付旭，崔前進，陳冰，楊博學，蔡忠璐，王旭，劉霞，姜志強，韓雨哲

(大連海洋大學 農(nóng)業(yè)農(nóng)村部北方海水增養(yǎng)殖重點實驗室， 遼寧省北方魚類生物學與增養(yǎng)殖重點實驗室，遼寧 大連 116023)

飼料中脂肪作為魚類的主要能量來源會影響其生長及發(fā)育，魚類的大部分生命活動需要依靠脂肪來維持[1]。Takeuchi 等[2]研究發(fā)現(xiàn)，提高魚類飼料脂肪含量會使蛋白質(zhì)更多地被用于生長發(fā)育，適當增加脂肪含量可以增加飼料中蛋白質(zhì)的利用率。飼料中脂肪水平偏低時，魚類就會利用體內(nèi)的蛋白質(zhì)作為能量來源，從而對魚類的生長產(chǎn)生影響[3-5]。飼料中脂肪含量過高，也會對魚類造成一定的影響，脂肪攝入過量時，魚類的腹腔、腸壁及肝臟等部位會大量囤積脂肪，造成魚體代謝紊亂[6]。

飼料中的脂肪水平也會影響脂溶性色素的利用效果。薛繼鵬[7]著重探究了脂類對魚類著色及類胡蘿卜素吸收累積的影響。葉黃素是類胡蘿卜素的一種，與β胡蘿卜素相似，也是維生素A的前體，作為一種脂溶性色素，可以借助食物中攝取的脂肪為載體更好地被魚體吸收利用，從而達到增色效果[8-9]。由于魚類體內(nèi)無法自身合成葉黃素，但可以消化吸收葉黃素并積累在魚體內(nèi)，故為了讓魚類色澤鮮艷并富含葉黃素可以在飼料中添加適量葉黃素[10]。

淡黑鑷麗魚Labidochromiscaeruleus隸屬于鱸形目慈鯛科鑷麗魚屬，屬于馬拉維湖慈鯛巖棲類，是一種極具觀賞價值的魚類。成年個體呈橙黃色，可適應人工飼料[11]。目前，國內(nèi)外對淡黑鑷麗魚的研究主要集中在形態(tài)學等基礎研究方面。本試驗中，探討了飼料中脂肪水平對淡黑鑷麗魚生長狀況、體態(tài)及色素積累的影響，旨在完善淡黑鑷麗魚營養(yǎng)生理學基礎數(shù)據(jù)。也為淡黑鑷麗魚配合飼料的開發(fā)提供理論參考。

1 材料與方法

1.1 材料

試驗用淡黑鑷麗幼魚自行繁育于當?shù)仞B(yǎng)殖場，體長為(4.7±0.1)cm，體質(zhì)量為(1.70±0.09)g。

1.2 方法

1.2.1 試驗飼料的制備 由大連龍源海洋生物有限公司提供飼料原料，原料通過研磨、過篩后利用攪拌器充分混勻，用小型顆粒飼料制粒機壓制而成。經(jīng)過60 ℃烘箱烘干，使飼料含水量穩(wěn)定于18%，避光、真空密封存放于冰箱(-20 ℃)中。其中脂肪源由大豆油(益海嘉里食品營銷有限公司，上海)提供，混合礦物質(zhì)和混合維生素預混料配方參照文獻[12]。試驗飼料的基本營養(yǎng)成分及比例引用作者之前同系列試驗配方[13]，配制成5組等氮飼料(表1)。

表1 試驗飼料營養(yǎng)成分含量Tab.1 Nutrient levels of the trial diets %

1.2.2 試驗設計及飼養(yǎng)管理 將試驗魚暫養(yǎng)一周后，取120尾狀態(tài)良好的淡黑鑷麗魚隨機分成5個試驗組，即Z1(對照)、Z2、Z3、Z4、Z5組，分別投喂飼料脂肪水平為7.44%、9.86%、10.91%、15.25%和23.69%的5組試驗飼料，各試驗組設3個平行，每個平行組飼養(yǎng)8尾試驗魚。整個試驗過程中，將所有組均隨機置于控溫循環(huán)水系統(tǒng)(大連匯新鈦有限責任公司)中，共用15個水槽，水溫為25.0 ℃，循環(huán)水流量為3 L/min，養(yǎng)殖水體體積為30 L，每日8:00和16:00表觀飽食投喂2次。投喂1 h后吸底，養(yǎng)殖過程中用吸管虹吸循環(huán)水系統(tǒng)中的糞便，每日18：00換水20%，以保證水質(zhì)穩(wěn)定良好，每日光照12 h。用氣泵持續(xù)充氣，確保氧氣充足(溶解氧≥7.0 mg/L)。養(yǎng)殖試驗共進行68 d。

1.2.3 樣品的采集 試驗開始時測定試驗魚初始體長、體質(zhì)量和體色，試驗過程中對每組魚進行觀察并記錄死亡狀況。每20 d使用色差儀(Konica Minolta Spectrophotometer CM-2600d)測量魚體體色。試驗結(jié)束后停食24 h，從每個平行組隨機取6尾魚，精確測量其體長、體質(zhì)量后，解剖稱量其內(nèi)臟團、腸道和肝臟質(zhì)量，取其肌肉、皮膚(帶鱗片)、眼、肝臟、背鰭、尾鰭、胸鰭、腹鰭、臀鰭分別做混樣測定總類胡蘿卜素含量。取每組試驗魚肝臟混合樣，使用南京建成試劑盒測定轉(zhuǎn)氨酶活性。

1.2.4 指標的測定及計算

(1)魚體生長指標。對淡黑鑷麗魚的飼料系數(shù)、特定生長率、臟體比、肝體比、增重率、存活率和肥滿度進行測定與計算，即

增重率(BWG)=(Wt-W0)/W0×100%，

特定生長率 (SGR)=(lnWt-lnW0)/t×100%，

飼料系數(shù) (FCR)=C/(Wt-W0)，

肥滿度 (CF)=Wt/L3×100%，

肝體比(HSI)=WH/Wt×100%，

臟體比(VSI)=WV/Wt×100%，

存活率(SR)=Nt/N0×100%。

其中：Wt、W0分別為終末和初始試驗魚體質(zhì)量(g)；Nt、N0分別為終末和初始試驗魚數(shù)量(ind.)；L為魚體長度(cm)；C為攝餌量(干質(zhì)量，g)；t為試驗時間(d);WH為魚體肝臟質(zhì)量(g)；WV為魚體內(nèi)臟團質(zhì)量(g)。

采用Foss Kjeltec 8400系列凱氏定氮儀測定淡黑鑷麗魚樣品的粗蛋白質(zhì)含量，分別采用國標GB/T 6433—1994、GB/T 6438—1992、GB/T 6435—1986測定粗脂肪、粗灰分和水分含量。

(2)魚體色度。參照Robinson[14]的方法，以L*(亮度)、a*(+a*代表偏紅，-a*代表偏綠)、b*值(+b*代表偏黃，-b*代表偏藍)來代表顏色的狀態(tài)對體色進行檢測。本試驗中采用色差儀(Konica Minolta Spectrophotometer CM—2600d)進行檢測，隨機抽取每個平行組中的4尾魚于胸鰭后側(cè)線處測得L*、a*、b*值并進行統(tǒng)計分析。

(3)總類胡蘿卜素含量。參考崔培等[15]的方法略做修改，取適量樣品記錄樣品質(zhì)量后，對淡黑鑷麗魚的眼、肝臟、肌肉、皮膚(帶鱗片)、鰭各組織及飼料進行總類胡蘿卜素含量(mg/kg)的測定，即

總類胡蘿卜素含量=A×K×V/(E×G)。

其中：A為吸光度值；K為系數(shù)(104mg/L)；V為提取液體積(mL)；E為摩爾消光系數(shù)(2500)；G為樣品質(zhì)量(g)。

1.3 數(shù)據(jù)處理

試驗數(shù)據(jù)以平均值±標準差(mean±S.D.)表示，采用SPSS 20.0軟件對試驗數(shù)據(jù)進行單因素方差分析，并用Duncan法進行組間多重比較，顯著性水平設為0.05。

2 結(jié)果與分析

2.1 淡黑鑷麗魚的生長性能

從表2可見：淡黑鑷麗魚的終末體質(zhì)量和特定生長率隨著攝入脂肪量的增加呈先增后降趨勢，并于Z3組出現(xiàn)最高值，且顯著高于Z1組(P<0.05)；Z3組的增重率最高且顯著高于Z1和Z2組(P<0.05)；Z3、Z4組存活率最高，Z5組存活率最低且顯著低于其他各組(P<0.05)；飼料系數(shù)隨飼料脂肪水平的增加呈先降后增的趨勢，并在Z3組出現(xiàn)最低值，Z1組出現(xiàn)最高值且顯著高于其他組(P<0.05)。

飼料脂肪水平與淡黑鑷麗魚體質(zhì)量特定生長率之間的關系如圖1所示，通過折線模型回歸方程得出飼料脂肪水平在10.76%時淡黑鑷麗魚的體質(zhì)量特定生長率最大，為1.46%/d。

表2 飼料脂肪水平對淡黑鑷麗魚生長性能的影響Tab.2 Effect of dietary lipid levels on growth performance of cichlid Labidochromis caeruleus

注：同列中標有不同字母者表示組間有顯著性差異(P<0.05)，標有相同字母者表示組間無顯著性差異(P>0.05)，下同

Note:The means with different letters within the same column are significantly different among the groups at the 0.05 probability level, and the means with the same letters within the same column are not significant differences, et sequentia

2.2 淡黑鑷麗魚肝體比、臟體比和肥滿度的變化

從表3可見：飼料中脂肪水平的變化對淡黑鑷麗魚臟體比無顯著性影響(P>0.05)；Z3和Z4組淡黑鑷麗魚肝體比較低且顯著低于其他組(P<0.05)；肥滿度隨攝入脂肪量的增加呈現(xiàn)先增后降的趨勢，Z3組出現(xiàn)最大值且顯著高于其他組(P<0.05)。

2.3 魚體各部分總類胡蘿卜素含量的變化

從表4可見：肌肉和皮膚(含鱗片)中總類胡蘿卜素含量隨著攝入脂肪量的增加整體上呈升高趨勢，但各組間無顯著性差異(P>0.05)；攝入脂肪量的增加主要對肝臟、背鰭、尾鰭、胸鰭、腹鰭中總類胡蘿卜素含量產(chǎn)生顯著影響，并于Z5組出現(xiàn)最高值(P<0.05)；臀鰭中總類胡蘿卜素含量于Z4組出現(xiàn)最高值，且Z4、Z5組顯著高于其他組(P<0.05)。淡黑鑷麗魚身體各部分的總類胡蘿卜素的含量比較顯示，鰭和皮膚(含鱗片)中的含量比肌肉、肝臟和眼中要高，肌肉中的含量最低，背鰭中的含量最高。

表3 飼料脂肪水平對淡黑鑷麗魚形體指數(shù)的影響

Tab.3 Effect of dietary lipid levels on body indices of cichlidLabidochromiscaeruleus

組別group肝體比HSI/%肥滿度CF/%臟體比VSI/%Z12.90±0.07c1.65±0.01a7.67±0.24Z22.64±0.03b1.69±0.01ab8.34±0.06Z32.34±0.09a1.82±0.03c8.50±0.87Z42.24±0.04a1.68±0.01ab9.46±0.46Z53.02±0.10c1.71±0.01b9.77±0.79

表4 飼料脂肪水平對淡黑鑷麗魚各組織總類胡蘿卜素含量的影響

Tab.4 Effect of dietary lipid levels on total carotenoid contents in different organs of cichlidLabidochromiscaeruleus

mg/kg

2.4 淡黑鑷麗魚體表色度的變化

從圖2可見：隨著飼料脂肪水平的增加，各組間亮度無顯著性差異(P>0.05)，紅度呈升高趨勢，黃度呈先升后降趨勢且在Z3組開始平緩下降；紅度和黃度在試驗進行到40 d后各處理組間有顯著性差異(P<0.05)；試驗結(jié)束時(68 d)，Z4、Z5組紅度顯著高于Z1和Z3組(P<0.05)，Z1組黃度顯著低于其余各組(P<0.05)；隨養(yǎng)殖時間的延長，Z4和Z5組魚紅度有顯著升高的趨勢(P<0.05)，Z3、Z4、Z5組魚黃度有顯著升高的趨勢(P<0.05)。

2.5 淡黑鑷麗魚轉(zhuǎn)氨酶活力的變化

從表5可見：淡黑鑷麗魚肝臟谷草轉(zhuǎn)氨酶活力隨飼料脂肪水平的增加有升高趨勢，但各組間均無顯著性差異(P>0.05)；飼料中過高的脂肪含量(Z5)和過低的脂肪含量(Z1)對谷丙轉(zhuǎn)氨酶的活力有顯著性影響(P<0.05)。

表5 飼料脂肪水平對淡黑鑷麗魚肝臟轉(zhuǎn)氨酶活力的影響

Tab.5 Effect of dietary lipid levels on transaminase activities of cichlidLabidochromiscaeruleus

3 討論

3.1 飼料脂肪水平對淡黑鑷麗魚生長狀況的影響

飼料中的脂肪是動物脂肪酸的來源及維持機體正常生長和發(fā)育的重要能量物質(zhì)。由于魚類對碳水化合物利用率低，主要的能量來源由蛋白質(zhì)和脂肪提供。本試驗中淡黑鑷麗魚的特定生長率和體增重率隨飼料脂肪水平的增加呈先增高后降低的趨勢，并在10.91%飼料脂肪組(Z3)出現(xiàn)峰值，而飼料系數(shù)則呈現(xiàn)相反的變化趨勢。造成此現(xiàn)象，一方面可能是因為飼料中脂肪含量不足時，就會迫使蛋白質(zhì)作為供能物質(zhì)，而使蛋白質(zhì)無法更好地用于魚體的生長發(fā)育，故在飼料中適當提高脂肪含量，能夠減少蛋白質(zhì)作為供能物質(zhì)的消耗[16]，從而促進魚生長；另一方面，適量的脂肪還可以促進脂溶性的維生素更好地被吸收利用[17]。但若是飼料脂肪水平高于所需水平，飼料中的能蛋比平衡被打破，脂肪的消化利用率會降低，從而抑制肌肉中脂肪酸的合成，對有些種類的魚還會產(chǎn)生高血糖效應，同時還對葡萄糖-6-磷酸酶(G6Pase)活性及基因的表達產(chǎn)生誘導作用，對碳水化合物的利用效率產(chǎn)生影響，導致魚體生長發(fā)育速度下降[18-19]。飼料脂肪較高還會影響其他營養(yǎng)物質(zhì)的消化吸收[20]，故脂肪添加量過高或過低均不利于魚的生長發(fā)育。本研究中，通過飼料脂肪水平與體質(zhì)量特定生長率的折線模型分析得出最適的脂肪添加量為10.76%，其體質(zhì)量特定生長率為1.46%/d。本試驗中23.69%高脂肪飼料組存活率顯著低于其他脂肪組，在試驗取樣解剖中發(fā)現(xiàn)，15.25%和23.69%飼料脂肪組試驗魚的體腔、腸道及肝臟都覆蓋有大量的脂肪，并且飼料脂肪水平為23.69%時肝臟體積極大，肝臟顏色發(fā)生變化，可能為肝臟損傷的一種表現(xiàn)。Otwell等[21]在試驗中也發(fā)現(xiàn)相似現(xiàn)象，其解釋為飼料中的脂肪含量過高會使魚體攝入多余的脂肪大量累積于腹腔、肌肉、臟器等部位，嚴重時會誘發(fā)脂肪肝，最終導致死亡。

3.2 飼料脂肪水平對淡黑鑷麗魚肝體比、臟體比和肥滿度的影響

臟體比反映魚體內(nèi)脂肪積累量的多少，本試驗中臟體比隨飼料脂肪水平的增加而升高，這也反映了魚體內(nèi)脂肪累積情況。本試驗中除23.69%高脂肪飼料組以外，其他4組的肝體比隨飼料脂肪水平(7.44%～12.25%)的增加呈較平緩下降趨勢，23.69%飼料脂肪組升高說明脂肪攝入已超過了正常范圍，魚體會將攝入的脂肪轉(zhuǎn)化為體脂儲存在肌肉、肝臟及體腔之內(nèi)[22]。而肝臟作為脂肪主要的代謝器官，魚體攝入脂肪增多會增加肝臟的代謝負擔，進而引起肝臟增大[23]。結(jié)合存活率可以看出，過高的飼料脂肪水平能夠?qū)υ囼烎~產(chǎn)生健康隱患。從體質(zhì)量特定生長率和體增重率較低分析得出，低脂肪飼料被魚體的腸道消化吸收較困難，從而引起肝內(nèi)、外膽汁淤積，造成膽汁淤積性肝腫大，只有適量的脂肪攝入水平才能保證魚體的健康[24]。

3.3 飼料脂肪水平對淡黑鑷麗魚各組織器官總類胡蘿卜素含量的影響

Torrissen等[25]提出通過提高飼料中脂肪水平來影響魚類對蝦青素的消化吸收，這與本試驗中隨著飼料脂肪水平的升高，淡黑鑷麗魚魚體表、肝臟及身體各個部分的總類胡蘿卜素含量呈升高的結(jié)果相符合。Lee等[26]對虹鱒的究結(jié)果也顯示，隨飼料脂肪水平的升高魚體內(nèi)蝦青素的累積量會增加，進一步證明試驗飼料脂肪水平的適當升高有助于魚體積累類胡蘿卜素的假設。本試驗中，魚體類胡蘿卜素累積量順序是鰭最多，其次是皮膚(含鱗片)，然后是眼和肝臟，最后是肌肉。同時，鰭和皮膚對類胡蘿卜素的積累量明顯高于眼、肝臟和肌肉，這與張曉紅等[27]在對血鸚鵡Amphilophuscitrinellus×Cichlasomasynspilum體色的研究結(jié)果相似。

3.4 飼料脂肪水平對淡黑鑷麗魚體表色度的影響

本試驗中，隨著飼料脂肪水平的增加，淡黑鑷麗魚的亮度無顯著性變化，表明飼料脂肪水平對亮度的影響不顯著；魚體紅度、黃度均在試驗第40天時各組間開始出現(xiàn)顯著性差異，魚體黃度在10.91%飼料脂肪時出現(xiàn)峰值，之后趨于平緩，而15.25%和23.69%飼料脂肪組的紅度顯著高于其他脂肪組，說明飼料中適當?shù)闹舅綄︳~體色度有一定提高效果。這與崔培等[28]對紅白錦鯉Cyprinuscarpio的研究結(jié)果一致。本試驗中，隨著時間的積累，亮度、紅度和黃度呈升高趨勢，且高脂肪組不同時間測得數(shù)據(jù)具有顯著性差異，而低脂肪組無顯著性差異，推測隨時間的延長體色的變化受飼料脂肪水平的影響，飼料中適當?shù)奶岣咧舅接兄隰~體顏色鮮艷。本試驗中還發(fā)現(xiàn)，當黃度在10.91%飼料脂肪組趨于平緩時，紅度在10.91%飼料脂肪組之后開始升高明顯，推斷脂肪水平提高到一定程度后促使體表的黃色會開始呈現(xiàn)紅色。Simpson[29]和Yuangsoi等[30]分別對金魚Carassiusauratus和錦鯉Cyprinuscarpio的研究中發(fā)現(xiàn)，飼料中添加葉黃素，此兩種魚紅度會升高，證明一些魚類會將多余的葉黃素轉(zhuǎn)化為紅色素，與本試驗現(xiàn)象相似，且本試驗中魚皮膚(含鱗片)的總類胡蘿卜素含量雖然升高，但是黃度在飼料脂肪為10.91%之后呈平緩下降趨勢，此結(jié)果可能與魚類對黃色類胡蘿卜素與紅色類胡蘿卜素之間的轉(zhuǎn)化有關，或與魚類體表色素細胞的種類和生長相關[29-30]。

3.5 飼料脂肪水平對淡黑鑷麗魚轉(zhuǎn)氨酶活力的影響

谷草轉(zhuǎn)氨酶和谷丙轉(zhuǎn)氨酶主要參與體內(nèi)轉(zhuǎn)氨反應，體內(nèi)的多種器官均存在此兩種酶，主要由肝臟器官產(chǎn)生，當肝臟發(fā)生病變、壞死，肝功能受到損傷時，此兩種酶的活性就會發(fā)生變化，故常用此兩種酶來判斷肝功能指標是否正常[31]。本試驗中谷丙轉(zhuǎn)氨酶隨攝入脂肪量的增加，其活性呈現(xiàn)波動上升，并在飼料脂肪含量為23.69%時顯著升高，且此時的存活率顯著低于其他脂肪組，說明隨著脂肪攝入的增加，魚體肝臟承受的負荷也在增加，直至造成嚴重損傷，進而導致死亡。谷草轉(zhuǎn)氨酶各組間雖無明顯差異，但也與谷丙轉(zhuǎn)氨酶的趨勢相近，與葉坤等[32]對黃姑魚Albifloracroaker的研究結(jié)果相同。

4 結(jié)論

淡黑鑷麗魚的飼料中脂肪水平低于10.91%時，隨飼料脂肪水平的升高，淡黑鑷麗魚的生長性能、飼料利用率隨之升高。飼料中脂肪水平超過10.91%時，會對淡黑鑷麗魚的生長產(chǎn)生影響，且谷丙轉(zhuǎn)氨酶和谷草轉(zhuǎn)氨酶活力升高，對魚類健康狀況產(chǎn)生負面影響，過高飼料脂肪含量會引起淡黑鑷麗魚存活率顯著下降。魚體各部分總類胡蘿卜素含量隨飼料脂肪水平的升高而持續(xù)升高，但黃度在飼料脂肪水平達到10.91%后趨于平緩。折線模型回歸方程擬后得到，飼料中最適脂肪添加量為10.76%，體質(zhì)量特定生長率達1.46%/d。