陳 婷 (福建醫(yī)科大學(xué)附屬泉州市第一醫(yī)院病理科，福建 泉州 362000)

胃癌是源于胃黏膜上皮的惡性腫瘤，在我國(guó)各種惡性腫瘤中發(fā)病率居首位，好發(fā)于50歲以上人群中，且男性發(fā)病率略高于女性[1]。胃癌病因復(fù)雜，普遍認(rèn)為與飲食結(jié)構(gòu)改變、工作壓力增加及幽門螺桿菌感染等有關(guān)，且半數(shù)患者發(fā)生在胃竇部、胃大彎等[2]。胃癌患者發(fā)病早期臨床癥狀缺乏典型性，部分患者可伴有上腹不適、噯氣等，多數(shù)患者確診時(shí)已經(jīng)是中期、晚期，錯(cuò)過(guò)了最佳診療時(shí)機(jī)。ERCC1蛋白是一種高度保守的DNA核酸內(nèi)切酶，是核苷酸切除修復(fù)過(guò)程中的關(guān)鍵核心部件之一，但是在胃癌患者病理診斷中的應(yīng)用研究較少[3]。因此，本文采用隨機(jī)對(duì)照方法進(jìn)行研究，探討ERCC1蛋白在胃癌患者病理診斷中的應(yīng)用效果，現(xiàn)報(bào)告如下。

1 資料與方法

1.1一般資料：選擇2015年6月～2018年4月治療的胃癌患者60例作為對(duì)象，設(shè)為觀察組，術(shù)中取病灶組織與癌旁組織(距離病灶距離>5 mm)，男34例，女26例，年齡39～73歲，平均(56.81±4.69)歲；腫瘤大小1～9 cm，平均(4.51±0.74)cm；分化程度：高分化23例，中分化20例，低分化17例；腫瘤分期：Ⅰ～Ⅱ期35例，Ⅲ～Ⅳ期25例；淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移：是16例，否44例。選擇正常胃部組織34例，設(shè)為對(duì)照組，男19例，女15例，年齡40～74歲，平均(57.22±4.84)歲。兩組臨床資料比較，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)，具有可比性。

1.2方法：采用免疫組織化學(xué)法測(cè)定不同組織中ERCC1蛋白陽(yáng)性率。①檢測(cè)方法：分別取觀察組病灶組織、癌旁組織及對(duì)照組組織，加入蒸餾水與濃度為30.0%H2O2，常溫下加入內(nèi)源性酶并進(jìn)行10 min滅火，PBS連續(xù)進(jìn)行3次洗滌。將最終獲得的切片放置在0.01M枸櫞酸鹽緩沖液中，加入生理鹽水控制溶液pH最終為6。電爐加熱直到煮沸，5 min間隔后再次煮沸，常溫下冷卻。采用PBS2次洗滌，每次5 min，最后加入5%BSA封閉液并加入加入兔抗人ERCC1蛋白抗體(1∶100)，兔抗人ERCC1蛋白一抗，一滴。滴加完畢后進(jìn)行3次PBS洗滌；在1 ml底物中加入兔抗人ERCC1蛋白二抗一滴，混合后常溫下顯色，蘇木素復(fù)染后封片，倒置顯微鏡下觀察細(xì)胞數(shù)量，每份標(biāo)本測(cè)定三次，取平均值[4]；②判斷方法：參考奧爾雷德評(píng)分標(biāo)準(zhǔn)分別從細(xì)胞的陽(yáng)性數(shù)量(陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)≤25.0%0分，26%～50.0%1分，51%～75%2分，>75%3分)、染色強(qiáng)度(不著色0分，黃色1分，棕黃色2分，黃褐色3分)完成免疫組化染色評(píng)分，總分16分，陽(yáng)性率越高。ERCC1蛋白在不同病理中的表達(dá)：統(tǒng)計(jì)并記錄觀察組年齡、性別、腫瘤直徑、腫瘤分期、分化程度、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移等資料，分析ERCC1蛋白在不同胃癌患者病理中的表達(dá)[5]。

2 結(jié)果

2.1兩組ERCC1蛋白陽(yáng)性率比較:觀察組癌旁組織與對(duì)照組ERCC1蛋白陽(yáng)性率差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)；觀察組病灶組織ERCC1蛋白陽(yáng)性率，均高于癌旁組織及對(duì)照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。見表1及圖1。

2.2ERCC1蛋白在不同病理中的表達(dá)：觀察組胃癌組織中ERCC1蛋白陽(yáng)性率與性別、年齡差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)；觀察組胃癌組織中ERCC1蛋白陽(yáng)性率與腫瘤大小、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、腫瘤分期及分化程度，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，見表2。

表1 兩組ERCC1蛋白陽(yáng)性率比較[例(%)]

注：與對(duì)照組比較，①P<0.05；與癌旁組織比較，②P<0.05

注：A圖為胃癌組織免疫組化結(jié)果；B圖為癌旁組織免疫組化結(jié)果；C圖為對(duì)照組免疫組化結(jié)果。圖1 兩組不同病灶組織中ERCC1蛋白陽(yáng)性率(×200)

3 討論

胃癌是全球范圍常見的惡性腫瘤之一，是引起腫瘤相關(guān)死亡的第二大原因。近年來(lái)，隨著醫(yī)療技術(shù)的不斷發(fā)展，胃癌的診斷、治療獲得了長(zhǎng)足的進(jìn)步，但是遠(yuǎn)期效果較差，多數(shù)患者確診時(shí)已經(jīng)是中期、晚期，錯(cuò)過(guò)最佳治療時(shí)機(jī)[6]。臨床研究表明：核苷酸切除修復(fù)(NER)途徑是修復(fù)DNA損傷的途徑之一，而切除修復(fù)較差互補(bǔ)基因1(ERCC1)則是該途徑重要分子之一。從大的角度來(lái)說(shuō)，ERCC1蛋白位于染色體19q13-2中，含有10個(gè)外顯子，該蛋白單獨(dú)存在時(shí)并不穩(wěn)定，能識(shí)別、切除損傷DNA鏈5'端作用。同時(shí)，ERCC1亦可參與雙鏈斷裂修復(fù)途徑修復(fù)鏈間交聯(lián)。國(guó)內(nèi)學(xué)者研究表明：ERCC1在修復(fù)損傷DNA、維持遺傳信息完整性中發(fā)揮了重要的作用。而在惡性腫瘤中ERCC1表達(dá)水平能反映腫瘤內(nèi)DNA損傷修復(fù)能力。本研究中，觀察組病灶組織ERCC1蛋白陽(yáng)性率，均高于癌旁組織及對(duì)照組(P<0.05)；觀察組胃癌組織中ERCC1蛋白陽(yáng)性率與腫瘤大小、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、腫瘤分期及分化程度具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，說(shuō)明ERCC1蛋白在胃癌組織中呈高表達(dá)，能參與疾病的發(fā)生、發(fā)展，加強(qiáng)ERCC1蛋白測(cè)定能為臨床病理診斷提供依據(jù)和參考。

表2 ERCC1蛋白在不同病理中的表達(dá)

綜上所述，ERCC1蛋白在胃癌患者種呈高表達(dá)，能反映患者疾病嚴(yán)重程度，能為臨床診療提供依據(jù)和參考。