董星，陳龍芳，劉淵

（成都中醫(yī)藥大學(xué)，四川 成都）

0 引言

大鼠因基因與人類相近，并且具有繁殖能力強(qiáng)、易獲取易飼養(yǎng)、造模周期短、價(jià)格低廉等特點(diǎn)，成為了醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)中常用的造模動(dòng)物。運(yùn)用大鼠進(jìn)行針刺是實(shí)驗(yàn)室針刺機(jī)制研究的主要形式，在大鼠的針刺研究中，如何對(duì)大鼠進(jìn)行有效固定看似無關(guān)緊要，實(shí)則是很重要的環(huán)節(jié)。固定不到位，大鼠掙扎，則針刺無法進(jìn)行，實(shí)驗(yàn)無法開展；固定過度，則可能會(huì)導(dǎo)致大鼠損傷，甚至死亡。同時(shí)固定方法不能過于復(fù)雜，否則不僅浪費(fèi)實(shí)驗(yàn)人員的時(shí)間，也會(huì)造成大鼠的掙扎疲勞，影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果。筆者在針刺大鼠的實(shí)驗(yàn)中，發(fā)現(xiàn)現(xiàn)有的多種大鼠固定方法均不盡如人意，最終通過反復(fù)實(shí)驗(yàn)，摸索出一種簡捷有效的固定方法，以饗同道。

1 針刺固定方法回顧及評(píng)析

對(duì)大鼠的固定可以按照科研需求分為注射固定、給藥固定及針刺固定，注射和給藥固定方式多是采用塑料瓶固定，取效佳，但不能滿足針刺目的，故在此不議。傳統(tǒng)束縛固定方法多采用布條捆綁固定身體，并用醫(yī)用膠帶固定四肢，但筆者在實(shí)踐過程中發(fā)現(xiàn)，操作者為了最大程度地達(dá)到固定的目的，會(huì)加大束縛力度，仰臥位的傳統(tǒng)固定法會(huì)對(duì)大鼠造成極大的恐慌，而俯臥位的傳統(tǒng)固定法則往往會(huì)壓迫大鼠胸部，導(dǎo)致心肺功能不全而死亡，二者均在相當(dāng)大的程度上影響了實(shí)驗(yàn)進(jìn)程。有操作者支持將大鼠麻醉后針刺，但多次麻醉及麻醉狀態(tài)針刺的效果應(yīng)該受到質(zhì)疑。此外，動(dòng)物實(shí)驗(yàn)更應(yīng)該遵循動(dòng)物福利倫理的“3R”原則，即reduction,replacement, refinement（減少、替代、優(yōu)）。研究人員應(yīng)盡可能地完善實(shí)驗(yàn)程序和改進(jìn)實(shí)驗(yàn)技術(shù)，避免或減輕給動(dòng)物造成的與實(shí)驗(yàn)?zāi)康臒o關(guān)的疼痛和緊張不安。現(xiàn)對(duì)主要的幾種方法評(píng)述如下。

1.1 利用恐高特性固定

王宇[1]等利用大鼠具有恐高性，將其放置于高于地面并空間有限的木板上，大鼠會(huì)自動(dòng)保持相對(duì)靜止，從而進(jìn)行有限的“固定”。高臺(tái)的制作方法為將一反“L”形木板與桌面平行放置的木板裝訂，反“L”形木板底部為高臺(tái)踏板（6cm*12cm），距離地面50cm，用于大鼠的放置。認(rèn)為相較于傳統(tǒng)的束縛固定法，大鼠置高臺(tái)固定法能有效地減少束縛應(yīng)激對(duì)動(dòng)物模型與針刺效應(yīng)的影響，可用于大鼠針刺時(shí)的固定。

評(píng)析：依靠大鼠畏高的特性能夠?qū)⒋笫蟀胱栽腹潭ㄓ谝惶帲芯空J(rèn)為放置高臺(tái)“固定”能有效減少束縛應(yīng)激對(duì)大鼠針刺結(jié)果的影響，設(shè)計(jì)甚為巧妙。該固定方法較適合于選取大鼠頭背部、四肢外側(cè)的穴位進(jìn)行針刺。但在實(shí)踐中也存在著一些問題：筆者在對(duì)此方式進(jìn)行實(shí)踐時(shí)發(fā)現(xiàn)，此方法并未對(duì)大鼠進(jìn)行有效固定，大鼠生性兇猛，且針灸對(duì)其刺激性大，會(huì)極大程度地增加實(shí)驗(yàn)操作者受傷的可能性。此外，筆者觀察到，雖然大鼠有畏高性，但多數(shù)大鼠仍然會(huì)選擇從高處躍下逃跑，最終勢(shì)必導(dǎo)致針刺無法正常進(jìn)行。并且，若課題項(xiàng)目所制作的大鼠疾病模型與神經(jīng)疾病相關(guān)，大鼠存在著無法自我控制行為等問題，如此則更加無法確保實(shí)驗(yàn)的穩(wěn)定性。

1.2 金屬固定筒固定

李洋洋[2]等用金屬絲網(wǎng)制作了大鼠固定筒，固定筒包括身體固定筒、固定叉、頸部固定叉。用孔徑約為0.2*0.2cm的金屬絲網(wǎng)做成身體固定筒，彎曲2-3cm的鐵絲制作為固定叉（包括兩個(gè)前肢固定叉和一個(gè)后肢固定叉），并使用兩根金屬棒或木筷固定頭部。后再用兩個(gè)“Y”形金屬架稱其固定筒，以達(dá)到使大鼠身體懸空，方便針刺的目的。

評(píng)析：該固定方式能夠使大鼠懸空，充分暴露出大鼠整個(gè)身體，利于操作者觸摸大鼠骨性標(biāo)志，以定位穴位。但此裝置制作過程繁瑣，不具備制作快捷方便的特點(diǎn)，并且不能夠根據(jù)大鼠身體大小而隨時(shí)調(diào)整，具有一定的局限性。

1.3 襪子束縛固定

王建波[3]等選用柔軟度好，且質(zhì)地較厚的襪子，將襪子從腳跟部剪成兩截，前半截作為套頭使用，后半截分別剪出4個(gè)小洞，將四肢從洞中穿出后，用橡皮筋束縛四肢并固定于兔臺(tái)上，由于橡皮筋的張力，大鼠的四肢得以充分展開，此時(shí)便可以對(duì)大鼠四肢部位進(jìn)行針刺。

評(píng)析：此固定方法所需要的固定材料簡單易尋，易于操作。將大鼠四肢分開后，能夠很好地滿足四肢者針刺的目的。但仍然存在著以下幾點(diǎn)不足：①針刺部位單一，將大鼠全身覆蓋后，已經(jīng)不能滿足其余部位的針刺；②存在著一個(gè)疑問，既然已經(jīng)能夠通過皮筋將大鼠固定在兔臺(tái)上，為何還需要使用襪子套于大鼠身上，豈不是多此一舉？③使用橡皮筋固定大鼠，大鼠必定會(huì)掙扎，在掙扎的同時(shí)必然會(huì)使操作者加大橡皮筋對(duì)大鼠四肢的固定力度，這樣往往會(huì)出現(xiàn)由于四肢束縛過度，導(dǎo)致四肢缺血水腫，從而影響實(shí)驗(yàn)進(jìn)程和效果。

1.4 束口袋束縛固定

曹朝霞[4]等將廢棄的布料裁成大小適宜的長方形，制作成兩邊開口的束口袋，將一側(cè)縫上布條束口。利用大鼠喜鉆洞的特性，使大鼠穿過束口袋，當(dāng)束口一頭露出大鼠頭部時(shí)，及時(shí)束口。將大鼠四肢相對(duì)固定地束縛在口袋中，此時(shí)便可對(duì)大鼠的頭部進(jìn)行針刺。

評(píng)析：此方法簡單易學(xué)，是諸多固定方式中最簡易的一種。大鼠之所以能夠從固定器中掙脫，四肢為主要發(fā)力點(diǎn)，而此方法則很好地限制了四肢發(fā)力。但筆者在實(shí)踐過程中發(fā)現(xiàn)，其實(shí)該方法并不能完全固定大鼠于一處，且大鼠為了掙脫束口袋的束縛，會(huì)拼命縮頭或向前，此時(shí)就會(huì)出現(xiàn)銀針脫落或彎針的情況。

2 固定方法的創(chuàng)新

筆者的課題實(shí)驗(yàn)要求對(duì)百會(huì)、風(fēng)池、風(fēng)府施電針30min/天。由于大鼠頭部相較于四肢及軀體本就是一處極難固定的部位，故在實(shí)驗(yàn)過程中，筆者學(xué)習(xí)了諸多針刺固定方法，其中包括文獻(xiàn)中提及或未提及的方法。在失敗多次后，摸索出一個(gè)符合自己實(shí)驗(yàn)需求的大鼠針刺固定方法，現(xiàn)在分享于下：

成都中醫(yī)藥大學(xué)針灸專業(yè)同學(xué)為筆者提供了一個(gè)較好的固定方式，即運(yùn)用魔術(shù)貼的方式，十字交叉分別固定大鼠的前后肢體于一塊15-20cm長的木條上，此時(shí)的大鼠呈仰臥位，可以很好的針刺大鼠的腹部及四肢穴位。然而，由于筆者的針刺需求在大鼠頭部，用同樣的方式無法將大鼠俯臥位固定，模仿失敗。后筆者綜合了針灸專業(yè)同學(xué)提供的方式和曹朝霞的方式，并在此基礎(chǔ)上創(chuàng)新針刺后的頭部固定，制作出一款針對(duì)針刺大鼠頭部的固定裝置。

材料：針線、塑料布（15×15cm×1張）、麻繩（20cm×2根）、魔術(shù)貼（10cm×2對(duì)）、木條（15cm×1條）、遮光暗色布1片。如圖1。

固定器可分為A、B兩部分。

將兩片勾面魔術(shù)貼分別貼于木條兩邊部，兩片毛面魔術(shù)貼分前后橫貼于木條上，固定器A制作完成。

將廢棄的塑料布剪成長15-20cm，寬15cm的長方形，結(jié)合麻繩，用針線將塑料布縫制成一個(gè)兩邊開口的束口袋。固定器B制作完成。

固定過程：依據(jù)大鼠喜鉆洞的特性，讓大鼠自主從束口袋的一頭鉆到另外一頭，先將其頭露出，束口。然后在將尾部束口，這樣可以使大鼠的四肢套牢在束口袋中，實(shí)現(xiàn)四肢固定，防治大鼠掙脫。之后再將束口好的大鼠放置于木條上（固定器A），實(shí)現(xiàn)大鼠身體的固定，避免了傳統(tǒng)方式中因束縛力度過大而擠壓心肺。此時(shí)便可以對(duì)大鼠頭部進(jìn)行針刺。最后用一塊遮光暗色布遮住大鼠眼睛，使大鼠情緒穩(wěn)定，更加安靜。如圖2-3。若大鼠頭部掙扎劇烈，可在頭的兩邊用魔術(shù)貼粘合兩塊泡沫板，避免頭部活動(dòng)過于頻繁。

此固定方法是筆者在學(xué)習(xí)了諸多文獻(xiàn)后筆者思考實(shí)踐所得，具有以下優(yōu)點(diǎn)：①固定材料方便易得，操作方式簡單易懂，操作人員一名即可安全快速地完成針刺，經(jīng)實(shí)踐證明，一人固定加針刺總時(shí)長約為10min，極大地提高了實(shí)驗(yàn)效率；②組合而成的固定器能夠滿足不同體型的大鼠的固定，具有很大的普及性；③經(jīng)實(shí)驗(yàn)證明，針刺中脫針彎針率低，約為0.09%（筆者實(shí)驗(yàn)針刺用52只大鼠，在針刺過程中因大鼠掙扎而出現(xiàn)脫針者5只，出現(xiàn)彎針者0只）。但筆者明白，此方法存在著很多的不足，如針刺部位有限，只能滿足頭部穴位的針刺；準(zhǔn)備材料雖簡單易見，但種類相對(duì)較多，較為繁復(fù)等。

3 討論

由于研究人員各自實(shí)驗(yàn)需求的個(gè)性化，針刺部位的不同，目前針刺固定大鼠方法還處于一個(gè)百花齊放的狀態(tài)下。以上所陳述的無論是他人的固定方式或筆者自己探索的方式，都存在著很大的局限性。然而，他山之石，可以攻玉。筆者將在科學(xué)研究中繼續(xù)探索更為方便可行的固定方式，從而更為完整全面地探求生命疾病的本質(zhì)。

圖1

圖2

圖3