鐘慧　應(yīng)學(xué)明　鄢少聰

【摘 要】結(jié)直腸癌是最常見的惡性腫瘤之一，在我國發(fā)病率位于第3位，死亡率居第4位。外周血循環(huán)腫瘤細(xì)胞（CTCs）的檢測作為近年來臨床研究的熱點(diǎn)，在評(píng)估治療癌癥的療效及判斷預(yù)后等方面有著巨大的潛力。本文就結(jié)直腸癌CTC檢測的臨床意義作一綜述。

【關(guān)鍵詞】結(jié)直腸癌;循環(huán)腫瘤細(xì)胞

【中圖分類號(hào)】R735.3【文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼】A【文章編號(hào)】1672-3783（2020）03-09--02

結(jié)直腸癌（colorectal cancer，CRC）是最常見的惡性腫瘤之一，在我國發(fā)病率僅次于肺癌和乳腺癌，死亡率居第4位。每年全球120萬新發(fā)病例中約6萬人死于CRC，20%～45%的患者出現(xiàn)術(shù)后復(fù)發(fā)或發(fā)生遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移。

循環(huán)腫瘤細(xì)胞（Circulating tumor cells，CTCs）是痕量存在于外周血中的各類腫瘤細(xì)胞的的統(tǒng)稱。傳統(tǒng)的診斷手段聯(lián)合外周血循環(huán)腫瘤細(xì)胞（CTCs）檢測的綜合診斷可以提高臨床診療的敏感性，及早提示惡性風(fēng)險(xiǎn)及潛在轉(zhuǎn)移風(fēng)險(xiǎn)，輔助臨床醫(yī)師制訂更加合理的個(gè)體化診療方案。本文就CTCs的富集與分離、檢測技術(shù)及結(jié)直腸癌CTCs檢測的臨床意義進(jìn)行綜述。

1 CTC的富集和分析

1.1 CTC的富集與分離 CTC在腫瘤患者的外周血中數(shù)量極少，每10mL的血液中僅有幾個(gè)至十幾個(gè)，需要先將外周血中的CTC進(jìn)行分離和濃縮，以提高檢測的靈敏度。目前，CTC的富集和分離主要是根據(jù)物理學(xué)和免疫學(xué)特征將其從外周血細(xì)胞中篩選出來。

1.1.1 基于CTC的物理學(xué)特性 研究表明，腫瘤細(xì)胞的直徑與其他細(xì)胞不同，利用具有一定大小的濾過膜可以將直徑較大的CTC富集分離出來?；谕庵苎母鞣N細(xì)胞密度差異產(chǎn)生不同的細(xì)胞沉降系數(shù)，利用密度梯度離心法，將外周血中不同密度的細(xì)胞組分進(jìn)行分離。不同細(xì)胞具有不同的電學(xué)特性，在電場中，這些細(xì)胞產(chǎn)生的電偶極距大小和方向存在差異，利用其受到的力學(xué)作用不同，將目的細(xì)胞分離出來。

1.1.2 基于CTC的免疫學(xué)特性 外周血腫瘤細(xì)胞免疫富集的方法是基于抗原抗體特異性結(jié)合的原理，分為正向富集和負(fù)向富集兩類。正向富集是針對(duì)CTC表面表達(dá)的特異性腫瘤細(xì)胞抗原利用帶有標(biāo)記的外源性抗體與之結(jié)合，從而達(dá)到CTC的直接捕獲和富集。反之，負(fù)向富集的的靶點(diǎn)則是白細(xì)胞表面的抗原利用外源性抗體結(jié)合白細(xì)胞后，將白細(xì)胞篩除，從而達(dá)到去除背景血細(xì)胞而富集CTC的效果。

1.2 CTC的檢測與分析 CTC的檢測分析方法分兩大類：細(xì)胞計(jì)數(shù)法（包括免疫細(xì)胞化學(xué)法和流式細(xì)胞術(shù)等）和核酸檢測法（包括聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)和逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)等）。免疫細(xì)胞化學(xué)法以顯色劑標(biāo)記的特異性抗體進(jìn)行細(xì)胞原位抗原抗體反應(yīng)和化學(xué)呈色反應(yīng)，對(duì)相應(yīng)腫瘤抗原可進(jìn)行定性、定位和定量測定。流式細(xì)胞術(shù)是一項(xiàng)集激光、電子物理、細(xì)胞熒光化學(xué)及單克隆抗體等技術(shù)為一體的新型技術(shù)，定量計(jì)數(shù)腫瘤細(xì)胞。PCR技術(shù)檢測腫瘤患者外周血中的CTC是通過檢測血細(xì)胞中癌基因和抑癌基因的異常表達(dá)。RT-PCR技術(shù)是擴(kuò)增由血細(xì)胞中表達(dá)的腫瘤特異性mRNA序列逆轉(zhuǎn)錄的DNA片段，從而分析腫瘤特異性mRNA的表達(dá)水平。目前在CTC的檢測中應(yīng)用最為廣泛，被認(rèn)為是目前檢測CTC最有效的方法之一。

2 CTC檢測與結(jié)直腸癌治療療效相關(guān)性研究進(jìn)展

2.1 CTC檢測在結(jié)直腸癌輔助診斷中的意義 由于血液系統(tǒng)是腫瘤轉(zhuǎn)移的重要途徑，CTC的存在逐漸成為診斷惡性腫瘤的潛在標(biāo)準(zhǔn)。Sastre等研究針對(duì)97例結(jié)直腸癌患者和30名健康受試者進(jìn)行CTC檢測，97例患者中CTC陽性患者34例（36.2%），未發(fā)現(xiàn)CTC陽性與原發(fā)灶位置、癌胚抗原水平增加、乳酸脫氫酶水平增加有相關(guān)性，但CTC陽性率與分期存在相關(guān)性（Ⅱ期為20.7%、Ⅲ期為24.1%、Ⅳ期為60.7%，P=0.005），研究表明CTC檢測對(duì)輔助診斷有重要的參考價(jià)值。

2.2 CTC在結(jié)直腸癌預(yù)后的判定價(jià)值 研究表明，CTC數(shù)目及治療前后CTC的變化情況對(duì)結(jié)直腸癌患者PFS和OS等預(yù)后信息有預(yù)測作用。De Albuquerque等研究根據(jù)CTC檢測結(jié)果，將患者分成CTC陽性和CTC陰性組，基線CTC陽性的患者相對(duì)于CTC陰性患者中位PFS明顯較短（181d vs.329d）。而且，發(fā)現(xiàn)動(dòng)態(tài)監(jiān)測CTC的變化與影像學(xué)結(jié)果存在顯著相關(guān)性，研究證實(shí)CTC檢測可以作為新的結(jié)直腸癌預(yù)后因子，用于監(jiān)測結(jié)直腸癌患者治療，且CTC較影像學(xué)更早評(píng)估治療效果。

2.3 評(píng)價(jià)腫瘤治療效果和監(jiān)測腫瘤復(fù)發(fā) 多項(xiàng)臨床試驗(yàn)表明CTC的數(shù)量在接受有效化療或靶向藥物治療后顯著降低。目前，治療前基線CTC數(shù)目與影像學(xué)結(jié)果并沒有很好的對(duì)應(yīng)關(guān)系，但是治療前后CTC的數(shù)量的變化與標(biāo)準(zhǔn)的療效評(píng)價(jià)體系有很好的對(duì)應(yīng)關(guān)系。

3 總結(jié)與展望

大量研究證實(shí)，CTC與腫瘤復(fù)發(fā)和轉(zhuǎn)移密切相關(guān)，檢測CTC有助于腫瘤轉(zhuǎn)移的早期診斷、臨床分期、療效監(jiān)測及預(yù)后判斷，并為腫瘤患者的個(gè)體化治療提供有價(jià)值的臨床指導(dǎo)。CTC作為結(jié)直腸癌獨(dú)立的預(yù)后因素，可反映循環(huán)腫瘤負(fù)荷及腫瘤的生物學(xué)特性。CTC的未來朝著單細(xì)胞組學(xué)發(fā)展，擺脫了腫瘤組織標(biāo)本的限制，使非創(chuàng)傷性診斷、監(jiān)測成為了可能，為結(jié)直腸癌的診斷、治療監(jiān)測、預(yù)后評(píng)估等提供了簡便途徑。這也將有助于臨床醫(yī)師更深入地了解腫瘤轉(zhuǎn)移的生物學(xué)特性，動(dòng)態(tài)實(shí)時(shí)地分析患者的腫瘤分子特征，為真正的個(gè)體化治療提供有價(jià)值的依據(jù)。