趙建琳 朱耘

2020年1月20日，謝宣（化名）帶著16日開始發(fā)低燒、18日出現(xiàn)呼吸困難的媽媽到了湖北省人民醫(yī)院，當(dāng)天的CT報(bào)告里顯示“雙肺感染，不排除病毒性肺炎”，及至她三天后輾轉(zhuǎn)五家醫(yī)院復(fù)診，都沒能用到試劑盒。

從那開始，試劑盒短缺成了大眾最關(guān)注的話題之一。國內(nèi)生物制藥公司也都相繼加快生產(chǎn)步伐，有公司生產(chǎn)核酸檢測試劑盒的產(chǎn)量從日均2萬人份，提高到日均10萬人份。

核酸檢測試劑盒的誕生

目前醫(yī)院在進(jìn)行新冠肺炎篩查時(shí)，除了檢查血項(xiàng)、CT外，還要從咽喉部采樣做核酸檢測，通過核酸檢測試劑盒進(jìn)行PCR反應(yīng)后的結(jié)果進(jìn)行確診。湖北省某人民醫(yī)院護(hù)士羅一南（化名）告訴記者，由于新冠病毒容易發(fā)生在胸膜下和下呼吸道，有時(shí)上呼吸道病毒量少，以及病毒性肺炎痰少多干咳，導(dǎo)致咽喉部取樣測試出現(xiàn)假陰性，這也與各個(gè)廠家做出的試劑盒敏感度有關(guān)。

三優(yōu)生物醫(yī)藥（上海）有限公司（以下簡稱三優(yōu)生物）研發(fā)副總監(jiān)閆閏向《商學(xué)院》記者表示，不同公司研發(fā)制造的試劑盒可能會出現(xiàn)精確度不同，“這是由配套溶液的一致性、聚合酶的活性、PCR儀器的穩(wěn)定性、病人樣品情況和從樣品中提取核酸的方式等因素造成的?！?/p>

羅一南認(rèn)為，最準(zhǔn)確的是做支氣管鏡和肺泡灌洗液檢測，“但是太麻煩。”相對來說，核酸檢測在咽喉部取材，做完即走，比CT便捷迅速，不容易交叉感染，風(fēng)險(xiǎn)也主要集中在PCR檢測的反應(yīng)環(huán)節(jié)。

在國家藥監(jiān)局通過應(yīng)急審批的7個(gè)新冠病毒檢測產(chǎn)品對應(yīng)企業(yè)中，上海輝睿生物科技有限公司（以下簡稱輝睿生物）是被國家衛(wèi)健委在1月18日發(fā)布的《新型冠狀病毒感染的肺炎診療方案（試行）》和《全國各?。▍^(qū)、市）首例新型冠狀病毒感染的肺炎病例確認(rèn)程序》里點(diǎn)名提到的各省級疾控中心檢測試劑盒可選擇的三家企業(yè)之一。

“其實(shí)做疾病防控工作，最主要的是快速反應(yīng)，說實(shí)話，最開始我沒想到（疫情）會這么嚴(yán)重，在中國疾控中心沒有公布測序結(jié)果的時(shí)候，我們參與的只是技術(shù)服務(wù)，全序測序完成后，我們就在24小時(shí)之內(nèi)完成了熒光定量PCR的引物探針合成，因?yàn)槲覀冇凶约旱暮铣善放?，不用去外面下訂單?！陛x睿生物總經(jīng)理李輝向《商學(xué)院》記者回憶道。

對于輝睿生物來說，這不是第一次參與重大突發(fā)的公共衛(wèi)生事件了，李輝介紹，從早前的H1N1甲型流感病毒開始，一直到H7N9型禽流感、MERS-CoV中東呼吸綜合征，他們都參與了熒光定量PCR的引物探針合成?！耙锾结樉褪侨斯ず铣傻腄NA，是PCR的重要組成部分。”

李輝告訴記者，拿到基因序列，在其上設(shè)計(jì)引物探針，是核酸檢測試劑盒研發(fā)的基礎(chǔ)，也就是篩選更合適的引物探針和更合適的條件的過程?！罢麄€(gè)過程沒有很難，就是基礎(chǔ)工作要做扎實(shí)，基因序列一公布，流程其實(shí)很簡單。”

在閆閏看來，核酸試劑盒的研發(fā)生產(chǎn)技術(shù)門檻不高，相關(guān)技術(shù)成熟，主要看產(chǎn)能，即“化工原料供應(yīng)能力、原料合成能力?！遍Z閏接著說：“主要是酶和引物探針，酶需要生物技術(shù)公司去提供，一般春節(jié)前，生產(chǎn)酶的工廠都會多供應(yīng)出一些，但這個(gè)量與疫情下所需要的量是無法相比的，再加上工人春節(jié)放假，有些工人能召回，有些召不回，產(chǎn)能需要有個(gè)恢復(fù)過程，只是現(xiàn)在最要緊的是擴(kuò)大產(chǎn)能?！?/p>

只是，要做到靈敏度高的試劑盒并不容易，中科院半導(dǎo)體研究所研究員任魯風(fēng)向記者介紹，當(dāng)前市場上最新的有96家企業(yè)推出核酸檢測試劑盒，但到現(xiàn)在為止，僅有7個(gè)產(chǎn)品拿到國家藥監(jiān)局應(yīng)急審批，其中6個(gè)采用熒光定量PCR法。

任魯風(fēng)告訴記者，影響試劑盒精確度的因素太多，光是檢測靶點(diǎn)，被WHO（世界衛(wèi)生組織）推薦的就有6套，即便使用同一套檢測靶點(diǎn)，也會因試劑盒的成分組成差異導(dǎo)致生化反應(yīng)存在細(xì)微差別，此外，酶、離子用量和溶液、底物濃度配比都會影響試劑盒的靈敏度。這也是對廠家技術(shù)實(shí)力的考驗(yàn)。

“目前國內(nèi)對試劑盒的評價(jià)標(biāo)準(zhǔn)主要是通過臨床對比實(shí)驗(yàn)來看檢測效果，就新冠病毒而言，只有陰性陽性符合性標(biāo)準(zhǔn)，并無試劑原料質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)，配方也只規(guī)定了組成成分，并不規(guī)定具體比例，公開標(biāo)準(zhǔn)也均是推薦性，而非強(qiáng)制性，因?yàn)檫@些標(biāo)準(zhǔn)其實(shí)并無必要去統(tǒng)一，這更多是技術(shù)問題，也是市場機(jī)制下優(yōu)勝劣汰的一部分。”任魯風(fēng)認(rèn)為，要提高檢測精確度，企業(yè)只能不斷修煉內(nèi)功，提高對業(yè)務(wù)的認(rèn)識和理解，從系統(tǒng)上全面積累經(jīng)驗(yàn)。

試劑盒“加速度”

新冠肺炎疫情引起重大關(guān)注的時(shí)候，也正是人們準(zhǔn)備回家過年的時(shí)候。那時(shí)，輝睿生物進(jìn)口購買的酶等原材料只夠提供5萬人份到10萬人份的試劑盒，并已全部貢獻(xiàn)到市場上。彼時(shí)，許多員工已買好回家的車票，小年夜那天，李輝決定做一個(gè)動員。

同樣通過國家藥監(jiān)局審批的華大基因也是早在2020年1月初就緊急組織科研及生產(chǎn)力量研制相關(guān)試劑盒。華大基因表示，為確保準(zhǔn)確鑒定，避免形成交叉誤判，公司在用72小時(shí)完成初步研發(fā)后，進(jìn)行了試劑盒工藝和質(zhì)量控制等環(huán)節(jié)穩(wěn)定性和準(zhǔn)確性的嚴(yán)格評估，最終在1月14日宣布完成試劑盒的全部研制工作。

華大補(bǔ)充道：“由于此次新冠病毒屬于RNA病毒，單鏈病毒發(fā)生變異的概率更高。采用基于高通量測序的宏基因組檢測，可以有效監(jiān)測病毒在傳播過程中可能發(fā)生的變異情況，并覆蓋更廣的檢測范圍?！?/p>

為加快生產(chǎn)進(jìn)度，輝睿生物的員工把原先所做的其他產(chǎn)品一一暫停，全部精力投入生產(chǎn)針對此次新冠病毒的核酸檢測試劑盒。這樣的改變是顯著的，疫情最初，公司的試劑盒產(chǎn)能也就2萬多人份，到了1月底，產(chǎn)能已達(dá)日均5萬人份，現(xiàn)在日均10萬多人份，甚至李輝已經(jīng)記不清這些數(shù)據(jù)的拐點(diǎn)具體出現(xiàn)在哪天，“反正公司天天都在做這個(gè)。”

華大基因表示截至2月4日，試劑盒日均產(chǎn)能已達(dá)10萬人份，同時(shí)已加緊安排增加30萬人份的試劑盒生產(chǎn)，新儲備了30萬人份的試劑盒原料。華大基因相關(guān)負(fù)責(zé)人告訴記者，目前公司已經(jīng)完成了約30萬人份的新冠病毒核酸檢測試劑盒，并隨著疫情防控進(jìn)入關(guān)鍵時(shí)期，將全力服務(wù)疫情防控需要，讓每一位疑似病例都能盡快確診。

等候檢測結(jié)果漫長的秘密

隨著試劑盒生產(chǎn)企業(yè)產(chǎn)能不斷提高，幾十萬甚至上百萬的核酸檢測試劑盒最終成為疑似病例確診的重要依據(jù)。但記者注意到，國家衛(wèi)健委1月18日發(fā)布的《全國各?。▍^(qū)、市）首例新型冠狀病毒感染的肺炎病例確認(rèn)程序》里規(guī)定，各?。▍^(qū)、市）首例病例樣品需交由省疾病預(yù)防控制中心實(shí)驗(yàn)室檢測，再由中國疾病預(yù)防控制中心實(shí)驗(yàn)室復(fù)核，最后結(jié)合病例臨床表現(xiàn)、流行病學(xué)史，以及省級醫(yī)療救治專家組會診研判得出最終結(jié)果。

李輝告訴記者，這是最早期的檢測流程，以前的傳染病也是按照這個(gè)方法實(shí)施的。他告訴記者：“對傳染病的檢測，是要非常謹(jǐn)慎的，誰都怕報(bào)上去假陽性，就像埃博拉病毒從非洲傳入到中國時(shí)，也要由國家來復(fù)核，他們更專業(yè)。同時(shí)，省里首例得到確診也就證明省里的檢測方法得到了認(rèn)可，隨著疫情的發(fā)展，國家也調(diào)整了檢測流程，后續(xù)省里就可以自己報(bào)了，甚至市里也可以自己報(bào)?！?/p>

閆閏也認(rèn)為這種謹(jǐn)慎是非常必要的，“畢竟，如果出現(xiàn)誤診，就相當(dāng)于將一個(gè)沒有感染的人置身于感染群中，而謹(jǐn)慎之后怎么提高效率，是值得討論的問題?！?/p>

羅一南前幾日在跟記者聊天時(shí)就提到，病人在發(fā)熱門診接受完評估，就去門診二樓耳鼻喉科采樣，當(dāng)天就能出結(jié)果。由醫(yī)院來完成檢測，大大提高了工作效率。

“國家要求病毒檢測必須在P2實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行，檢測人員要采取生物安全三級個(gè)人防護(hù)，因?yàn)槟玫降氖菢悠防锸菦]有滅活的病毒，一旦處理不小心就會被感染。”閆閏告訴記者，除了省級疾病預(yù)防控制中心，通常只有三甲醫(yī)院才配有這種實(shí)驗(yàn)室，所以地方上的檢測也基本以三甲醫(yī)院為主。

具體而言，臨床PCR檢驗(yàn)實(shí)驗(yàn)室最少需要三個(gè)具有獨(dú)立空調(diào)系統(tǒng)的房間來避免操作時(shí)的交叉污染，第一個(gè)房間用來提取樣品核酸，第二個(gè)房間用來配制檢測試劑，然后將加入了核酸的試管拿到第三個(gè)房間做熒光定量PCR反應(yīng)（如果是非定量PCR，還需在第四個(gè)房間做產(chǎn)物分析）。

這不僅要求每個(gè)房間具備獨(dú)立通風(fēng)、負(fù)壓環(huán)境，還要求檢驗(yàn)人員經(jīng)受過嚴(yán)格的分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)操作訓(xùn)練，“要達(dá)到可靠的操作水平，至少需要半年至一年的培訓(xùn)，且醫(yī)院檢驗(yàn)科的分子檢測往往占比很低，即使是三甲醫(yī)院，能做該工作的人可能也只有兩三個(gè)，而一個(gè)人操作最快也要三四個(gè)小時(shí)，如果樣品多，時(shí)間就更長。”任魯風(fēng)告訴記者。為什么新冠肺炎疑似病例久久等不到檢測結(jié)果，這或許就是答案。

隨著新冠肺炎認(rèn)識的深入和診療經(jīng)驗(yàn)累積，2020年2月2日，湖北省的病例診斷分類中增加“臨床診斷”，當(dāng)日湖北省新增14840例病例。

還有更多的病毒待攻關(guān)

2月7日，國家衛(wèi)健委高級別專家組組長鐘南山在參加廣東省衛(wèi)生健康委員會會議后表示，疫情拐點(diǎn)的到來還得有幾天，關(guān)鍵仍要做好早發(fā)現(xiàn)、早隔離，新增病例是一個(gè)重要的指標(biāo)。目前試劑盒廠家也都繼續(xù)趕工生產(chǎn)，那么到疫情結(jié)束時(shí)是否會出現(xiàn)產(chǎn)能過剩？到時(shí)將如何解決？

在李輝看來，產(chǎn)能過剩其實(shí)并不太擔(dān)心，因?yàn)檫€可以用到其他傳染病系列中，他現(xiàn)在最希望的就是第二天就用不上這些試劑盒了?！翱吹浆F(xiàn)在大街上店鋪都不開業(yè)，經(jīng)濟(jì)這么蕭條，真不想賺這個(gè)錢，這幾天我也買了一些消毒用品，準(zhǔn)備捐掉，也不希望看到有人在炒這些東西，大家應(yīng)該全力以赴一同對抗病毒。”

閆閏也同樣不太擔(dān)心該問題，“其實(shí)這個(gè)病是有一定趨勢性的，當(dāng)疑似病例數(shù)量陸續(xù)下降，疫情出現(xiàn)拐點(diǎn)，就可以調(diào)整產(chǎn)能提前減產(chǎn)?！倍?，“現(xiàn)在PCR法試劑盒里的大部分原料也可以做其他試劑盒的原料，只是引物探針不一樣?！?/p>

疫情終有結(jié)束的一天，對于試劑盒研發(fā)生產(chǎn)廠商來說，他們還有太多的事情要做，因疫情而暫時(shí)被忽視的流感等病毒還等著企業(yè)們?nèi)スタ恕?/p>