(jù)，也可以看出隨著劑量的增加，戊巴比妥鈉誘導(dǎo)睡眠時(shí)間也呈現(xiàn)出不斷增加的趨勢(shì)。

2）蜜環(huán)菌取物對(duì)戊巴比妥鈉閾下劑量催眠試驗(yàn)的影響

戊巴比妥鈉閾下劑量催眠試驗(yàn)，同樣是需要試驗(yàn)小鼠灌喂蜜環(huán)菌提取物30 d，結(jié)果見表3。

表3 蜜環(huán)菌提取物對(duì)入睡率的影響Tab.3 Effect of Armillaria mellea on falling asleep rate

由表3可知，當(dāng)蜜環(huán)菌提取物劑量升高時(shí)，小鼠的入睡比率有較為明顯的提升，而灌喂的不是蜜環(huán)菌提取物，是空白對(duì)照組的無菌蒸餾水時(shí)，小鼠的入睡比率是相對(duì)較低的。這可以說明，蜜環(huán)菌提取物在達(dá)到一定劑量之后，可以起到提高小鼠入睡比率的積極作用，對(duì)改善睡眠有促進(jìn)影響。

3）蜜環(huán)菌提取物對(duì)巴比妥鈉睡眠潛伏期的影響

巴比妥鈉睡眠潛伏期試驗(yàn)，與前兩個(gè)試驗(yàn)相似，需要試驗(yàn)小鼠灌喂蜜環(huán)菌提取物30 d，結(jié)果見表4。

表4 小鼠蜜環(huán)菌提取物對(duì)巴比妥鈉睡眠潛伏期試驗(yàn)變化Tab.4 Changes in sleep latency test of Armillaria mellea extracts against barbituric sodium

由表4可知，當(dāng)灌喂溶劑為無菌蒸餾水時(shí)，小鼠的入睡潛伏期是較長的，即小鼠需要較長的時(shí)間入睡。當(dāng)灌喂蜜環(huán)菌提取物劑量逐步升高，可以明顯的看到小鼠的入睡潛伏期在不斷縮短，這就說明蜜環(huán)菌提取物對(duì)于縮短小鼠的入睡潛伏期有一定的促進(jìn)作用，蜜環(huán)菌提取物劑量越高，小鼠入睡潛伏期越短，即小鼠入睡速度越快。

2.2 蜜環(huán)菌提取物對(duì)免疫作用調(diào)節(jié)的影響

2.2.1 蜜環(huán)菌提取物對(duì)小鼠遲發(fā)型超敏反應(yīng)的免疫調(diào)節(jié)影響

遲發(fā)型超敏反應(yīng)試驗(yàn)過程中，除去空白對(duì)照組之外，其他小鼠都攝入了不同劑量的蜜環(huán)菌提取物。在試驗(yàn)過程中，利用小鼠效應(yīng)T細(xì)胞參與抗原反應(yīng)，等待36 h～48 h之后，觀察小鼠的慢性炎癥癥狀，主要表現(xiàn)為局部出現(xiàn)血絲乃至紅腫，對(duì)患處進(jìn)行觀察計(jì)量統(tǒng)計(jì)，結(jié)果見表5。

表5 蜜環(huán)菌提取物對(duì)遲發(fā)型超敏反應(yīng)的影響Tab.5 Effects of Armillaria mellea extracts on delayed-type hypersensitivity

由表5可知，CK組幾乎未見反應(yīng)，而不同劑量組的反應(yīng)，隨著劑量的增大，紅腫效應(yīng)也有增加的趨勢(shì)。這說明蜜環(huán)菌提取物的攝入，對(duì)于小鼠免疫細(xì)胞的針對(duì)性反應(yīng)，有一定的正相關(guān)影響。

2.2.2 蜜環(huán)菌提取物對(duì)小鼠碳粒廓清試驗(yàn)的免疫調(diào)節(jié)影響

碳粒廓清試驗(yàn)過程中，包括空白對(duì)照組在內(nèi)，對(duì)所有組別的小鼠靜脈血液中注入碳粒溶液，在碳粒與小鼠血液結(jié)合過程中，小鼠免疫細(xì)胞發(fā)揮功效。在此過程中，除去空白對(duì)照組之外，其他組別的小鼠均攝入了不同劑量的蜜環(huán)菌提取物，通過對(duì)比小鼠血液中肝指數(shù)和淋巴指數(shù)的數(shù)值，以及計(jì)算碳粒廓清試驗(yàn)的吞噬指數(shù)α和k值，詳見表6。

表6 蜜環(huán)菌提取物對(duì)碳粒廓清試驗(yàn)的影響Tab.6 Effect of Armillaria mellea extract on carbon particle clearance test

由表6可知，空白對(duì)照組的數(shù)值相對(duì)較低，劑量組的數(shù)值隨著劑量的增加，呈現(xiàn)逐步增加的趨勢(shì)，這說明蜜環(huán)菌提取物的攝入，對(duì)于小鼠的免疫系統(tǒng)調(diào)節(jié)，產(chǎn)生了積極影響。

3 結(jié)論

通過小鼠對(duì)蜜環(huán)菌提取物的攝取，引入4種睡眠試驗(yàn)，判斷蜜環(huán)菌提取物對(duì)于小鼠睡眠的影響和作用。首先，試驗(yàn)小鼠的自身重量，隨著蜜環(huán)菌提取物劑量的增加，有不斷增加的趨勢(shì)，初步判斷蜜環(huán)菌提取物對(duì)于小鼠并無致病性負(fù)面影響。然后開展的4種睡眠試驗(yàn)，直接睡眠試驗(yàn)法并沒有在試驗(yàn)結(jié)果數(shù)據(jù)中，找到明顯的小鼠睡眠相關(guān)性支撐。在隨后的3種戊巴比妥鈉睡眠試驗(yàn)中，戊巴比妥鈉誘導(dǎo)睡眠試驗(yàn)的結(jié)果說明攝入一定劑量蜜環(huán)菌提取物可以延長戊巴比妥鈉誘導(dǎo)睡眠時(shí)間，對(duì)比數(shù)據(jù)，也可以看出隨著劑量的增加，戊巴比妥鈉誘導(dǎo)睡眠時(shí)間變長；蜜環(huán)菌提取物劑量升高時(shí)，小鼠的入睡比率有較為明顯的提升，蜜環(huán)菌提取物在達(dá)到一定劑量之后，可以起到提高小鼠入睡比率的積極作用，對(duì)改善睡眠有促進(jìn)影響；巴比妥鈉睡眠潛伏期試驗(yàn)的結(jié)果，也呈現(xiàn)出蜜環(huán)菌提取物劑量逐步升高，小鼠的入睡潛伏期在不斷縮短，蜜環(huán)菌提取物對(duì)于縮短小鼠的入睡潛伏期有一定的促進(jìn)作用，隨著蜜環(huán)菌提取物劑量越高，小鼠入睡潛伏期越短，即小鼠入睡速度越快。由此，可以看出，蜜環(huán)菌提取物，在試驗(yàn)小鼠過程中，達(dá)到一定劑量的時(shí)候，對(duì)于小鼠的睡眠起到了較為明顯的改善效果。

由此可見，蜜環(huán)菌提取物在飽含大量的生物益生特質(zhì)基礎(chǔ)上，蜜環(huán)菌常見的藥用價(jià)值，與本文的試驗(yàn)結(jié)果均呈現(xiàn)出良好的一致性，即規(guī)定劑量的蜜環(huán)菌提取物對(duì)于改善睡眠以及免疫系統(tǒng)的調(diào)節(jié)，都有較為積極的影響。