景燕 艾山江·玉蘇甫江 陸明佳

癲癇(epilepsy)屬于神經(jīng)系統(tǒng)疾病，是由多種病因引起的慢性腦功能失調(diào)綜合疾病，表現(xiàn)特征為腦神經(jīng)元異常放電導(dǎo)致反復(fù)、發(fā)作性和短暫性的中樞神經(jīng)系統(tǒng)功能失常，在各年齡段、不同地域及種族人群中均有發(fā)病[1]。癲癇發(fā)病率與年齡有關(guān)，據(jù)報道，發(fā)病率最高的時期是嬰兒時期，隨著人口老齡化進程的加快，成人尤其老年人癲癇疾病的發(fā)病率開始逐漸增高，嚴(yán)重影響患者的生存質(zhì)量[2]。研究表明免疫功能紊亂以及炎性反應(yīng)與癲癇疾病發(fā)病、發(fā)展有關(guān)[3]。B細(xì)胞活化因子(B-cell activating factor of TNF family，BAFF)、干擾素-γ(interferon-γ，IFN-γ)、白介素-10(interleukin-10，IL-10)都是與免疫功能有關(guān)的炎性因子。本研究通過檢測癲癇患者血清中BAFF、IFN-γ及IL-10的表達情況，探討癲癇患者血清中BAFF與IFN-γ、IL-10表達的相關(guān)性。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選取2017年7月至2018年10月在我院就診的74例癲癇患者為觀察組，其中男42例，女32例；年齡18～72歲，平均年齡(41.02±15.30)歲；病程0.5～5年，平均病程(2.20±1.61)年。選取同期在我院體檢中心參與體檢的健康者45例為對照組，其中男25例，女20例；年齡18～70歲，平均年齡(40.86±15.52)歲。根據(jù)癲癇患者發(fā)作頻率及發(fā)作平均持續(xù)時間將癲癇患者分為癲癇頻發(fā)19例，持續(xù)狀態(tài)24例；非癲癇頻發(fā)或持續(xù)狀態(tài)31例。根據(jù)2007年中華醫(yī)學(xué)會制定的《臨床診療指南·癲癇病分冊》[1]對癲癇患者進行分類，全面性癲癇21例，局灶性癲癇28例，癥狀性癲癇25例。2組患者性別、年齡等一般資料比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)，具有可比性。本研究經(jīng)醫(yī)院倫理委員會批準(zhǔn)。

1.2 納入與排除標(biāo)準(zhǔn)

1.2.1 納入標(biāo)準(zhǔn)：①符合國際抗癲癇聯(lián)盟對于癲癇疾病的診斷標(biāo)準(zhǔn)[4]；②經(jīng)臨床特征、病史、腦電圖等檢查確診；③患者家人均知情，并經(jīng)患者簽訂知情同意書。

1.2.2 排除標(biāo)準(zhǔn)：①顱腦損傷、腦梗死、腦出血、中樞神經(jīng)系統(tǒng)異常等引起的繼發(fā)性癲癇；②感染性疾病患者；③惡性腫瘤患者；④資料不全者。

1.3 主要試劑與儀器 一次性自動采血器購自武漢致遠醫(yī)療科技公司，BAFF酶聯(lián)免疫試劑購自上海鈺博生物科技公司，IFN-γ酶聯(lián)免疫試劑盒購自賽默飛世爾科技公司，IL-10酶聯(lián)免疫試劑購自賽默飛世爾科技公司，多功能酶標(biāo)儀購自美國Bio-Rad公司。

1.4 方法

1.4.1 樣本采集與保存:觀察組患者于癲癇發(fā)作后12 h內(nèi)采集空腹時靜脈血5 ml于生化管中，對照組于體檢當(dāng)天清晨空腹時采集靜脈血5 ml，均靜置30 min，在4℃離心機(3 000 r/min)上離心10 min后取上清，置于-20℃冰箱保存待測。

1.4.2 受試者血清BAFF、IFN-γ、IL-10水平測定:采用酶聯(lián)免疫吸附法(enzyme-linked immunosorbent assay，ELISA)檢測血清BAFF、IFN-γ、IL-10表達水平，其中血清BAFF水平測定使用BAFF酶聯(lián)免疫試劑盒，血清IFN-γ水平檢測采用IFN-γ ELISA試劑盒，血清IL-10水平測定采用IL-10 ELISA試劑盒，操作嚴(yán)格按照試劑盒說明書進行。為減小誤差，待測樣品均重復(fù)測定3次。

2 結(jié)果

2.1 2組患者一般資料情況 2組患者年齡、性別比、體重指數(shù)、糖尿病、高血壓、高血脂等一般資料比較，差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)。見表1。

表1 2組患者一般資料情況

2.2 2組患者血清IFN-γ、IL-10及BAFF水平比較 觀察組血清IFN-γ、IL-10及BAFF表達水平顯著高于對照組，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。見表2。

組別BAFF(ng/ml)IFN-γ(pg/ml)IL-10(pg/ml)觀察組(n=74)9.05±2.2638.45±8.0445.36±11.65對照組(n=45)3.96±0.9815.58±4.3722.74±5.30t值14.29517.55112.261P值<0.001<0.001<0.001

2.3 不同病情癲癇患者血清BAFF、IFN-γ、IL-10表達水平比較 癲癇頻發(fā)、處于持續(xù)狀態(tài)患者血清BAFF、IFN-γ、IL-10表達水平顯著高于非癲癇頻發(fā)或持續(xù)狀態(tài)患者(P<0.05)；癲癇頻發(fā)、處于持續(xù)狀態(tài)患者血清BAFF、IFN-γ、IL-10表達水平差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)。見表3。

類別BAFF(ng/ml)IFN-γ(pg/ml)IL-10(pg/ml)癲癇頻發(fā)(n=19)11.24±3.10?39.75±7.15?48.34±9.84?持續(xù)狀態(tài)(n=24)10.36±3.26?40.28±8.00?46.85±9.35?非癲癇頻發(fā)或持續(xù)狀態(tài)(n=31)7.48±2.0335.42±6.7242.06±7.47 F值13.1683.6803.651 P值<0.0010.0300.031

注：與非癲癇頻發(fā)或持續(xù)狀態(tài)比較，*P<0.05

2.4 不同類型癲癇患者血清IFN-γ、IL-10及BAFF水平比較 不同類型癲癇患者血清IFN-γ、IL-10及BAFF表達水平差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)。見表4。

組別BAFF(ng/ml)IFN-γ(pg/ml)IL-10(pg/ml)全面性癲癇(n=21)8.64±2.7239.88±9.4342.81±9.58局灶性癲癇(n=28)9.35±2.0638.71±6.2844.93±8.76癥狀性癲癇(n=25)9.06±2.4537.01±7.7147.96±10.63F值0.5280.8041.666P值0.5920.4520.196

2.5 癲癇患者血清BAFF水平與血清IFN-γ、IL-10水平的相關(guān)性 癲癇患者血清BAFF水平均與血清IFN-γ、IL-10水平呈正相關(guān)(r=0.631，P<0.05；r=0.535，P<0.05)。見圖1、2。

2.6 癲癇患者血清IFN-γ與IL-10水平的相關(guān)性 癲癇患者血清IFN-γ和IL-10表達水平呈正相關(guān)(r=0.529，P<0.05)。見圖3。

圖1 癲癇患者血清BAFF與IFN-γ的相關(guān)性分析圖2 癲癇患者血清BAFF與IL-10的相關(guān)性分析圖3 癲癇患者血清IFN-γ和IL-10的相關(guān)性分析

3 討論

癲癇是一種常見的腦部疾患，屬于神經(jīng)系統(tǒng)疾病，患者主要臨床表現(xiàn)為意識喪失，肌張力強直，強直陣攣發(fā)作，復(fù)雜視幻覺及不同程度的運動、感覺、神經(jīng)、精神等方面障礙，具有突發(fā)性、一時性和反復(fù)性[5]。資料顯示，全球癲癇患者約有5 000萬，我國癲癇患者約占有600萬，發(fā)病率約為4.6%。癲癇病因復(fù)雜多樣，一般認(rèn)為遺傳代謝性疾病、腦部結(jié)構(gòu)性病變、顱腦外傷、腦腫瘤、中樞神經(jīng)系統(tǒng)感染等因素是癲癇發(fā)病的主要原因，但具體機制不明確[6]，因此尋找新的生物標(biāo)志物來反映癲癇的疾病進程，對治療癲癇患者具有重要意義。癲癇發(fā)作對腦功能的傷害嚴(yán)重影響患者的身體健康。研究表明免疫功能紊亂是癲癇發(fā)病的病因，且其發(fā)病過程與炎性反應(yīng)有關(guān)，BAFF、IFN-γ、IL-10是與免疫功能有關(guān)的炎性因子，其代謝異常能夠使神經(jīng)系統(tǒng)發(fā)生紊亂，可能參與癲癇的疾病進程[7]。

BAFF是腫瘤壞死因子超家族(TNF家族)成員之一，可由T細(xì)胞、樹突狀細(xì)胞及單核細(xì)胞產(chǎn)生，是對B細(xì)胞成熟、分化至關(guān)重要的關(guān)鍵細(xì)胞因子，與自身免疫系統(tǒng)功能密切相關(guān)。BAFF可參與調(diào)節(jié)T細(xì)胞的多種免疫反應(yīng)，在小鼠在自身免疫疾病模型中BAFF可通過誘導(dǎo)B細(xì)胞分泌OPN調(diào)節(jié)T細(xì)胞存活[8]。張亞敏等[9]研究表明BAFF是自身免疫疾病—系統(tǒng)性紅斑狼瘡的致病因素，能夠通過促進抑制性細(xì)胞因子IL-35表達，發(fā)揮負(fù)向免疫調(diào)節(jié)效應(yīng)。本研究顯示癲癇患者血清中BAFF表達水平顯著高于對照組，提示BAFF水平上調(diào)可能參與癲癇發(fā)生。

IFN-γ由活化T細(xì)胞和自然殺傷細(xì)胞產(chǎn)生，具有免疫調(diào)節(jié)、抗腫瘤、及促進I型輔助T細(xì)胞分化作用。Gao等[10]研究表明癲癇患者血漿中IFN-γ的水平在癲癇發(fā)作后和發(fā)作間期顯著高于正常人，且血漿中IFN-γ水平與國家醫(yī)院癲癇發(fā)作嚴(yán)重程度評分(NHS3)評分和癲癇發(fā)作頻率呈正相關(guān)，說明IFN-γ可預(yù)測癲癇發(fā)作的嚴(yán)重程度。Mazdeh等[11]研究表明癲癇患者IFN-γmRNA表達水平比正常人IFN-γ表達水平高，且與IL-2，IL-4等其他促炎細(xì)胞因子和抗炎細(xì)胞因子水平有關(guān)，說明IFN-γ的異常表達可能與癲癇的發(fā)病機制有關(guān)。本研究結(jié)果顯示癲癇患者血清中IFN-γ表達水平高于對照組，表明癲癇患者體內(nèi)存在較強的炎性反應(yīng)，提示炎性反應(yīng)可能與癲癇發(fā)病有關(guān)。

IL-10由活化B細(xì)胞和巨噬細(xì)胞等產(chǎn)生，是一種抗炎性因子，參與免疫細(xì)胞、炎癥細(xì)胞、腫瘤細(xì)胞的生物調(diào)節(jié)，在自身免疫性疾病、感染性疾病及腫瘤等多種疾病中有重要作用。何小群等[12]研究表明PTZ模型癲癇大鼠海馬組織中IL-10mRNA的表達水平高于對照組，用鐵皮石斛多糖處理癲癇大鼠后可通過下調(diào)IL-10表達，降低大鼠海馬組織炎性反應(yīng)，減輕癲癇發(fā)作。本研究結(jié)果顯示癲癇患者血清中IL-10表達水平顯著高于對照組，提示IL-10水平上調(diào)可能與癲癇免疫機制相關(guān)的炎性反應(yīng)有關(guān)，參與癲癇疾病的發(fā)生。

楊潔等[13]研究表明兒童癲癇患者IL-10高表達的T淋巴細(xì)胞數(shù)目高于健康對照兒童，且T淋巴細(xì)胞中IFN-γ表達水平上調(diào)，說明癲癇患者T淋巴細(xì)胞活化能夠產(chǎn)生IFN-γ等炎細(xì)胞因子。Gui等[14]研究表明IFN-γ等炎性因子能夠增強BAFF刺激的細(xì)胞存活。調(diào)節(jié)IFN-γ等炎性因子水平，可能是預(yù)防BAFF誘導(dǎo)的惡性腫瘤的新方法。den Hartog等[15]研究表明外周和粘膜組織中BAFF能夠增強TLR7/8和TLR9B刺激成熟B細(xì)胞產(chǎn)生IL-10的能力。研究表示，癲癇發(fā)作頻率及發(fā)作持續(xù)時間對病情的評估有重要意義，癲癇發(fā)作越頻繁、發(fā)作平均持續(xù)時間越久，說明患者病情越嚴(yán)重[16]。本研究結(jié)果顯示癲癇頻發(fā)、癲癇處于持續(xù)狀態(tài)患者血清BAFF、IFN-γ、IL-10表達水平均顯著高于非癲癇頻發(fā)或持續(xù)狀態(tài)患者，提示癲癇患者血清中BAFF、IFN-γ、IL-10表達水平可能與癲癇疾病病情嚴(yán)重程度有關(guān)，患者血清中BAFF、IFN-γ、IL-10表達水平越高，癲癇病情越嚴(yán)重。進一步分析顯示癲癇患者血清BAFF表達水平與IFN-γ、IL-10水平呈正相關(guān)，提示BAFF可能通過調(diào)節(jié)IFN-γ、IL-10等炎性相關(guān)因子表達，影響機體炎性反應(yīng)，參與癲癇的發(fā)病過程。

綜上所述，BAFF、IFN-γ、IL-10在癲癇患者血清中明顯上調(diào)，BAFF水平與IFN-γ、IL-10水平正相關(guān)，提示BAFF可能通過調(diào)節(jié)IFN-γ、IL-10等炎性反應(yīng)因子表達，參與癲癇疾病發(fā)生發(fā)展。然而，本研究僅初步探究癲癇患者血清中BAFF表達與IFN-γ、IL-10水平的相關(guān)性，具體生物學(xué)調(diào)節(jié)機制仍未明確，需進一步深入研究。另外，本研究樣本數(shù)量較少，下一步準(zhǔn)備擴大樣本容量繼續(xù)進行深入研究，以期為癲癇患者的臨床治療提供一定參考依據(jù)。