馬衛(wèi)紅，楊志艷，趙福瓊，楊 茜，陳大虎，陳啟青，猶銀俊，歐德淵

(1.貴州省惠水縣動物疫病預(yù)防控制中心，貴州 惠水 550600； 2.黔南布依族苗族自治州動物疫病預(yù)防控制中心，貴州 都勻 558000； 3.貴州大學(xué)動物科學(xué)學(xué)院，貴州 貴陽 550025)

禽流感(Avian Influenza，AI)是由A 型流感病毒引起的1 種急性禽類傳染病[1]。 目前禽流感病毒根據(jù) HA 和 NA 抗原可劃分為 18 個 HA 亞型和11 個NA 亞型，其中高致病性禽流感以 H5、H7 亞型為主[2，3]。 高致病禽流感不僅可造成家禽大量死亡，也給人類帶來嚴(yán)重威脅[4]。 世界動物衛(wèi)生組織(OIE)將高致病禽流感列為必須報告的動物傳染病，我國將其列為一類動物疫病。 為了掌握惠水縣主要飼養(yǎng)家禽高致病禽流感的免疫情況，縣動物疫病預(yù)防控制中心于2017—2019 年對雞、鴨進(jìn)行免疫抗體檢測，為進(jìn)一步做好我縣高致病禽流感的防控工作提供參考。

1 材料與方法

1.1 禽血清樣品來源惠水縣家禽養(yǎng)殖主要以雞、鴨為主，鵝很少(暫未統(tǒng)計)，養(yǎng)殖形式為養(yǎng)殖場、合作社和散養(yǎng)戶。 2017 年9 月以前主要免疫H5 亞型禽流感滅活疫苗，之后用H5+H7 亞型禽流感滅活疫苗免疫。2017—2019 年以抽檢的方式隨機(jī)采集雞、鴨血液制備血清進(jìn)行H5、H7 免疫抗體檢測。 見表1、表2。

表1 雞血清樣品來源

表2 鴨血清樣品來源

1.2 主要試劑H5、H7 亞型禽流感病毒血凝抑制試驗(yàn)抗原，H5、H7 亞型禽流感病毒陽性血清和陰性血清，均購自哈爾濱維科生物有限公司。

1.3 檢測方法采集未免疫公雞血液，制備體積分?jǐn)?shù)為1%紅細(xì)胞懸液。

1.3.1 血凝試驗(yàn)(HA)在微量反應(yīng)板的1 ～16 孔均加入生理鹽水 25 μL，吸取抗原 25 μL 加入第1 孔，混勻，從第 1 孔吸取混液 25 μL 加入第 2 孔，混勻后吸取25 μL 加入第3 孔，如此進(jìn)行倍比稀釋至第 15 孔。 從第 15 孔吸取 25 μL 棄之，每孔均加入1%雞紅細(xì)胞懸液25 μL，在室溫(20～25 ℃)下靜置40 min 后觀察結(jié)果。

1.3.2 血凝抑制試驗(yàn)(HI)根據(jù)HA 結(jié)果，以完全血凝的抗原最高稀釋倍數(shù)作為終點(diǎn)，終點(diǎn)稀釋倍數(shù)除以4 即為含4 HAU 的抗原稀釋倍數(shù)，配制4 HAU的抗原。 在微量反應(yīng)板的1 ～11 孔加入生理鹽水 25 μL，第 12 孔加入生理鹽水 50 μL，吸取血清 25 μL 加入第 1 孔內(nèi)，充分混勻后吸 25 μL于第 2 孔，依次倍比稀釋至第 10 孔。 從第10 孔吸取 25 μL 棄去，1 ～ 11 孔均加入 4 HAU 抗原液25 μL，室溫靜置30 min，每孔加入1%雞紅細(xì)胞懸液25 μL 混勻，振蕩混勻，室溫(20 ～25 ℃)下靜置40 min 后觀察結(jié)果。 根據(jù) GB/T 18936—2003 高致病性禽流感診斷技術(shù)(HA 和HI 試驗(yàn))判斷，HI≥24為抗體陽性，免疫合格。

2 結(jié)果

2.1 2017—2019 年 H5、H7 亞型禽流感免疫抗體總體情況(1)H5 抗體：2017 年雞、鴨總體陽性率為68.35%，小于國家規(guī)定≥70%的要求，主要是鴨的抗體水平比較低，為不合格；2018、2019 年分別為85.08%、95.11%，抗體達(dá)到規(guī)定要求。 (2)H7 抗體：2017 年雞、鴨總體陽性率為 21.36%，不合格；2018、2019 年分別為 72.85%、88.20%，達(dá)到規(guī)定要求。 此外，H5、H7 抗體水平有逐年升高的趨勢。 見表3。

表3 2017—2019 年雞鴨H5、H7 亞型禽流感免疫抗體總體情況

2.2 2017—2019 年雞鴨 H5、H7 亞型禽流感免疫抗體分別情況(1)H5 抗體：雞抗體檢測均合格(分別為 70.90%、91.82%、92.75%)；鴨 2017 年抗體檢測不合格(61.43%)，2017、2018 年合格(分別為75.08%、97.56%)。 (2)H7 抗體：2017 年雞和鴨的抗體檢測均不合格(分別為29.33%、0.00%)，2017、2018 年均合格(雞分別為73.14%、93.40%，鴨分別為72.43%、82.78%)。 總體上雞的 H7 抗體水平高于鴨，H5 抗體水平高于 H7。 見圖1。

3 討論與小結(jié)

3.1 抗體檢測是判斷是否感染病毒或反映免疫情況的重要指標(biāo)，血凝抑制試驗(yàn)是監(jiān)測禽流感抗體的常用方法之一[5]。 從檢測結(jié)果看，惠水縣雞、鴨禽流感免疫抗體水平逐年升高，說明對家禽的免疫越來越重視，養(yǎng)殖者的疫病防控意識提高。 從2017 年9 月以后，我縣按動物疫病防控的要求對H5、H7 亞型禽流感進(jìn)行強(qiáng)制免疫。 從總體上看，H5 亞型的免疫情況要比H7 亞型好，原因是H5 亞型高致病性禽流感病毒對我國養(yǎng)禽業(yè)的危害較大，養(yǎng)殖者的重視程度高[4]。 而H7 亞型疫苗上市比較晚，免疫較為滯后。

3.2 對雞、鴨免疫抗體進(jìn)行比較發(fā)現(xiàn)雞的抗體水平要高于鴨。 分析原因可能是鴨對禽流感的抗性遠(yuǎn)大于雞[6]，不易發(fā)病，養(yǎng)殖者不重視對鴨禽流感的免疫，而雞的養(yǎng)殖規(guī)模比較大，養(yǎng)殖技術(shù)及條件比較成熟，養(yǎng)殖者重視程度高。 水禽被認(rèn)為是禽流感的自然貯存庫[7]。 近年來惠水縣養(yǎng)鴨規(guī)模不斷擴(kuò)大，對禽流感施行強(qiáng)制免疫，2019 年惠水縣雞、鴨的H5、H7 亞型抗體水平都比較高，均達(dá)到國家要求的免疫標(biāo)準(zhǔn)。

3.3 在免疫過程中由于疫苗類型、免疫對象、養(yǎng)殖條件等原因，造成免疫抗體差異較大。 免疫效果的持續(xù)監(jiān)測是當(dāng)前高致病性禽流感免疫防控工作中的重點(diǎn)[8]。 下一步動物防疫部門應(yīng)加大監(jiān)管力度，加強(qiáng)禽流感的強(qiáng)制免疫工作，通過培訓(xùn)宣傳，幫助養(yǎng)殖者樹立科學(xué)養(yǎng)殖觀，提高疫病防控意識，做到防患于未然。 免疫不合格者及時進(jìn)行補(bǔ)免，同時發(fā)揮村級防疫員的作用，及時保證疫苗及消毒物資的配備，及時指導(dǎo)養(yǎng)殖者做好消毒及免疫工作，保證養(yǎng)禽業(yè)的健康發(fā)展。