趙俊雄，華 深，范衛(wèi)星，王衛(wèi)平，唐 偉，張 晨,

1. 浙江省金華市第二醫(yī)院，金華321016；2. 浙江省溫州市康寧醫(yī)院，溫州 325000；3. 上海交通大學(xué)醫(yī)學(xué)院附屬精神衛(wèi)生中心，上海 200030

抑郁癥是一種具有高患病率、高致殘率、高復(fù)發(fā)率的重性精神疾病，每年因抑郁癥自殺死亡者多達(dá)百萬。根據(jù)一項(xiàng)最新的中國(guó)流行病學(xué)調(diào)查研究顯示抑郁癥終身患病率高達(dá)6.9%[1]，給患者家庭和社會(huì)帶來沉重的疾病負(fù)擔(dān)。抑郁癥作為一種遺傳和環(huán)境交互作用所致的精神疾病，其遺傳度為37%～43%[2]。雖然該病遺傳機(jī)制尚未完全明晰，但是最近的全基因組關(guān)聯(lián)分析研究[3]指出位于10號(hào)染色體上的沉默信息調(diào)控因子2樣蛋白相關(guān)酶基因（silent mating type information regulation 2 homolog 1，SIRT1）可能是抑郁癥發(fā)生的重要致病因子之一。我們?cè)谇捌谘芯縖4-5]中通過遺傳關(guān)聯(lián)分析發(fā)現(xiàn)SIRT1基因無論是遺傳標(biāo)志物還是mRNA表達(dá)變化均與抑郁癥存在顯著關(guān)聯(lián)，提示該基因可能參與了抑郁癥的發(fā)生過程。我們通過薈萃分析[4]發(fā)現(xiàn)SIRT1基因啟動(dòng)子區(qū)域rs3758391位點(diǎn)是抑郁癥的潛在致病因子，該位點(diǎn)對(duì)SIRT1基因mRNA表達(dá)具有調(diào)控作用[6]。抑郁癥的臨床表現(xiàn)主要為持續(xù)而明顯的情緒低落，并伴有思維遲緩、意志活動(dòng)減退、軀體化癥狀等。本研究旨在通過探索SIRT1基因rs3758391位點(diǎn)與抑郁癥候群之間的關(guān)系，以進(jìn)一步明確SIRT1基因在抑郁癥發(fā)生過程中的作用。

1 對(duì)象與方法

1.1 對(duì)象

納入2016年1月—2018年12月在浙江省金華市第二醫(yī)院和溫州市康寧醫(yī)院住院部及門診治療的抑郁癥患者為觀察組，共323例。納入標(biāo)準(zhǔn)：①《美國(guó)精神疾病分類與診斷標(biāo)準(zhǔn)（第五版）》（Diagnostic and Statistical Manual of Mental Disorders，DSM-5）中抑郁癥的診斷標(biāo)準(zhǔn)。②入組前2周內(nèi)未使用過抗抑郁藥物或電休克等治療。③漢密爾頓抑郁量表（Hamilton Depression Scale，HAMD）評(píng)分≥17分。④年齡為18～45歲。⑤能夠理解和遵守研究要求。排除標(biāo)準(zhǔn)：①腦器質(zhì)性精神障礙。②精神活性物質(zhì)或非成癮物質(zhì)所致精神障礙。③嚴(yán)重的軀體疾病或神經(jīng)系統(tǒng)疾病，近期外傷或近1周內(nèi)感染或發(fā)熱者。④溝通困難者或不合作者。對(duì)照組347名，為同期在金華地區(qū)招募的健康志愿者，無嚴(yán)重軀體疾病史、精神疾病史和精神疾病家族史。本研究經(jīng)浙江省金華市第二醫(yī)院倫理委員會(huì)審核批準(zhǔn)，所有入組對(duì)象均簽署知情同意書。

1.2 方法

1.2.1 臨床評(píng)定 采用自制一般情況問卷收集所有入組對(duì)象的人口學(xué)資料。使用HAMD評(píng)定抑郁癥，包括情緒、焦慮、軀體化、睡眠、認(rèn)知等5個(gè)因子分及總分。0～4級(jí)評(píng)分，分值越高，抑郁嚴(yán)重程度越重。

1.2.2 DNA提取和基因分型 采集入組患者靜脈血2 mL，乙二胺四乙酸抗凝備用，采用離心柱型基因組DNA試劑盒（DP304型，北京天根生物有限公司）提取外周血白細(xì)胞全基因組DNA。采用TaqMan探針SNP基因分型技術(shù)對(duì)rs3758391位點(diǎn)進(jìn)行分型（引物和探針定制于Applied Biosystems，美國(guó)應(yīng)用生物系統(tǒng)公司），PCR反應(yīng)試劑TaqMan Universal PCR Master Mix（Applied Biosystems，美國(guó)應(yīng)用生物系統(tǒng)公司）。實(shí)驗(yàn)流程參照我們之前的工作[4]。

1.2.3 表達(dá)數(shù)量性狀（eQTL）分析 采用BRAINEAS數(shù)據(jù)庫(kù)（http://caprica.genetics.kcl.ac.uk/）分析rs3758391位點(diǎn)對(duì)腦內(nèi)SIRT1基因表達(dá)的影響。

1.2.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 采用SPSS17.0軟件對(duì)實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。定量資料用x—±s表示，組間比較采用獨(dú)立樣本t檢驗(yàn)或方差分析。定性資料用例數(shù)、百分比表示，組間比較采用χ2或確切概率法。多因素方差分析用于比較rs3758391位點(diǎn)3種不同基因型間癥狀嚴(yán)重程度的差異。P＜0.05表示有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，雙側(cè)檢驗(yàn)。

2 結(jié)果

2.1 2組SIRT1基因rs3758391位點(diǎn)多態(tài)性比較

觀察組與對(duì)照組SIRT1基因rs3758391位點(diǎn)基因型的觀察值和期望值Hardy-Weinberg平衡吻合度良好（P＞0.05），表明本研究收集到的樣本來自大的群體，個(gè)體間隨機(jī)配對(duì)，不存在明顯自然選擇、遷移等因素對(duì)遺傳平衡的影響，具有群體代表性。SIRT1基因rs3758391位點(diǎn)CC、CT、TT基因型頻率在觀察組分別為4.0%、29.4%、66.6%，在對(duì)照組分別為3.2%、22.2%、74.6%，2組比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（χ2=5.28，P=0.07）（表1）。C、T等位基因頻率在觀察組分別為18.7%、81.3%，在對(duì)照組分別為14.3%、85.7%，2組比較差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（χ2=4.86，P=0.03）（表1）。在顯性模型下，比值比設(shè)1.5，Quanto軟件顯示本研究統(tǒng)計(jì)效能為74%。

表1 觀察組與對(duì)照組SIRT1基因rs3758391位點(diǎn)基因型和等位基因分布頻率比較（n，%）Tab 1 Comparison of genotypic and allelic distribution of SIRT1 rs3758391 polymorphism between observation and control groups (n, %)

2.2 觀察組SIRT1基因rs3758391位點(diǎn)不同基因型患者的抑郁癥狀嚴(yán)重程度比較

本研究所有量表評(píng)定由資深精神科臨床醫(yī)師完成，采用組內(nèi)相關(guān)系數(shù)（intra-class coefficient correlation，ICC）計(jì)算評(píng)定者間一致性，結(jié)果顯示評(píng)定者間存在較高的評(píng)分一致性（ICC≥0.8）。為了排除性別、年齡和病程對(duì)抑郁癥狀嚴(yán)重程度的影響，在進(jìn)行rs3758391位點(diǎn)多態(tài)性與癥狀嚴(yán)重程度的關(guān)聯(lián)分析時(shí)，將這些因素作為協(xié)變量納入多因素方差分析。攜帶不同基因型患者情緒、抑郁相關(guān)因素和HAMD總分的差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），其中攜帶CC基因型患者HAMD評(píng)分相比攜帶CT和TT基因型患者更高（表2）。

表2 觀察組rs3758391位點(diǎn)不同基因型的HAMD評(píng)分比較（N=323）Tab 2 Comparison of HAMD scores among different genotypes of rs3758391 polymorphism in observation group

2.3 rs3758391位點(diǎn)與腦內(nèi)SIRT1基因表達(dá)的關(guān)系

eQTL分析結(jié)果顯示rs3758391位點(diǎn)在枕葉皮質(zhì)（occipital cortex，OCTX）內(nèi)與SIRT1基因表達(dá)有顯著性相關(guān)（P=0.003）（圖 1）。與攜帶 rs1344706位點(diǎn) CT和CT基因型患者相比，攜帶CC基因型患者枕葉皮質(zhì)內(nèi)SIRT1基因表達(dá)更低。

圖1 rs3758391位點(diǎn)與腦內(nèi)SIRT1基因表達(dá)的eQTL分析結(jié)果Fig 1 eQTL analysis of rs3758391 polymorphism with SIRT1 mRNA expression in brain

3 討論

由中國(guó)和英國(guó)科學(xué)家組成的CONVERGE（China Oxford and VCU Experimental Research on Genetic Epidemiology）聯(lián)盟通過GWAS研究了大樣本中國(guó)漢族抑郁癥患者，明確了SIRT1可能是抑郁癥的風(fēng)險(xiǎn)基因[3]。我們?cè)谥暗难芯恳矆?bào)道了SIRT1基因rs3758391位點(diǎn)可能在抑郁癥的發(fā)生過程中起重要作用[4]。本研究通過獨(dú)立樣本再次驗(yàn)證了該位點(diǎn)與抑郁癥存在顯著性關(guān)聯(lián)，我們進(jìn)一步通過數(shù)量性狀分析發(fā)現(xiàn)SIRT1基因rs3758391位點(diǎn)與抑郁癥患者的情緒癥狀和認(rèn)知障礙的嚴(yán)重程度有關(guān)。

SIRT1是sirtuin蛋白家族的一員，已被證明可介導(dǎo)多種細(xì)胞事件，包括炎癥、細(xì)胞凋亡、自噬和細(xì)胞生長(zhǎng)[7-8]。有證據(jù)表明SIRT1通過調(diào)節(jié)白細(xì)胞介素-6（IL-6）的表達(dá)在調(diào)節(jié)炎癥反應(yīng)中發(fā)揮重要作用[9]，文獻(xiàn)已證明抑制SIRT1可促進(jìn)IL-6分泌[10]。有趣的是，我們最近觀察到抑郁癥患者IL-6mRNA水平顯著升高[11]。因此，我們的研究結(jié)果提示SIRT1基因參與抑郁癥發(fā)生機(jī)制可能與其在調(diào)節(jié)炎癥反應(yīng)中的作用有關(guān)。

既往研究顯示rs3758391在功能上影響了SIRT1基因的mRNA表達(dá)[6]。我們通過eQTL分析研究發(fā)現(xiàn)rs3758391與枕葉皮質(zhì)中的SIRT1表達(dá)相關(guān)，而且攜帶CC基因型的個(gè)體枕葉皮質(zhì)中的SIRT1基因mRNA表達(dá)水平顯著低于攜帶TT基因型的個(gè)體。因此，以上結(jié)果提示rs3758391可能是SIRT1基因的功能位點(diǎn)，影響了特定腦區(qū)內(nèi)SIRT1基因的表達(dá)。來自分子和神經(jīng)影像學(xué)觀點(diǎn)的新證據(jù)已經(jīng)明確枕骨皮質(zhì)區(qū)域參與了抑郁癥的發(fā)生過程[12-13]。我們之前的研究也表明，補(bǔ)體因子H（complement factor H，CFH）可能會(huì)影響枕葉皮質(zhì)的紊亂并增加抑郁癥的風(fēng)險(xiǎn)[14]。眾所周知，CFH是先天免疫系統(tǒng)的一個(gè)組成部分，通過調(diào)節(jié)補(bǔ)體來介導(dǎo)炎癥[15]。因此，我們推測(cè)枕葉皮層中的炎癥變化可能是抑郁癥的發(fā)病機(jī)制之一，尚需進(jìn)一步的研究加以論證。

綜上所述，本研究結(jié)果顯示SIRT1基因rs3758391位點(diǎn)可能是中國(guó)漢族抑郁癥的風(fēng)險(xiǎn)因子，且與抑郁癥患者的疾病嚴(yán)重程度有關(guān)，特別是情緒癥狀和認(rèn)知障礙。然而，本研究為橫斷面研究且樣本量較小，因此應(yīng)謹(jǐn)慎理解本研究結(jié)果，未來需繼續(xù)擴(kuò)大樣本量，開展縱向研究，以驗(yàn)證本研究結(jié)果并進(jìn)一步揭示SIRT1基因在抑郁癥發(fā)生過程中的病理生理機(jī)制。