趙雪平，溫雅嬌，李正英，*，鄭海武，黃海英，李曉娟

（1.內(nèi)蒙古農(nóng)業(yè)大學(xué)職業(yè)技術(shù)學(xué)院，內(nèi)蒙古包頭014109；2.內(nèi)蒙古農(nóng)業(yè)大學(xué)食品科學(xué)與工程學(xué)院，內(nèi)蒙古呼和浩特010018）

釀酒酵母的分布與地理位置和氣候條件有關(guān)，目前世界大部分產(chǎn)區(qū)的釀酒酵母被廣泛研究[1-4]，我國(guó)葡萄產(chǎn)區(qū)的釀酒酵母也被廣泛關(guān)注，主要集中在寧夏、新疆、云南、山東等地。趙悅等對(duì)云南葡萄產(chǎn)區(qū)的釀酒酵母多樣性進(jìn)行了研究[5]，馬文瑞等在新疆產(chǎn)區(qū)篩選了高產(chǎn)酸釀酒酵母[6]，趙曉寧等對(duì)河北產(chǎn)區(qū)的釀酒酵母菌進(jìn)行了分析和鑒定[7]，張春芝等對(duì)寧夏產(chǎn)區(qū)的釀酒酵母菌進(jìn)行了鑒定[8]，而內(nèi)蒙古地區(qū)的釀酒酵母的篩選和分離，尚有大量的工作去做，內(nèi)蒙古烏海市位于北緯 39°02′～39°54′，東經(jīng) 106°36′～107°08′地處黃河上游，東臨鄂爾多斯高原，庫(kù)布奇沙漠、毛烏素沙漠和烏蘭布和沙漠，三大沙漠環(huán)繞烏海，光照充足，晝夜溫差大，為葡萄生長(zhǎng)提供了很好的地理和環(huán)境條件，所產(chǎn)的葡萄的糖度大，故為酵母菌提供了良好的生長(zhǎng)繁殖場(chǎng)所，因此期許在此地區(qū)能夠篩選出優(yōu)良的釀酒酵母菌。酵母菌在葡萄酒發(fā)酵過(guò)程中扮演著重要的角色，它分解葡萄汁中的大部分糖并轉(zhuǎn)化為酒精和二氧化碳。但還會(huì)生成一些其他的代謝產(chǎn)物，包括甘油、高級(jí)醇、酯、醛等，而這些影響了葡萄酒的色澤、香氣及口感，這些因素直接決定著葡萄酒的質(zhì)量[9]。優(yōu)良釀酒酵母菌的篩選不僅要考察釀酒酵母菌的發(fā)酵能力、耐受性，更重要的是產(chǎn)品的品質(zhì)。因此酵母菌的篩選對(duì)于葡萄酒品質(zhì)的提升具有很重要的意義。

本研究以內(nèi)蒙古烏海地區(qū)農(nóng)家自釀發(fā)酵醪液為篩選來(lái)源，對(duì)照商業(yè)菌株，通過(guò)發(fā)酵能力、耐受性、產(chǎn)酒精能力、低產(chǎn)硫化氫、產(chǎn)酯能力，分3 級(jí)進(jìn)行篩選，并且進(jìn)行鑒定及產(chǎn)品感官評(píng)價(jià)。以期為我國(guó)葡萄酒的發(fā)展提供依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 材料與設(shè)備

1.1.1 菌種

測(cè)試菌種：采集于內(nèi)蒙古自治區(qū)烏海農(nóng)家自釀發(fā)酵醪液。

對(duì)照菌種：葡萄酒活性干酵母（編號(hào)CECA）：安琪酵母股份有限公司；釀酒酵母（編號(hào)CSM）：法國(guó)拉曼公司。

1.1.2 原料

釀酒葡萄采于內(nèi)蒙古農(nóng)業(yè)大學(xué)職業(yè)技術(shù)學(xué)院科技園區(qū)。

1.1.3 培養(yǎng)基

孟加拉紅瓊脂培養(yǎng)基：孟加拉紅0.033 g/L，氯霉素0.1 g/L，硫酸鎂0.5 g/L，磷酸二氫鉀1 g/L，蛋白胨5 g/L，葡萄糖10 g/L，瓊脂15 g/L；

酵母浸出粉胨葡萄糖（yeast extract peptone dextrose，YEPD）固體培養(yǎng)基：酵母浸出粉5 g/L，蛋白胨10 g/L，瓊脂 14 g/L，葡萄糖 20 g/L。

酵母膏胨葡萄糖（yeast peptone dextrose，YPD）液體培養(yǎng)基：酵母浸出粉10 g/L，蛋白胨20 g/L，葡萄糖20 g/L。

氯化三苯基四氮唑（2，3，5，-triphenyltetrazolium，TTC）上層培養(yǎng)基[10]：TTC 0.5 g/L，葡萄糖 5 g/L，瓊脂15 g/L。

TTC 下層培養(yǎng)基[10]：硫酸鎂0.4 g/L，磷酸二氫鉀1.0 g/L，酵母浸出粉1.5 g/L，蛋白胨2 g/L，葡萄糖10 g/L，瓊脂20 g/L，調(diào)節(jié)pH 值至5.5。

BIGGY 瓊脂培養(yǎng)基：BIGGY 瓊脂 45 g/L。

產(chǎn)酯固體培養(yǎng)基[11-12]：溴甲酚紫0.04 g/L，三丁酸甘油脂15 mL/L，酵母浸粉10 g/L，蛋白胨20 g/L，葡萄糖20 g/L，瓊脂 20 g/L。

發(fā)酵培養(yǎng)基：硫酸銨1 g/L，硫酸鎂1 g/L，磷酸二氫鉀1 g/L，酵母浸粉10 g/L，胰蛋白胨20 g/L，葡萄糖200 g/L。

1.1.4 主要試劑

酵母浸粉、胰蛋白胨：北京奧博星生物技術(shù)有限責(zé)任公司；葡萄糖：天津市風(fēng)船化學(xué)試劑科技有限公司；瓊酯粉：天津市科密歐化學(xué)試劑有限公司；磷酸二氫鉀：天津市標(biāo)準(zhǔn)科技有限公司；硫酸銨：天津市天大化學(xué)試劑廠；硫酸鎂：北京雙環(huán)化學(xué)試劑廠；氫氧化鈉：天津市盛奧化學(xué)試劑有限公司；乳酸：天津市化學(xué)試劑三廠；乳酸鉀：山東優(yōu)索化工科技有限公司；酒石酸鉀鈉：國(guó)藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司；酵母菌DNA 提取試劑盒：天根生化科技有限公司；以上試劑均為分析純。

1.1.5 儀器與設(shè)備

全功能酶標(biāo)儀（synergyHIMF+Take3）：美國(guó)BioTek儀器有限公司；電子天平（TP-214）、酸度計(jì)（PHS-3C）、移液器（1 00 μL～1 000 μL）：丹佛儀器北京有限公司；可調(diào)式封閉電爐（FL-2）：天津市泰斯特儀器有限公司；恒溫震蕩培養(yǎng)箱（THZ-98AB）、生化培養(yǎng)箱（LRH-70）、光學(xué)顯微鏡（CX21）、電熱恒溫水浴鍋（HWS12）：上海一恒科學(xué)儀器有限公司；立式壓力蒸汽滅菌鍋（SX-700）：北京世貿(mào)遠(yuǎn)東科學(xué)儀器有限公司；超凈工作臺(tái)（VD-1320）：哈爾濱東聯(lián)電子技術(shù)開(kāi)發(fā)有限公司；高速離心機(jī)（HC-2518R）：海玉博生物科技有限公司。

1.2 方法

1.2.1 釀酒酵母菌株的分離純化

以內(nèi)蒙古烏海地區(qū)農(nóng)家自釀發(fā)酵醪液為酵母菌的收集來(lái)源。將收集的樣品制成菌液，并且稀釋?zhuān)?0 μL 稀釋后的菌液于孟加拉紅固體平板上，用涂布棒涂勻，28 ℃培養(yǎng)1 d～3 d。挑選單個(gè)的具有典型酵母菌菌落特征且形態(tài)差異較為明顯的菌落，劃線純化兩到三代，將上述分離純化得到的酵母菌接入YEPD 斜面培養(yǎng)基，4 ℃保藏。

1.2.2 釀酒酵母菌株一級(jí)篩選

采用酵母菌株發(fā)酵力試驗(yàn)進(jìn)行一級(jí)篩選。將分離純化得到的酵母菌株活化，接入放有倒置杜氏管的YPD 液體培養(yǎng)基試管中，28 ℃培養(yǎng)，每隔12 h 觀察其產(chǎn)氣情況，記錄杜氏管內(nèi)氣體體積[10]。去除發(fā)酵速度慢，不產(chǎn)氣的菌株。將起酵速度快，產(chǎn)氣多的菌株篩選出來(lái)，并用于二級(jí)篩選。

1.2.3 釀酒酵母菌株二級(jí)篩選

采用耐受性測(cè)定進(jìn)行二級(jí)篩選，包括耐酒精性能試驗(yàn)、耐SO2性能試驗(yàn)、高糖耐受性試驗(yàn)和低pH 值的耐受性試驗(yàn)，將YPD 液體培養(yǎng)基分裝到試管中再放入倒置的杜氏管，杜氏管內(nèi)不含空氣。121 ℃滅菌20 min，冷卻至室溫（25 ℃），按照表1 調(diào)節(jié)培養(yǎng)基條件梯度，酒精度和SO2濃度先滅菌后調(diào)整，糖度和pH 值先調(diào)整后滅菌。接種待測(cè)酵母菌株接2%，每個(gè)處理平行3 次，28 ℃培養(yǎng)1 d～3 d，觀察其產(chǎn)氣狀況判斷其耐受性。以商業(yè)釀酒酵母CECA 和CSM 及空白試驗(yàn)作為對(duì)照。酵母菌株耐受性測(cè)定條件梯度設(shè)置見(jiàn)表1。

表1 酵母菌株耐受性測(cè)定條件梯度Table 1 Conditional gradient for tolerance measurement of yeast strains

1.2.4 釀酒酵母菌株三級(jí)篩選

將分離后的酵母菌株利用TTC 培養(yǎng)基顯色法測(cè)定菌株產(chǎn)酒精能力，BIGGY 瓊脂培養(yǎng)基顯色法測(cè)定菌株產(chǎn)硫化氫性以及產(chǎn)酯培養(yǎng)基顯色法測(cè)定菌株產(chǎn)酯特性。篩選出產(chǎn)酒精能力強(qiáng)、低產(chǎn)硫化氫且高產(chǎn)酯的優(yōu)良酵母菌株。

1.2.4.1 高產(chǎn)酒精酵母菌株的篩選

酵母菌株劃線接種到TTC 下層培養(yǎng)基上，以商業(yè)釀酒酵母CECA 和CSM 及空白試驗(yàn)作為對(duì)照，28 ℃培養(yǎng)1 d～3 d 后，在菌落上覆蓋一層TTC 上層培養(yǎng)基，28 ℃遮光培養(yǎng)。觀察各平皿中菌落的顯色情況，菌株與培養(yǎng)基反應(yīng)，使菌落呈現(xiàn)白色、淺紅色、紅色和深紅色，菌落呈現(xiàn)的顏色越深，表明菌株產(chǎn)酒精能力越強(qiáng)。

1.2.4.2 低產(chǎn)硫化氫酵母菌株的篩選

將1.2.4.1 中篩選出的高產(chǎn)酒精酵母菌株點(diǎn)種到BIGGY 瓊酯培養(yǎng)基上，并以商業(yè)釀酒酵母CECA 和CSM 及空白試驗(yàn)作為對(duì)照，28 ℃培養(yǎng)1 d～3 d，觀察各菌株菌落顏色，菌株產(chǎn)生的硫化氫與BIGGY 培養(yǎng)基中的鉍發(fā)生反應(yīng)，使菌落呈現(xiàn)白色、黃色、淺棕色和深棕色，顏色越深，代表菌株產(chǎn)硫化氫的量越多。

1.2.4.3 高產(chǎn)酯酵母菌株的篩選

將1.2.4.2 中篩選出的酵母菌株劃線接種到產(chǎn)酯培養(yǎng)基上，以商業(yè)釀酒酵母CECA 和CSM 及空白試驗(yàn)作為對(duì)照。觀察其菌落顏色。菌株產(chǎn)酯能力不同所呈現(xiàn)在產(chǎn)酯平板上的菌落顏色也不相同，菌落黃色越濃，表明菌株的產(chǎn)酯量越多[13]。

1.2.5 優(yōu)良菌株的分子生物學(xué)鑒定

酵母菌株KT3 送至生工生物工程（上海）股份有限公司，進(jìn)行26S rDNA D1/D2 區(qū)測(cè)序[14-16]，酵母菌株序列測(cè)定后，將測(cè)序結(jié)果在NCBI 數(shù)據(jù)庫(kù)中進(jìn)行比對(duì)，通過(guò)比對(duì)測(cè)序菌株與數(shù)據(jù)庫(kù)中模式菌株的可信值進(jìn)行鑒定，用Mega 軟件構(gòu)建系統(tǒng)進(jìn)化樹(shù)。

1.2.6 優(yōu)良酵母菌發(fā)酵特性的測(cè)定

將優(yōu)良酵母菌株按2%的接種量接入到發(fā)酵培養(yǎng)基中，每組試驗(yàn)3 個(gè)平行，并以商業(yè)釀酒酵母CECA 和CSM 及空白試驗(yàn)作為對(duì)照。在130 r/min，28 ℃恒溫振蕩培養(yǎng)，每隔12 h 稱(chēng)重并記錄。計(jì)算出菌株的CO2失重量，判斷菌株的發(fā)酵速率。

將優(yōu)良菌株接種到Y(jié)PD 液體培養(yǎng)基中，28 ℃培養(yǎng)。每隔2 h 測(cè)定菌液的OD600值，連測(cè)16 次，根據(jù)OD值繪制其生長(zhǎng)曲線，確定其生長(zhǎng)對(duì)數(shù)期。

1.2.7 酵母菌株發(fā)酵產(chǎn)品感官評(píng)價(jià)

將培養(yǎng)至對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期的優(yōu)良菌株接種到Y(jié)PD 液體培養(yǎng)基中，在10 ℃、12 000 r/min 條件下離心3 min，收集菌泥備用[17]。選用種植于內(nèi)蒙古農(nóng)業(yè)大學(xué)職業(yè)技術(shù)學(xué)院科技園區(qū)的葡萄進(jìn)行發(fā)酵試驗(yàn)[葡萄汁理化指標(biāo)為：23.0 Brix°，還原糖 154.07 g/L，總酸（6.86±0.2）g/L，pH 值3.14]。葡萄汁中按2%的接種量接入優(yōu)良酵母菌株，同時(shí)用法國(guó)商業(yè)酵母CSM 和國(guó)產(chǎn)商業(yè)酵母CECA 作對(duì)照。在25 ℃下恒溫發(fā)酵。每24h 測(cè)定還原糖、總酸和酒精度，當(dāng)殘?zhí)呛肯陆抵? g/L 以下時(shí)視為發(fā)酵結(jié)束[18-19]，按照 GB/T 15037-2006《葡萄酒》[18]的方法，組織7 位有經(jīng)驗(yàn)的品評(píng)員，進(jìn)行感官評(píng)定。

2 結(jié)果與分析

2.1 釀酒酵母菌的分離純化

將發(fā)酵醪液中酵母菌的分離純化，通過(guò)對(duì)酵母菌形態(tài)觀察以及顯微鏡鏡檢，初步去除重復(fù)菌株，共篩選 出 22 株 酵 母 菌 株 編 號(hào) 為 ：KC1 ～KC4、KS1 ～KS3、KP1～KP6、KJ1～KJ3、KT1～KT3、KZ1～KZ3。

2.2 釀酒酵母菌的篩選

2.2.1 釀酒酵母菌的一級(jí)篩選

將分離純化的22 株酵母菌進(jìn)行酵母菌發(fā)酵能力測(cè)定，測(cè)定結(jié)果見(jiàn)表2。

表2 酵母菌株發(fā)酵力測(cè)定結(jié)果Table 2 Determination of fermentation ability of yeast strains

由表2 可知，分離純化的22 株酵母菌株經(jīng)過(guò)杜氏管產(chǎn)氣試驗(yàn)，有10 株菌能在12 h 內(nèi)（包括12 h）發(fā)酵產(chǎn)生CO2，并充滿杜氏管，說(shuō)明這部分菌株的發(fā)酵能力最強(qiáng)，活力最旺盛；有9 株酵母菌能在24 h 內(nèi)（包括24 h）起酵并產(chǎn)氣充滿杜氏管，說(shuō)明這些菌株的生長(zhǎng)速度較快，能夠在短時(shí)間內(nèi)開(kāi)始發(fā)酵；有3 株酵母菌未在48 h 內(nèi)產(chǎn)氣，說(shuō)明其生長(zhǎng)繁殖慢，發(fā)酵力弱。葡萄酒的生產(chǎn)釀造中，葡萄原汁并不經(jīng)過(guò)消毒殺菌，若持續(xù)48 h都無(wú)法開(kāi)始發(fā)酵，就會(huì)導(dǎo)致葡萄汁變質(zhì)，影響口感和酒的品質(zhì)，所以將未在48 h 內(nèi)產(chǎn)氣的菌株淘汰，僅保留余下的19 株菌進(jìn)行二級(jí)篩選試驗(yàn)。

2.2.2 釀酒酵母菌耐受性測(cè)定

將一級(jí)篩選得到得19 株菌進(jìn)行耐受性測(cè)定，結(jié)果見(jiàn)表3。

國(guó)標(biāo)GB 2760-2011《食品添加劑使用標(biāo)準(zhǔn)》[20]要求葡萄酒生產(chǎn)中SO2最大添加量不超過(guò)250 mg/L，釀制干紅葡萄酒的葡萄含糖量一般大于20%壓榨后的冰葡萄汁含糖量能達(dá)到35%～45%[21]，新鮮葡萄汁的pH 值范圍在3～4.5 之間，本研究中的19 株酵母菌均符合釀酒酵母耐受性的要求。

表3 酵母菌株耐受性能測(cè)定試驗(yàn)結(jié)果Table 3 Screening results of ester-producing characteristics

2.2.3 高產(chǎn)酒精酵母菌的篩選

將分離純化的19 株酵母菌進(jìn)行產(chǎn)酒精能力試驗(yàn)，結(jié)果見(jiàn)表4。

表4 酵母菌在TTC 培養(yǎng)基上的顯色結(jié)果Table 4 Chromogenic results of yeast on TTC medium

由表4 可知，有 8 株酵母菌（KT2、KT3、KS3、KP4、KP6、KJ2、KZ1、KZ3） 的菌落在 TTC 培養(yǎng)基上呈深紅色，其產(chǎn)酒精能力與對(duì)照組相當(dāng)，因此選擇這8 株產(chǎn)酒精能力強(qiáng)的酵母菌進(jìn)行下一步的篩選試驗(yàn)。

2.2.4 低產(chǎn)硫化氫酵母菌株的篩選試驗(yàn)

將高產(chǎn)酒精的8 株酵母菌進(jìn)行低產(chǎn)硫化氫酵母菌株的篩選試驗(yàn)，結(jié)果見(jiàn)表5。

表5 酵母菌在BIGGY 培養(yǎng)基上菌落顏色Table 5 Colony colour of yeast on BIGGY medium

BIGGY 瓊脂是一種具有選擇性的培養(yǎng)基，使用鉍作為指示劑，來(lái)測(cè)定菌株生長(zhǎng)時(shí)是否有產(chǎn)生硫化氫，顏色越深，表面菌株產(chǎn)硫化氫越多[22]。由表5 可知，對(duì)照菌株CECA 菌落在BIGGY 培養(yǎng)基上呈淺棕褐色，為低產(chǎn)硫化氫酵母，CSM 呈棕褐色，為中產(chǎn)硫化氫酵母。硫化氫產(chǎn)生的不良?xì)馕稌?huì)影響葡萄酒的風(fēng)味[23]，且對(duì)人體有毒害作用，基于此，僅保留低產(chǎn)和中產(chǎn)硫化氫的菌株KP3、KJ2 和KT3 作后續(xù)研究。

2.2.5 高產(chǎn)酯酵母菌株的篩選試驗(yàn)結(jié)果

將3 株低中產(chǎn)硫化氫高產(chǎn)酒精酵母分別接種到產(chǎn)酯培養(yǎng)基上，并以商業(yè)菌株CECA 和CSM 作對(duì)照，28 ℃恒溫培養(yǎng)1 d～3 d。觀察菌落附近的顏色并記錄，顯色結(jié)果見(jiàn)表6。

由表6 可知，對(duì)照菌株CECA、CSM 及KT3 的菌落在產(chǎn)酯培養(yǎng)基上呈深黃色，即產(chǎn)酯能力較強(qiáng)，選擇KT3 酵母菌株進(jìn)行后續(xù)研究。

2.3 優(yōu)良酵母菌的鑒定

酵母菌株KT3 的聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)（polymerasechainreaction，PCR）擴(kuò)增電泳圖如圖1。

表6 產(chǎn)酯特性篩選結(jié)果Table 6 Screening results of ester-producing characteristics

圖1 酵母菌株P(guān)CR 擴(kuò)增電泳圖Fig.1 PCR amplified electrophoresis map of yeast strains

如圖1 所示，通過(guò)對(duì)酵母菌株DNA 的提取和PCR擴(kuò)增，可以看出酵母菌株的DNA 片段長(zhǎng)度在580 bp～600 bp 左右，符合前人對(duì)酵母菌基因序列長(zhǎng)度的研究范圍[24]。

DNA 測(cè)序結(jié)果在NCBI 網(wǎng)站上進(jìn)行序列同源性比對(duì)，結(jié)果見(jiàn)表7。

通過(guò)比較得到酵母菌株KT3 的DNA 片段與釀酒酵母同源性最高，達(dá)到99%，與測(cè)序結(jié)果進(jìn)行對(duì)比，并用MEGA6.0 構(gòu)建系統(tǒng)進(jìn)化樹(shù)，見(jiàn)圖2。最終確定酵母菌株KT3 為釀酒酵母。

表7 酵母菌株26S rDNA D1/D2 序列測(cè)序結(jié)果Table 7 Sequencing results of 26S rDNA D1/D2 sequence of yeast strain

2.4 優(yōu)良酵母菌發(fā)酵特性測(cè)定

釀酒酵母菌株KT3 生長(zhǎng)曲線如圖3 所示。

圖3 可以看出，在2 h～4 h 內(nèi)，菌株處于調(diào)整期，菌株繁殖較慢；4 h～12 h，菌株進(jìn)入對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期；培養(yǎng)到12 h～30 h 時(shí)，菌株進(jìn)入穩(wěn)定期；在 30 h～36 h 時(shí)，菌株活力下降逐漸進(jìn)入衰亡期。綜上可知該釀酒酵母菌具有良好的生長(zhǎng)特性。

酵母菌株KT3 的發(fā)酵速率測(cè)定結(jié)果見(jiàn)圖4。

由圖4 可知，菌株KT3 的發(fā)酵液CO2失重略小于對(duì)照菌株CECA 發(fā)酵液的CO2失重，大于對(duì)照菌株CSM 發(fā)酵液CO2失重，具有良好的發(fā)酵速率。

2.5 酵母菌株發(fā)酵產(chǎn)品感官評(píng)價(jià)

優(yōu)選的釀酒酵母和2 株商業(yè)釀酒酵母發(fā)酵的葡萄酒的色澤、香氣、澄清度、滋味、典型性等方面進(jìn)行評(píng)分[25-26]，結(jié)果見(jiàn)表8 和圖5。

圖2 酵母菌株26S rDNA 構(gòu)建的系統(tǒng)進(jìn)化樹(shù)Fig.2 Phylogenetic tree constructed by yeast strain 26S rDNA

圖3 KT3 生長(zhǎng)曲線圖Fig.3 OD600 value of growth curve of KT3

圖4 CO2 失重Fig.4 CO2 weight loss

表8 不同酵母菌發(fā)酵的干紅葡萄酒感官評(píng)分表Table 8 Sensory scoring scale for dry red wine fermented by different yeasts

圖5 不同酵母菌發(fā)酵的干紅葡萄酒感官評(píng)定Fig.5 Sensory scoring scale for dry red wine fermented by different yeasts

在2 株商業(yè)酵母菌和1 株優(yōu)選酵母菌發(fā)酵葡萄酒的感官評(píng)分中，評(píng)分從高到低依次為CECA、KT3、CSM。篩選出的優(yōu)良菌株中KT3 釀制的葡萄酒酒體澄清透亮有光澤，呈寶石紅色，入口偏酸，口味獨(dú)特，層次豐富，有典型性。

3 結(jié)論

本文以內(nèi)蒙古烏海地區(qū)自然發(fā)酵醪液為篩選來(lái)源，通過(guò)篩選得到1 株酵母菌KT3，經(jīng)26S rDNA D1/D2 區(qū)域測(cè)序，確定KT3 為釀酒酵母菌，該酵母菌的耐酒精度為16%，耐SO2濃度為450 mg/L，耐高糖濃度為50%，耐pH 值為2.5，具有良好的耐受性，產(chǎn)品典型性突出，可以用于商業(yè)化生產(chǎn)。