袁麗紅，王乙茹，錢錦花，楊向東，程志斌*

（1.云南農(nóng)業(yè)大學(xué)，昆明 650201；2.玉溪農(nóng)業(yè)職業(yè)技術(shù)學(xué)院，云南 玉溪 653100；3.昆明云嶺廣大種禽飼料有限公司，昆明 650200）

飼用抗生素耐藥、殘留、安全等問題促使我國農(nóng)業(yè)部定于2020 年7 月禁止一切以促生長為目標(biāo)的藥物添加劑在畜禽飼料中使用[1-2]。因此，飼用益生菌等安全飼料添加劑的開發(fā)成為當(dāng)前飼料行業(yè)的熱點(diǎn)[3-4]?？莶菅挎邨U菌（Bacillus subtilis）是最早研發(fā)與應(yīng)用于畜禽飼料的飼用益生菌[5]。大量研究表明，枯草芽孢桿菌主要通過分泌多種水解酶類補(bǔ)充腸道消化酶[6-7]，通過抑制有害菌調(diào)控腸道菌群平衡[8-10]，這些益生作用可改善畜禽營養(yǎng)攝入及健康狀況，有利于維持和保障畜禽正常的生產(chǎn)性能[11-13]。

本課題組篩選了2株枯草芽孢桿菌，枯草芽孢桿菌-I 有較強(qiáng)的消化酶分泌能力，但無明顯的抑菌作用；枯草芽孢桿菌-Ⅱ是1 株具有抑制多種腸道有害菌的特殊菌株。鑒于飼喂單一功效的枯草芽孢桿菌已有大量試驗(yàn)報(bào)道，因此本試驗(yàn)將篩選的2株枯草芽孢桿菌組合以評(píng)估復(fù)合枯草芽孢桿菌制劑對肉雞的飼喂效果，旨在指導(dǎo)肉雞養(yǎng)殖生產(chǎn)中更好的選用商業(yè)枯草芽孢桿菌制劑產(chǎn)品。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)用枯草芽孢桿菌及其益生作用的評(píng)估

枯草芽孢桿菌-Ⅰ和枯草芽孢桿菌-Ⅱ由課題組前期篩選。開展動(dòng)物飼喂試驗(yàn)之前，經(jīng)實(shí)驗(yàn)室評(píng)估2株枯草芽孢桿菌的產(chǎn)酶及抑菌益生作用，見表1。產(chǎn)酶益生作用的評(píng)估方法參考陶榮霞[14]的報(bào)道，以飼料原料小麥麩皮為培養(yǎng)基接種待測定的2株枯草芽孢桿菌，37 ℃下48 h 培養(yǎng)后，測定蛋白酶、淀粉酶、脂肪酶、纖維素酶的活力[14]。抑菌益生作用采用體外抑菌實(shí)驗(yàn)的牛津杯法，參考朱沛霽[15]的報(bào)道。

表1 試驗(yàn)用枯草芽孢桿菌的產(chǎn)酶及抑菌益生作用

1.2 試驗(yàn)動(dòng)物

216只1日齡AA肉公雞分成3個(gè)組，如下：Ⅰ組，飼喂基礎(chǔ)飼糧；Ⅱ組，在基礎(chǔ)飼糧中添加300 g·t-1枯草芽孢桿菌-Ⅰ（1×1010cfu·g-1）；Ⅲ組，在基礎(chǔ)飼糧中添加300 g·t-1復(fù)合枯草芽孢桿菌制劑（5×109cfu·g-1枯草芽孢桿菌-Ⅰ和5×109cfu·g-1枯草芽孢桿菌-Ⅱ）。每個(gè)處理組12 個(gè)重復(fù)，每個(gè)重復(fù)6只雞，飼喂試驗(yàn)周期21 d。

1.3 試驗(yàn)飼糧

試驗(yàn)飼糧參照NRC（1994）肉雞營養(yǎng)需要量配制，基礎(chǔ)日糧組成及營養(yǎng)水平見表2。3 組試驗(yàn)飼糧中均不添加藥物飼料添加劑及其他飼用益生菌、功能性替抗添加劑。

1.4 飼養(yǎng)管理

試驗(yàn)前，對雞舍及雞籠等相關(guān)養(yǎng)殖設(shè)施設(shè)備器具進(jìn)行徹底的沖洗和消毒，通風(fēng)凈化后再開始試驗(yàn)。雛雞進(jìn)舍前24 h 雞舍升溫，控制溫度不低于34 ℃。投喂試驗(yàn)飼糧3 次·d-1，自由采食和飲水。育雛第1 周溫度為31～34 ℃，第2 周28～30 ℃，第3 周26～29 ℃。按場內(nèi)常規(guī)免疫程序執(zhí)行。勤觀察試驗(yàn)雞的健康狀況，及時(shí)記錄處理。

1.5 測定指標(biāo)

以每個(gè)重復(fù)為單位統(tǒng)計(jì)肉雞的初重、末重及采食量，計(jì)算21 d 內(nèi)的平均日增重、平均日采食量、料重比。試驗(yàn)雞均帶有腳標(biāo)，發(fā)現(xiàn)敷肛的腹瀉雞做好腳標(biāo)記錄，并用溫水清洗處理。死淘雞（包括：死亡和異常生理淘汰的雞）如實(shí)記錄。

1.6 統(tǒng)計(jì)分析

試驗(yàn)數(shù)據(jù)利用SPSS 軟件中的單因素方差分析模塊，選用LSD法進(jìn)行統(tǒng)計(jì)，P＞0.05差異顯著。

2 結(jié)果與分析

2.1 復(fù)合枯草芽孢桿菌對AA肉雞生長性能的影響

表3 結(jié)果顯示，Ⅲ組肉雞的料重比顯著低于I與Ⅱ組（P＜0.05），且I 與Ⅱ組的料重比差異不顯著（P＞0.05）。此外，末重、平均日增重、平均日采食量等生長性能指標(biāo)，Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ組之間統(tǒng)計(jì)差異不顯著（P＞0.05）。

2.2 復(fù)合枯草芽孢桿菌對AA肉雞腹瀉與死亡情況的影響

由表4結(jié)果可知，Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ組肉雞的腹瀉率分別為8.3%、16.7%、9.7%；Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ組肉雞的死淘率分別為4.2%、8.3%、1.4%。由此可見，Ⅲ組添加復(fù)合枯草芽孢桿菌的肉雞群體健康狀況最好。

表2 基礎(chǔ)日糧組成及營養(yǎng)水平

表3 枯草芽孢桿菌對AA肉雞生長性能的影響

表4 枯草芽孢桿菌對AA肉雞腹瀉與死亡情況的影響

3 討論

待飼喂的枯草芽孢桿菌-Ⅰ和枯草芽孢桿菌-Ⅱ的產(chǎn)酶與抑菌益生作用評(píng)估結(jié)果顯示（表1），枯草芽孢桿菌-Ⅰ能夠產(chǎn)較高的蛋白酶以及極其少量的纖維素酶，這說明枯草芽孢桿菌-Ⅰ主要產(chǎn)蛋白酶為主，該菌株產(chǎn)蛋白酶的益生作用與陶榮霞[14]、竺禮斌[16]和宋鵬等[17]的報(bào)道一致?？莶菅挎邨U菌-Ⅱ能夠抑制大腸桿菌、雞沙門氏菌、產(chǎn)氣莢膜梭菌、金黃色葡萄球菌，該菌株抑菌的益生作用與朱沛霽[15]、許國洋等[18]和張媛媛等[19]的報(bào)道一致。此外，枯草芽孢桿菌-I 無抑菌作用，枯草芽孢桿菌-Ⅱ只能分泌很少的蛋白酶、幾乎不分泌淀粉酶、脂肪酶和纖維素酶。上述結(jié)果表明，不同的枯草芽孢桿菌菌株，其益生作用差異較大，這與大量的前人綜述報(bào)道一致[5,20-21]。進(jìn)一步推測，這可能是動(dòng)物飼喂試驗(yàn)生產(chǎn)性能差異的主要原因，據(jù)此本研究進(jìn)一步開展了動(dòng)物試驗(yàn)以驗(yàn)證這一推測。

無抗日糧條件下，與對照組相比，單一添加枯草芽孢桿菌-Ⅰ的肉雞生長性能無改善作用（P＞0.05，表3）。該研究結(jié)果與朱金林等和胡長慶等的報(bào)道一致[22-23]。朱金林等研究發(fā)現(xiàn)，與對照組相比，飼用枯草芽孢桿菌對1～21 日齡肉雞的平均日增重、平均日采食量、料重比等生長性能指標(biāo)無顯著影響[22]。胡長慶等也表明，他們篩選飼喂的4 株枯草芽孢桿菌對1～21 日齡肉雞的平均日增重?zé)o明顯改善[23]。課題組推測枯草芽孢桿菌-Ⅰ雖有產(chǎn)酶功能，但要發(fā)揮補(bǔ)充腸道內(nèi)源酶不足的益生作用，顯然受到肉雞正常腸道消化酶分泌及飼料原料選擇和營養(yǎng)水平的影響[22-23]。幼齡肉仔雞生理各項(xiàng)功能發(fā)育不健全，良好的生長性能恰恰不僅僅受到營養(yǎng)的影響，更直接面臨環(huán)境各種病原菌的危害，易發(fā)多種腹瀉、感染等腸道疾病，造成幼齡肉仔雞死亡及生長性能下降[24]。由于枯草芽孢桿菌-Ⅰ沒有抑菌益生作用，這可能是單一添加枯草芽孢桿菌-Ⅰ的肉雞生長性能沒有改善的關(guān)鍵原因。

與對照組相比，添加復(fù)合枯草芽孢桿菌的肉雞料重比顯著降低（P＜0.05，表3）。研究結(jié)果與趙希彥和潘康成等的報(bào)道一致[25-26]。趙希彥發(fā)現(xiàn)，在飼料中添加枯草芽孢桿菌使1～21 日齡肉雞飼料轉(zhuǎn)化效率顯著提高[25]。根據(jù)潘康成等的研究結(jié)論，飼用枯草芽孢桿菌改善肉雞料重比的效果，前期（1～21日齡）優(yōu)于后期（22～42日齡）[26]。本試驗(yàn)用的復(fù)合枯草芽孢桿菌中含有一株能夠顯著抑制肉雞腸道有害菌沙門氏菌、產(chǎn)氣莢膜梭菌、大腸桿菌的枯草芽孢桿菌-Ⅱ（表1），這可能是該組肉雞獲得良好生產(chǎn)性能的直接原因。

胡均等和陳彩文等的報(bào)道顯示，添加枯草芽孢桿菌可顯著增加肉雞成活率[9,27]。本次研究結(jié)果也顯示（表4）：復(fù)合枯草芽孢桿菌組肉雞的腹瀉率和死淘率顯著低于對照組和單一枯草芽孢桿菌-Ⅰ組。秦瑤等篩選了2株能夠抑制沙門氏菌和大腸桿菌的枯草芽孢桿菌菌株，且證明大部分枯草芽孢桿菌菌株以分泌消化酶的益生作用為主，獲得抑菌益生作用的特定菌株較難[28]。劉秀俠等也報(bào)道支持這一觀點(diǎn)[29]。Zhang 等用篩選的有抑菌功效的枯草芽孢桿菌菌株（編號(hào)：UBT-MO2）添加入飼料，發(fā)現(xiàn)顯著抑制肉雞腸道中的有害菌，這與體外抑菌實(shí)驗(yàn)結(jié)果相符[28-29]，是具有抑菌益生作用的特定枯草芽孢桿菌菌株改善肉雞生長性能的關(guān)鍵原因。以上研究報(bào)道與本研究結(jié)果基本一致。

4 結(jié)論

本研究表明，飼糧中添加復(fù)合枯草芽孢桿菌、尤其是含有能夠顯著抑制腸道有害菌的枯草芽孢桿菌菌株，能顯著改善無抗日糧條件下肉仔雞的飼料轉(zhuǎn)化效率與健康狀況，保障肉雞正常的生長性能。