杜 娜

（石家莊職業(yè)技術(shù)學(xué)院，河北石家莊 050081）

內(nèi)毒素脂多糖（LPS）是革蘭氏陰性細(xì)菌外殼的主要成分之一，可誘導(dǎo)炎癥反應(yīng)和氧化應(yīng)激，常被用于建立動(dòng)物免疫反應(yīng)模型。在動(dòng)物體內(nèi)注射脂多糖可以有效模擬細(xì)菌感染引起的炎癥免疫反應(yīng)，但不會(huì)增加活菌感染并發(fā)癥。即使在正常情況下，動(dòng)物在環(huán)境中也不可避免地受到細(xì)菌或其產(chǎn)物的應(yīng)激，進(jìn)而影響動(dòng)物健康狀況，抑制動(dòng)物生長(zhǎng)性能。由于遺傳選擇，肉雞生長(zhǎng)迅速，但與其他家畜相比，它們也更容易接觸到細(xì)菌感染。許多抗生素和抗菌劑被用于預(yù)防和治療與脂多糖誘導(dǎo)相關(guān)的疾病。但值得注意的是，在動(dòng)物飼料中濫用抗生素和抗菌劑可能產(chǎn)生大量耐抗生素的病原體。因此，抗生素在家禽養(yǎng)殖中的應(yīng)用有限，許多動(dòng)物營(yíng)養(yǎng)學(xué)家已開始研究傳統(tǒng)藥用植物的替抗產(chǎn)品（Kumar 等，2017）。黃連素是從黃連等多種植物中提取的一種有效的芐基異喹啉生物堿，是這些植物的主要活性成分。黃連素具有抗炎、降脂、抗氧化、降血糖、抗胃腸炎、抗肝病等生物活性和藥理作用（胡誠(chéng)毅和莫志賢，2017）。近年來(lái)，黃連素以其抗炎、抗氧化的特性在炎癥性疾病的防治領(lǐng)域受到廣泛關(guān)注。雖然許多研究表明，黃連素在調(diào)節(jié)人體免疫和抗氧化系統(tǒng)中發(fā)揮重要作用（Yang 等，2017），但很少將黃連素應(yīng)用于動(dòng)物，特別是雞抗炎和抗氧化方面。因此，本研究旨在評(píng)估黃連素對(duì)脂多糖應(yīng)激的肉雞生長(zhǎng)性能、免疫和抗氧化活性的影響。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)日糧與動(dòng)物分組 試驗(yàn)選擇1 日齡的雄性肉仔雞240 只，隨機(jī)分為4 組，每組6 個(gè)重復(fù)，每個(gè)重復(fù)10 只雞。試驗(yàn)采用2×2 因子設(shè)計(jì)，即兩個(gè)黃連素添加組（0 和50 mg/kg），脂多糖應(yīng)激組（生理鹽水和注射1.5 mg/kg 脂多糖）。脂多糖誘導(dǎo)分別在第14、16、18 和20 天腹腔注射脂多糖或生理鹽水。肉雞生長(zhǎng)期1 ～14 d 和15 ～21 d日糧配方組成及營(yíng)養(yǎng)水平見表1。

1.2 樣品收集 在試驗(yàn)第1、14 和21 天早上對(duì)肉雞稱重（禁食12 h），用體重和記錄的采食量計(jì)算平均日采食量、平均日增重和料重比。在21 d時(shí)，在每個(gè)處理每個(gè)重復(fù)中隨機(jī)選擇2 只雞，通過穿刺翼靜脈收集血液于含有乙二胺四乙酸和非肝素化鈉的試管中。經(jīng)EDTA 處理的血樣在4℃保存30 min，然后轉(zhuǎn)移到室溫進(jìn)行分析。其余血樣置于室溫下30 min，4℃下2000×g 離心15 min，分離血清，-20℃冷凍保存，進(jìn)一步分析免疫、抗氧化活性。采集血樣后，將肉雞屠宰，采集肝臟樣本，快速冷凍于液氮液中，在-80℃保存，待進(jìn)一步分析。

表1 肉雞生長(zhǎng)前期和后期日糧配方組成

1.3 指標(biāo)測(cè)定 肝臟和血清丙二醛（MDA）含量、谷胱甘肽過氧化物酶（GSH-Px）和超氧化物歧化酶（SOD）活性采用試劑盒法測(cè)定。采用細(xì)胞計(jì)數(shù)法對(duì)白細(xì)胞、紅細(xì)胞、淋巴細(xì)胞和粒細(xì)胞進(jìn)行顯微鏡檢計(jì)數(shù)。血清免疫球蛋白A、G、M（Ig A、IgM 和IgG）及白細(xì)胞介素-6（IL-6）、白細(xì)胞介素1-β（IL-1β）和干擾素-α（TNF-α）水平采用放射免疫法測(cè)定。

1.4 數(shù)據(jù)分析與統(tǒng)計(jì) 試驗(yàn)結(jié)果以平均值和標(biāo)準(zhǔn)誤差表示，通過SAS 軟件進(jìn)行多因素方差分析，數(shù)據(jù)分析采用2×2 的因子排列，主要影響因素為黃連素處理和脂多糖處理。采用Tukey’s 多重檢驗(yàn)分析各處理間的差異。P ＜0.05 表示差異顯著。

2 結(jié)果與分析

2.1 生長(zhǎng)性能 由表2 可知，脂多糖攻毒前（1 ～14 d），處理組間肉雞生長(zhǎng)性能（日增重、采食量和料重比）無(wú)顯著差異（P ＞0.05）。與對(duì)照處理相比，脂多糖處理（15 ～21 d）降低了肉雞日增重和采食量，但提高了料重比（P ＜0.05）。日糧中添加黃連素對(duì)肉雞生長(zhǎng)性能無(wú)顯著影響（P ＞0.05），但黃連素與脂多糖處理對(duì)生長(zhǎng)性能參數(shù)的影響具有顯著互作效應(yīng)（P ＜0.05）。

2.2 血清和肝臟抗氧化 由表3 可知，注射脂多糖肉雞的血清超氧化物歧化酶（SOD）活性顯著升高（P ＜0.05），而日糧中添加黃連素可顯著降低血清和肝臟中丙二醛（MDA）含量（P ＜0.05）。同時(shí)，黃連素與脂多糖對(duì)血清和肝臟MDA 含量的影響存在顯著交互作用（P ＜0.05）。脂多糖刺激組SOD 活性（血清和肝臟）顯著高于未刺激組（P ＜0.05），而MDA 含量（血清和肝臟）顯著低于未刺激組（P ＜0.05）。當(dāng)肉雞受到脂多糖刺激時(shí)，與對(duì)照組相比，黃連素組MDA 含量顯著降低、SOD 活性顯著提高（P ＜0.05）。

2.3 血液學(xué)和血清免疫指標(biāo) 由表4 可知，脂多糖誘導(dǎo)的肉雞白細(xì)胞（WBC）和淋巴細(xì)胞數(shù)量顯著增加（P ＜0.05），但日糧中添加黃連素組WBC和淋巴細(xì)胞數(shù)量顯著降低（P ＜0.05）。脂多糖誘導(dǎo)顯著增加了血清免疫球蛋白M（IgM）、白細(xì)胞介素1β（IL -1β）和腫瘤壞死因子α（TNF-α）水平（P ＜0.05），而日糧添加黃連素后IgM、IL -1β 和TNF-α 水平顯著降低（P ＜0.05）。

表2 黃連素對(duì)脂多糖應(yīng)激肉雞生長(zhǎng)性能的影響

表3 黃連素對(duì)脂多糖應(yīng)激肉雞血清和肝臟抗氧化指標(biāo)的影響

表4 黃連素對(duì)脂多糖應(yīng)激肉雞血液學(xué)和血清免疫指標(biāo)的影響

3 討論

近年來(lái)，從植物中分離的生物活性分子在體內(nèi)和體外對(duì)動(dòng)物抗炎和抗氧化作用的研究越來(lái)越多（Lee 等，2018）。但這些活性分子在動(dòng)物免疫應(yīng)激反應(yīng)中的抗炎和抗氧化作用機(jī)理尚未闡明。在本研究中，我們使用一個(gè)典型的免疫應(yīng)激模型，通過腹腔注射大腸桿菌脂多糖誘導(dǎo)肉雞炎癥反應(yīng)，并評(píng)估了免疫應(yīng)激下添加黃連素對(duì)肉雞抗炎和抗氧化作用的影響。結(jié)果發(fā)現(xiàn)，與未受脂多糖刺激的肉雞相比，脂多糖刺激會(huì)導(dǎo)致肉雞生長(zhǎng)遲緩，這與Zheng 等（2016）的研究結(jié)果一致。此外，本研究還發(fā)現(xiàn)，日糧補(bǔ)充黃連素可以緩解脂多糖刺激對(duì)肉雞生長(zhǎng)性能的抑制作用。

氧化應(yīng)激主要是由于體內(nèi)活性氧產(chǎn)生和消除不平衡，導(dǎo)致自由基過多，破壞核酸、蛋白質(zhì)、脂類等大分子。大量研究表明，脂多糖可誘導(dǎo)膠質(zhì)細(xì)胞活化，產(chǎn)生大量細(xì)胞因子，進(jìn)而釋放自由基，造成細(xì)胞和組織損傷（Zheng 等，2016）。丙二醛作為脂質(zhì)過氧化的產(chǎn)物之一，其產(chǎn)生與氧自由基的含量呈正相關(guān)。因此，檢測(cè)丙二醛含量可以直接反映組織脂質(zhì)過氧化損傷程度。本試驗(yàn)結(jié)果顯示，脂多糖處理組中血清和肝臟丙二醛含量顯著升高，而超氧化物歧化酶活性顯著下降，日糧補(bǔ)充黃連素后可以降低丙二醛含量，提高超氧化物歧化酶活性。這些數(shù)據(jù)表明，黃連素通過調(diào)節(jié)肉雞血液和肝臟中自由基和抗氧化酶的平衡，成功抑制氧化應(yīng)激。

免疫細(xì)胞是評(píng)價(jià)免疫應(yīng)激的重要指標(biāo)。一般來(lái)說(shuō)，血液中白細(xì)胞和淋巴細(xì)胞水平的升高代表著對(duì)脂多糖刺激的后期反應(yīng)（Li 等，2015）。本研究發(fā)現(xiàn)，腹腔注射脂多糖后血液中淋巴細(xì)胞和白細(xì)胞的濃度明顯升高，提示脂多糖刺激后出現(xiàn)免疫應(yīng)激反應(yīng)。Li 等（2015）也發(fā)現(xiàn)，脂多糖刺激增加了肉雞全血中白細(xì)胞的數(shù)量。此外發(fā)現(xiàn)，日糧補(bǔ)充黃連素可以提高注射脂多糖后血液中白細(xì)胞和淋巴細(xì)胞的數(shù)量，這與Shen 等（2010）的研究一致。免疫球蛋白是體液免疫系統(tǒng)的重要組成部分，通過中和病毒、吞噬抗原、抗菌作用等不同策略調(diào)節(jié)宿主的防御免疫反應(yīng)。本研究發(fā)現(xiàn)，黃連素可以調(diào)節(jié)血清IgG，并參與脂多糖誘導(dǎo)的肉雞體液免疫，這一結(jié)果與Li 等（2014）的研究結(jié)果一致。

4 結(jié)論

綜上所述，本研究結(jié)果表明，日糧中添加黃連素可以有效緩解脂多糖誘導(dǎo)的生長(zhǎng)性能抑制、氧化應(yīng)激和炎癥反應(yīng)。黃連素的這種積極作用可能與血清超氧化物歧化酶活性升高、淋巴細(xì)胞和白細(xì)胞減少、血清和肝臟丙二醛含量降低、免疫球蛋白M、腫瘤壞死因子α 和白細(xì)胞介素1β 水平下調(diào)有關(guān)。