梁秋玲 羅接能 袁克艷 謝黎黎③

(1廣東農(nóng)墾熱帶作物科學(xué)研究所 廣東化州525100;2象州縣羅秀鎮(zhèn)農(nóng)業(yè)技術(shù)推廣站 廣西來(lái)賓545800)

自然光照組培過(guò)程中，培養(yǎng)架下層及遠(yuǎn)離窗口位置光照偏弱，部分喜光植物極易出現(xiàn)徒長(zhǎng)，致使苗木纖細(xì)、節(jié)間拉長(zhǎng)，進(jìn)而影響苗木增殖及生根移栽效果。生長(zhǎng)延緩劑可抑制內(nèi)源赤霉素合成，減弱頂端優(yōu)勢(shì)，促進(jìn)同化積累，使苗木節(jié)間縮短、株型緊湊［1-2］，在一定程度上補(bǔ)償光照不足對(duì)苗木生長(zhǎng)的影響。

趙建萍等［3］、蔣元斌［4］、張利平［5］等報(bào)道，在組培過(guò)程中使用生長(zhǎng)延緩劑，可矮化植株，延長(zhǎng)繼代周期；劉彤等［6］、侯仁浩等［7］、華智銳等［8］報(bào)道，生長(zhǎng)延緩劑可誘導(dǎo)組培苗植株矮壯、根系發(fā)達(dá)、提高移栽成活率。以上報(bào)道，均涉及生長(zhǎng)延緩劑對(duì)植物組織培養(yǎng)的影響，但未提及生長(zhǎng)延緩劑對(duì)組培苗形態(tài)的調(diào)控及對(duì)出苗的影響。其中生長(zhǎng)延緩劑適宜濃度下對(duì)增殖苗是否產(chǎn)生藥害、藥劑持效性、持續(xù)使用的富集藥害、藥害恢復(fù)情況，及其對(duì)生根苗形態(tài)和生長(zhǎng)的影響、移栽后苗木表現(xiàn)等，這些均可對(duì)組培苗品質(zhì)造成影響，從而影響組培苗穩(wěn)定生產(chǎn)，有必要進(jìn)行進(jìn)一步研究。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 參試藥劑

蔗糖為食用白砂糖，卡拉膠為食品級(jí)，用于配制培養(yǎng)基的其它藥品均由廣州化學(xué)試劑廠生產(chǎn)。

參試生長(zhǎng)延緩劑（15%多效唑WP、50%矮壯素AS、25%甲哌鎓AS），均由四川國(guó)光農(nóng)化股份有限公司生產(chǎn)。參試濃度確定：按說(shuō)明書(shū)使用濃度中值稀釋10倍，然后進(jìn)行初篩，初篩標(biāo)準(zhǔn)為使增殖苗叢生芽高度控制在（3.0±0.3）cm，即得到P2、C2、M2濃度，再根據(jù)初篩結(jié)果進(jìn)行調(diào)整，具體試驗(yàn)濃度如表1所示。

表1 生長(zhǎng)延緩劑參試濃度及編號(hào)

1.1.2 試驗(yàn)用苗

試驗(yàn)用琴葉榕（FicuspandurataHance var.pandurata）組培苗為湛江市森科種苗有限公司生產(chǎn)用繼代材料，無(wú)細(xì)菌污染。

1.2 方法

1.2.1 琴葉榕組培基本方法

（1）培養(yǎng)基配制。增殖基本培養(yǎng)基配方：MS＋6-BA 0.5 mg/L＋NAA 0.05 mg/L；生根基本培養(yǎng)基配方：MS＋NAA 1.0 mg/L＋I(xiàn)BA 0.5 mg/L；所有培養(yǎng)基均加入卡拉膠6.5 g/L、白糖30 g/L，滅菌前pH調(diào)節(jié)為5.8。

（2）培養(yǎng)環(huán)境。培養(yǎng)室采用自然光照，培養(yǎng)溫度（28±2）℃；煉苗間為單層遮陽(yáng)網(wǎng)大棚，遮光率40%，配備風(fēng)機(jī)、水簾。

（3）接種方式。采用叢生芽進(jìn)行增殖，先對(duì)叢生芽進(jìn)行打頂，留殘樁高度0.5 cm，每瓶接種5個(gè)叢生芽，繼代時(shí)間25 d；切取單芽端部1.2～1.5 cm用于生根，每瓶接種15株，生根苗在培養(yǎng)室培養(yǎng)10 d后移至煉苗棚，煉苗20 d即可洗苗移栽。

（4）移栽方式。采用128孔穴盤(pán)移栽，基質(zhì)使用泥炭土與珍珠巖的混合物（V∶V＝5∶1）。

1.2.2 生長(zhǎng)延緩劑對(duì)琴葉榕增殖苗的影響

1.2.2.1 對(duì)琴葉榕增殖苗生長(zhǎng)效應(yīng)的影響

在琴葉榕基本增殖培養(yǎng)基內(nèi)，加入生長(zhǎng)延緩劑，配制為含不同濃度（表1）生長(zhǎng)延緩劑的培養(yǎng)基，每個(gè)處理重復(fù)3次，每個(gè)重復(fù)接種30瓶，以基本培養(yǎng)基作為對(duì)照。剔除污染瓶后隨機(jī)選取10瓶進(jìn)行觀察，接種后25 d，觀察其增殖苗植株形態(tài)是否出現(xiàn)可見(jiàn)變化，如玻璃化程度、小芽完整程度、葉片是否正常展開(kāi)，測(cè)量增殖苗平均高度、單芽數(shù)量等指標(biāo)。

1.2.2.2 對(duì)琴葉榕增殖苗生長(zhǎng)的持續(xù)性影響

將1.2.2.1中處理編號(hào)為P2、C2、M2的增殖苗，接種到生根基本培養(yǎng)基，每個(gè)處理重復(fù)3次，每個(gè)重復(fù)接種30瓶；將1.2.2.1處理中對(duì)照增殖苗接入基本生根培養(yǎng)基作為對(duì)照，剔除污染后隨機(jī)選取10瓶進(jìn)行觀察，接種30 d，觀察其頂芽生長(zhǎng)是否正常，根系完整情況及根系質(zhì)地，測(cè)量生根苗高度、主根條數(shù)、主根長(zhǎng)度及主根近植株一端0.5 cm處直徑。

1.2.2.3 對(duì)琴葉榕增殖苗生長(zhǎng)的影響

將1.2.2.1中處理編號(hào)為P1、C1、M1的增殖苗接種至與原處理配方相同增殖培養(yǎng)基，每個(gè)處理重復(fù)3次，每個(gè)重復(fù)接種10瓶；將1.2.2.1處理中的對(duì)照增殖苗接入基本增殖培養(yǎng)基作為對(duì)照；25 d后仍使用與原處理配方相同的增殖培養(yǎng)基轉(zhuǎn)接，將每個(gè)重復(fù)增殖30瓶，轉(zhuǎn)接25 d后進(jìn)行觀測(cè)記錄，觀察測(cè)量指標(biāo)同1.2.2.1。

1.2.3 生長(zhǎng)延緩劑處理對(duì)琴葉榕生根苗生長(zhǎng)的影響

1.2.3.1 對(duì)琴葉榕生根瓶苗生長(zhǎng)的影響

在琴葉榕基本生根培養(yǎng)基內(nèi)，加入生長(zhǎng)延緩劑，配制含不同濃度（表1）生長(zhǎng)延緩劑的培養(yǎng)基。以未使用任何生長(zhǎng)延緩劑的增殖苗作為接種材料，每個(gè)處理重復(fù)3次，每個(gè)重復(fù)接種30瓶，以基本培養(yǎng)基作為對(duì)照，剔除污染后隨機(jī)選取10瓶進(jìn)行觀察，接種后30 d，觀測(cè)并記錄頂芽生長(zhǎng)是否正常、根系完整情況及根系質(zhì)地，測(cè)量生根苗高度并分析。

1.2.3.2 對(duì)琴葉榕生根瓶苗移栽效果的影響

將1.2.3.1中處理編號(hào)為P2、P3、C3、M3的苗木進(jìn)行穴盤(pán)移栽，以1.2.3.1對(duì)照苗移栽作為本環(huán)節(jié)對(duì)照。每個(gè)重復(fù)移栽128株，移栽后不使用生長(zhǎng)延緩劑噴霧或澆灌，移栽30 d后，觀察各處理移栽成活率，測(cè)量苗木高度、離基質(zhì)表面1 cm處莖干直徑、苗木生長(zhǎng)點(diǎn)往下1 cm處莖干直徑，記錄葉片總數(shù)及寬度≥1.0 cm葉片數(shù)量。

2 結(jié)果與分析

2.1 生長(zhǎng)延緩劑處理對(duì)琴葉榕增殖苗的影響

2.1.1 對(duì)琴葉榕增殖苗生長(zhǎng)效應(yīng)的影響

在琴葉榕基本增殖培養(yǎng)基內(nèi)，加入生長(zhǎng)延緩劑，均可對(duì)增殖苗高生長(zhǎng)產(chǎn)生影響，見(jiàn)圖1。

由圖1可知，3種植物生長(zhǎng)延緩劑均能抑制增殖苗高生長(zhǎng)，且隨著使用濃度增加，抑制效果增加。多效唑?qū)η偃~榕增殖苗高生長(zhǎng)抑制作用明顯，濃度為0.25 mg/L時(shí)，增殖苗平均高度為3.95cm，濃度為1.0 mg/L時(shí)，增殖苗平均高度為1.38cm；甲哌鎓濃度對(duì)琴葉榕增殖苗高生長(zhǎng)抑制作用不明顯，均可控制在（3.0±0.3）cm。

多效唑不同濃度處理，琴葉榕增殖苗單芽數(shù)量分別為14.7、14.1和14.8個(gè)/叢；矮壯素處理為15.1、14.6和14.5個(gè)/叢；甲哌鎓處理為14.4、14.8和13.9個(gè)/叢；對(duì)照為14.4個(gè)/叢，不存在統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。

圖1 生長(zhǎng)延緩劑對(duì)琴葉榕增殖苗高生長(zhǎng)的影響

多效唑P3處理，增殖苗出現(xiàn)小芽皺縮、褪綠現(xiàn)象，部分單芽頂端小葉透明，呈玻璃化等藥害癥狀。矮壯素C3及甲哌鎓M3處理，增殖苗形態(tài)正常，葉片可正常展開(kāi)，葉色濃綠，未出現(xiàn)頂芽玻璃化或愈傷化。

2.1.2 對(duì)琴葉榕增殖苗生長(zhǎng)的持續(xù)性影響

將經(jīng)生長(zhǎng)延緩劑處理的矮化增殖苗接種到生根基本培養(yǎng)基后可知，多效唑P2處理持效性明顯，主要表現(xiàn)在頂芽皺縮細(xì)弱、生根苗矮化，同時(shí)觀察到多效唑P2處理的根系直徑與苗木莖粗接近，無(wú)須根，根系質(zhì)地脆而易折斷。矮壯素C2及甲哌鎓M2處理均對(duì)生根苗高生長(zhǎng)存在抑制作用，但對(duì)其它生長(zhǎng)指標(biāo)未產(chǎn)生明顯影響，結(jié)果見(jiàn)表2。

表2 生長(zhǎng)延緩劑處理對(duì)琴葉榕增殖苗生長(zhǎng)的持續(xù)性影響

由表2可知，多效唑P2處理的苗木高度矮，根系長(zhǎng)度短，根系直徑大，3項(xiàng)指標(biāo)均與矮壯素C2、甲哌鎓M2及對(duì)照存在顯著差異。矮壯素C2、甲哌鎓M2處理的苗木高度均比對(duì)照矮，且均存在顯著差異，主根條數(shù)、主根長(zhǎng)度及直徑、根系質(zhì)地等均與對(duì)照無(wú)顯著差異。

2.1.3 對(duì)琴葉榕增殖苗生長(zhǎng)的影響

使用低濃度生長(zhǎng)延緩劑持續(xù)處理琴葉榕增殖苗，均可對(duì)增殖苗生長(zhǎng)產(chǎn)生影響，見(jiàn)圖2。

由圖2可知，隨著持續(xù)處理代數(shù)增加，3種植物生長(zhǎng)延緩劑對(duì)琴葉榕增殖苗高生長(zhǎng)的抑制效果增加，即均存在一定的富集效應(yīng)。多效唑持續(xù)刺激對(duì)琴葉榕增殖苗高生長(zhǎng)影響明顯，在轉(zhuǎn)接至第2代時(shí)，增殖苗高度為2.22cm，轉(zhuǎn)接至第3代時(shí)，增殖苗高度僅為0.78cm，無(wú)法用于正常生產(chǎn)；矮壯素持續(xù)處理至第3代時(shí)，增殖苗高度為1.83cm，已不利于生根接種操作；甲哌鎓持續(xù)刺激3代，雖然琴葉榕增殖苗高生長(zhǎng)逐代減少，但是均可控制在（3.0±0.3）cm。

圖2 生長(zhǎng)延緩劑持續(xù)處理對(duì)琴葉榕增殖苗高生長(zhǎng)的影響

多效唑持續(xù)處理至第2代，增殖苗出現(xiàn)小芽皺縮、褪綠現(xiàn)象，部分單芽頂端小葉透明，呈玻璃化等藥害癥狀；處理至第3代，藥害癥狀加劇，出現(xiàn)了增殖苗壞死現(xiàn)象。矮壯素持續(xù)處理至第3代，增殖苗葉片小而墨綠，不能正常長(zhǎng)大，頂芽細(xì)弱透明等。甲哌鎓持續(xù)處理，增殖苗形態(tài)正常，葉片可正常展開(kāi)，葉色濃綠，未出現(xiàn)頂芽玻璃化及愈傷化。生長(zhǎng)延緩劑持續(xù)處理3代，均未對(duì)琴葉榕叢生芽單芽數(shù)量產(chǎn)生影響。

2.2 生長(zhǎng)延緩劑處理對(duì)琴葉榕生根苗生長(zhǎng)的影響

2.2.1 對(duì)琴葉榕生根瓶苗生長(zhǎng)的影響

不同生長(zhǎng)延緩劑對(duì)琴葉榕生根瓶苗高生長(zhǎng)均存在影響，見(jiàn)圖3。

由圖3可知，3種植物生長(zhǎng)延緩劑均能抑制生根瓶苗高生長(zhǎng)，且隨著使用濃度增加，生長(zhǎng)抑制效果增加。多效唑?qū)η偃~榕生根瓶苗高生長(zhǎng)影響明顯，在濃度為1.0 mg/L時(shí)，生根苗平均高度為1.98cm，相對(duì)于1.2～1.5cm的接入高度，高生長(zhǎng)僅為0.5～0.8cm；矮壯素對(duì)琴葉榕生根瓶苗高生長(zhǎng)的影響次于多效唑，甲哌鎓對(duì)琴葉榕生根瓶苗高生長(zhǎng)影響最小。

多效唑P1、P2、P3處理，生根苗頂芽皺縮細(xì)弱，隨著多效唑濃度增加，頂芽受害癥狀越明顯；多效唑處理的主根呈黃褐色且粗壯，主根直徑與苗木莖粗接近，無(wú)須根，根系質(zhì)地脆而易折斷。矮壯素及甲哌鎓處理，未對(duì)生根瓶苗頂芽造成明顯傷害，生根瓶苗隨著藥劑濃度增加，節(jié)間變短，葉片正常展開(kāi)、厚綠。

圖3 生長(zhǎng)延緩劑處理對(duì)琴葉榕生根瓶苗高生長(zhǎng)的影響

2.2.2 對(duì)琴葉榕生根瓶苗移栽效果的影響

生長(zhǎng)延緩劑處理的生根瓶苗移栽30 d后的觀察結(jié)果見(jiàn)表3。

表3 生長(zhǎng)延緩劑處理對(duì)琴葉榕生根瓶苗移栽效果的影響

所有生長(zhǎng)延緩劑處理，其移栽成活率均在95%以上，可滿足生產(chǎn)需要；不使用生長(zhǎng)延緩劑處理，其移栽成活率為62.3%。

移栽30 d后，所有處理的葉片總數(shù)相近，平均在9.3～9.6片。多效唑處理P3的苗木高度最矮，為2.36cm，未觀察到葉寬＞1.0c m的葉片，整個(gè)植株呈矮縮狀；其次為多效唑P2處理，苗木高度為4.43 cm，苗木節(jié)間長(zhǎng)度均勻，但頂芽所生葉片不能正常長(zhǎng)大，呈現(xiàn)下大上小的形態(tài)；矮壯素C3、甲哌嗡M3處理，苗木節(jié)間長(zhǎng)度均勻，新葉大小正常且舒展，苗木呈現(xiàn)健壯敦實(shí)的形態(tài)；對(duì)照苗高度8.99 cm，大葉數(shù)與矮壯素及甲哌鎓處理相近，呈現(xiàn)徒長(zhǎng)癥狀。

生長(zhǎng)延緩劑處理對(duì)移栽苗莖粗存在影響。所有處理，移栽苗基部直徑均大于對(duì)照，其中多效唑P2、P3處理莖基較粗，均存在優(yōu)勢(shì)。多效唑P2、P3處理，苗木頂端直徑遠(yuǎn)小于基部直徑，呈現(xiàn)下大上小的形態(tài)，其余處理及對(duì)照，未發(fā)現(xiàn)相同形態(tài)。

3 討論

使用多效唑、矮壯素、甲哌鎓3種生長(zhǎng)延緩劑處理琴葉榕增殖苗及生根苗，均可對(duì)苗木生長(zhǎng)產(chǎn)生影響。3種生長(zhǎng)延緩劑均可抑制苗木高生長(zhǎng)，對(duì)增殖苗單芽數(shù)量、生根苗葉片總數(shù)、生根苗根系條數(shù)等無(wú)影響。

多效唑在抑制苗高生長(zhǎng)的同時(shí)，對(duì)無(wú)菌苗頂芽造成了可見(jiàn)傷害，且難以恢復(fù)，對(duì)生根苗側(cè)根產(chǎn)生明顯抑制，使得主根變色易折斷，移栽后苗木頂芽不能恢復(fù)正常生長(zhǎng)。據(jù)Sankhl等［9］報(bào)道，0.3～0.5 mg/L多效唑使合歡組培苗增殖率提高107%。席夢(mèng)利等［10］對(duì)非洲菊的研究也得出類似結(jié)論，與本研究結(jié)論不一致，可能的原因是本研究中細(xì)胞分裂素對(duì)增殖苗增殖率的貢獻(xiàn)度高于多效唑。周恒等［11］報(bào)道，當(dāng)烯效唑濃度過(guò)高時(shí)（0.05～0.10 mg/L），幼苗生長(zhǎng)被過(guò)度抑制，莖更粗短，葉片顯著縮小，生長(zhǎng)不正常，根畸形且彈性和韌性降低，與本研究結(jié)果一致。

矮壯素的安全性高于多效唑。許燦等［12］報(bào)道，高濃度矮壯素可抑制楊樹(shù)組培苗根系形成，且根尖生長(zhǎng)點(diǎn)出現(xiàn)變紅壞死現(xiàn)象，吸收能力降低，苗木長(zhǎng)勢(shì)差且易折斷等，這與本研究效果類似。陳敏敏等［13］在馬鈴薯增殖培養(yǎng)基內(nèi)加入矮壯素，試管苗節(jié)間距縮短，植株矮化，莖干、根系粗壯，葉片增大，葉色深綠，植株生長(zhǎng)健壯，但并未開(kāi)展持續(xù)的培養(yǎng)試驗(yàn)。本文所觀察到的低濃度富集藥害未見(jiàn)報(bào)道。

使用甲哌鎓處理可實(shí)現(xiàn)形態(tài)調(diào)控，未對(duì)苗木造成藥害，且未出現(xiàn)明顯富集藥害。華婧［14］報(bào)道，縮節(jié)胺（商品名為甲哌鎓）可使馬鈴薯試管苗矮化，且矮化作用隨培養(yǎng)時(shí)間延長(zhǎng)而減弱，與本研究結(jié)論類似。趙娟等［15］、華婧等［16］報(bào)道，較低濃度的縮節(jié)胺（2.5～5.0 mg/L）對(duì)馬鈴薯不定芽的分化和增殖有促進(jìn)作用，與本研究結(jié)論不一致，可能原因是物種差異，同時(shí)激素組合中細(xì)胞分裂素對(duì)叢生芽增殖率的貢獻(xiàn)度高于生長(zhǎng)延緩劑。

使用生長(zhǎng)延緩劑調(diào)控組培苗生長(zhǎng)狀態(tài)，具有成本低廉、操作簡(jiǎn)便、調(diào)控高效等優(yōu)點(diǎn)。生長(zhǎng)延緩劑種類、作用時(shí)間及濃度，是應(yīng)用過(guò)程中需要考量的主要因素。本研究結(jié)果表明，甲哌鎓的使用效果較為理想，在其他作物中是否具有相同作用，還有待驗(yàn)證。