王鑫源 董誠(chéng)明 李曼 齊大明

摘要：為探明不同菌肥對(duì)地黃連作障礙的作用，設(shè)計(jì)不同菌肥、不同施用量對(duì)地黃產(chǎn)量以及浸出物、梓醇、毛蕊花糖苷、地黃苷A、地黃苷D和益母草苷含量的影響，并采用多指標(biāo)綜合加權(quán)評(píng)分法優(yōu)選最佳菌肥種類及施肥量。結(jié)果表明，處理NF-3（農(nóng)大肥業(yè)菌肥180 g/m2）提高連作地黃產(chǎn)量的效果最佳;處理JH-3（聚核辛士力180 g/m2）提高連作地黃品質(zhì)的效果最佳。說(shuō)明施用復(fù)合生物菌肥能有效提高連作地黃產(chǎn)量與品質(zhì)。

關(guān)鍵詞：菌肥;地黃;連作;產(chǎn)量;品質(zhì)

中圖分類號(hào)：S567.23+9.06?文獻(xiàn)標(biāo)志碼：A?文章編號(hào)：1002-1302（2020）21-0171-06

地黃為玄參科植物地黃（Rehmannia glutinosa Libosch.）的新鮮或干燥塊根[1]，屬大宗常用中藥材，在我國(guó)河南、山東、山西等地有大面積種植，以河南武陟、溫縣等地所產(chǎn)較佳[2-3]。 連作障礙是地黃種植過(guò)程中的常見(jiàn)問(wèn)題。目前有關(guān)施用菌肥緩解連作障礙的研究，大都是關(guān)于單一菌肥的影響效果[4-5]，并未有系統(tǒng)地比較施用不同菌肥對(duì)連作種植的影響。為此，本試驗(yàn)探究不同菌肥在不同施肥水平下對(duì)連作地黃產(chǎn)量及品質(zhì)的影響，以期篩選出適宜的菌肥品種及施用量，為緩解地黃連作障礙提供依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)材料

試驗(yàn)材料來(lái)源于河南省武陟縣地黃規(guī)范化種植基地，經(jīng)河南中醫(yī)藥大學(xué)董誠(chéng)明教授鑒定為地黃，品種為金九。2018年4月種植于河南省武陟縣駕部連作2年地黃試驗(yàn)田。

1.2 試驗(yàn)設(shè)計(jì)

試驗(yàn)在河南省武陟縣駕部科研試驗(yàn)田進(jìn)行。以菌肥種類（表1）、施肥量為考察因素，根據(jù)菌肥使用說(shuō)明給出施用量范圍，設(shè)計(jì)高、中、低共3個(gè)施肥水平。以不施用菌肥連作地黃小區(qū)為對(duì)照（CK）;以不施菌肥正茬地黃小區(qū)為對(duì)照（ZC），具體試驗(yàn)設(shè)計(jì)見(jiàn)表2。分別在6月20日、7月20日、8月20日各施肥1次，每個(gè)處理3次重復(fù)，其他管理措施同大田常規(guī)管理。

1.3 測(cè)定方法

1.3.1 產(chǎn)量測(cè)定 于2018年11月26日采收地黃，對(duì)各個(gè)試驗(yàn)處理小區(qū)的地黃塊根進(jìn)行稱質(zhì)量，以鮮質(zhì)量為記錄數(shù)據(jù)。

1.3.2 浸出物含量的測(cè)定 依據(jù)2015版《中國(guó)藥典》中地黃的方法測(cè)定水溶性浸出物含量。

1.3.3 梓醇、地黃苷A等指標(biāo)含量的測(cè)定

1.3.3.1 儀器與試劑 儀器：M8431AA型 Agilent型高效液相色譜儀（美國(guó)Agilent公司）;FA2204N 型電子天平（上海民橋精密科學(xué)儀器有限公司）;SIMPLICITY超純水系統(tǒng)（鄭州中譜儀器設(shè)備有限公司）;KQ-500DV 型數(shù)控超聲波清洗器（昆山市超聲儀器有限公司）。試劑：梓醇、毛蕊花糖苷標(biāo)準(zhǔn)品（中國(guó)食品藥品檢定研究院）;地黃苷D（批號(hào)為wkq19011809）、益母草苷標(biāo)準(zhǔn)品（批號(hào)為wkq19012206）（四川維克奇生物科技有限公司，含有量>98%）;地黃苷A標(biāo)準(zhǔn)品（批號(hào)為DST181019-106，成都德思特生物科技有限公司，含有量>98%）;乙腈、磷酸均為色譜純（美國(guó)Thermo Fisher 公司）;其他試劑均為分析純。

1.3.3.2 方法 （1）色譜條件。ZORBAX SB-C18色譜柱 （250 mm×4.6 mm，5 μm）;流動(dòng)相乙腈（A）-水（B，含0.2%磷酸），梯度洗脫（0～5 min，1.3%～1.5%A;5～6 min，1.5%～3%A;6～14 min，3%A;14～15 min，3%～4%A;15～20 min，4%A;20～25 min，4%～20%A;25～40 min，20%A）;柱溫 35 ℃;體積流量為1 mL/min;檢測(cè)波長(zhǎng)：0～20 min，203 nm;21～35 min，334 nm;進(jìn)樣量20 μL。色譜圖見(jiàn)圖1、圖2、圖3和圖4。（2）對(duì)照品溶液制備。精確稱取梓醇、地黃苷D、地黃苷A、益母草苷、毛蕊花糖苷對(duì)照品各1 mg，置于5 mL量瓶中，超純水溶解定容至刻度，即得質(zhì)量濃度分別為0.2 mg/mL的混合對(duì)照品溶液。（3）供試品溶液制備。精確稱取地黃樣品粉末0.8 g，置具塞錐形瓶中，精確加入 50 mL 甲醇，稱質(zhì)量，超聲提取1 h，冷卻至室溫，用甲醇補(bǔ)足減失的質(zhì)量，搖勻，過(guò)濾，精確量取續(xù)濾液20 mL，濃縮近干，將殘余物溶于超純水中，轉(zhuǎn)移至10 mL容量瓶中，超純水定容至刻度線，0.22 μL微孔濾膜過(guò)濾，即得。（4）線性范圍考察。精確稱取梓醇、地黃苷D、地黃苷A、益母草苷、毛蕊花糖苷對(duì)照品適量，按上述對(duì)照品溶液制備方法配制成 2 400、200、300、200、300 μg/mL的混標(biāo)溶液，記為溶液1，依次稀釋1.25、2、4、10、20、40倍，記為混標(biāo)溶液2、溶液3、溶液4、溶液5、溶液6、溶液7，在色譜條件下進(jìn)行。以質(zhì)量濃度為橫坐標(biāo)（x），峰面積為縱坐標(biāo)（y）進(jìn)行回歸，結(jié)果見(jiàn)表3，可知各成分在各自范圍內(nèi)線性關(guān)系良好。（5）精密度試驗(yàn)。精確吸取對(duì)照品溶液20 μL，連續(xù)進(jìn)樣6次，測(cè)得梓醇、地黃苷A、地黃苷D、益母草苷、毛蕊花糖苷峰面積相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)差（RSD）分別為0.62%、1.75%、1.46%、1.74%、0.20%，表明儀器精密度良好。（6）重復(fù)性試驗(yàn)。取同一批樣品6份，每份約0.8 g，按上述對(duì)照品溶液制備方法制備供試品溶液，過(guò)濾，精確吸取20 μL測(cè)定，測(cè)得梓醇、地黃苷A、地黃苷D、益母草苷、毛蕊花糖苷含有量RSD分別為1.88%、1.27%、1.49%、0.68%、1.73%。 表示該方法重復(fù)性良好。（7）穩(wěn)定性試驗(yàn)。精確吸取同一供試品溶液，于0、2、4、6、8、10、12、14、16、18、20、24 h測(cè)定峰面積，測(cè)得梓醇、地黃苷A、地黃苷D、益母草苷、毛蕊花糖RSD分別為1.47%、0.31%、1.31%、1.61%、0.88%，這表明供試品溶液在24 h內(nèi)穩(wěn)定性良好。（8）加樣回收率試驗(yàn)。精確稱取6份含量已知的樣品，每份0.2 g，加入梓醇、地黃苷 D、地黃苷 A、益母草苷、毛蕊花糖苷對(duì)照品6.51、0.12、0.37、0.72、0.32 mg。按上述供試品溶液制備方法制備供試品溶液（所有試劑的一半）。在色譜條件下測(cè)定，計(jì)算回收率。結(jié)果梓醇、地黃苷 D、地黃苷 A、益母草苷、毛蕊花糖苷加樣回收率分別為101.78%、96.14%、97.69%、102.57%，RSD分別為0.96%、1.23%、1.35%、0.58%、1.03%。（9）樣品含有量測(cè)定。取不同處理樣品，按上述對(duì)照品溶液制備方法制備供試品溶液，過(guò)濾，精確吸取20 μL，在色譜條件下測(cè)定，計(jì)算含量，結(jié)果見(jiàn)表5。

1.4 綜合評(píng)價(jià)

采用多指標(biāo)綜合加權(quán)評(píng)分法評(píng)價(jià)菌肥種類、施肥量對(duì)地黃水溶性浸出物含量（a）、梓醇含量（b）、毛蕊花糖苷含量（c）、地黃苷A含量（d）、地黃苷D含量（e）、益母草苷含量（f）的影響，分別賦予其不同的主觀權(quán)重，即0.25、0.30、0.10、0.15、0.15、0.05，再按以下公式計(jì)算綜合加權(quán)評(píng)分值（D）[6]。

2 結(jié)果與分析

2.1 不同菌肥處理對(duì)地黃產(chǎn)量的影響

由表4可見(jiàn)，施用7種不同菌肥對(duì)連作2年的地黃產(chǎn)量均能產(chǎn)生顯著影響，但不同菌肥、不同施用量對(duì)地黃影響的程度不同。施肥處理地黃產(chǎn)量與對(duì)照均存在顯著差異，以處理NF-3產(chǎn)量最高，為1 721.015 kg/667 m2，較對(duì)照提高77.24%;其次為處理JH-2，為1 445.655 kg/667 m2，較對(duì)照提高了48.89%。施肥處理地黃產(chǎn)量與正茬地黃產(chǎn)量對(duì)照相比，處理NF-3產(chǎn)量達(dá)到正茬地黃產(chǎn)量的68.11%;處理JH-2產(chǎn)量達(dá)到正茬地黃產(chǎn)量的57.21%。各菌肥不同施用量中CX-3、HM-3、JH-2、KC-3、NF-3、VG-3、ZD-1分別為產(chǎn)量最高的處理。由此可知，復(fù)合生物菌肥對(duì)連作地黃產(chǎn)量的提高效果較顯著，其中農(nóng)大肥業(yè)菌肥180 g/m2對(duì)連作2年地黃產(chǎn)量的提高效果最為顯著。

2.2 不同菌肥處理對(duì)地黃品質(zhì)的影響

由表5可知，連作2年地黃小區(qū)中處理NF-3浸出物含量最高，為89.930%，較對(duì)照提高2.34%;ZD-1地黃苷D含量最高，為0.022 8%，較對(duì)照顯著提高21.93%;梓醇和地黃苷A的含量均以處理JH-3含量最高，分別為5.994 1%、0.019 2%，較對(duì)照提高30.80%、18.52%;毛蕊花糖苷和益母草苷的含量均以HM-1處理最高，分別為0.047 1%、0.045 8%，較對(duì)照分別顯著提高151.87%、11.17%。地黃種植小區(qū)中處理HM-1、HM-3、JH-3、KC-2、NF-3、VG-3、ZD-1、ZC毛蕊花糖苷含量達(dá)到2015版《中國(guó)藥典》的標(biāo)準(zhǔn)，說(shuō)明合理施用菌肥能有效改善連作地黃的品質(zhì)。

2.3 綜合加權(quán)評(píng)分法評(píng)價(jià)

由表6可知，處理JH-3得分最高，為93.49分;其次為處理ZD-1，為92.25分;處理CX-2得分最低，為77.56分。綜合評(píng)分結(jié)果表明，菌肥聚核辛士力180 g/m2對(duì)連作2年地黃品質(zhì)的提高效果最顯著，聚核辛士力為復(fù)合生物菌肥。

3 討論與結(jié)論

由本試驗(yàn)結(jié)果可知，在對(duì)連作地黃產(chǎn)量的影響中，施用菌肥的21項(xiàng)處理除CX-1、CX-2、HM-2、ZD-3外，其余處理產(chǎn)量均高于對(duì)照，但所有連作地黃處理小區(qū)的產(chǎn)量均低于正茬種植地黃小區(qū)，值得注意的是處理NF-3的產(chǎn)量達(dá)到正茬種植的68.11%，表明施用農(nóng)大肥業(yè)菌肥180 g/m2有利于連作地黃產(chǎn)量的提高。

連作地黃小區(qū)中只有部分處理毛蕊花糖苷含量達(dá)到2015版《中國(guó)藥典》的標(biāo)準(zhǔn)，其中處理 HM-1 毛蕊花糖苷含量最高，為0.047 1%，達(dá)到正茬種植的88.53%。但正茬地黃的浸出物、梓醇、地黃苷A、地黃苷D、益母草苷含量均不為最高處理，說(shuō)明合理施用菌肥對(duì)提高連作地黃品質(zhì)的影響較顯著，這與許園園等的研究結(jié)果[7-8]相符。

總之，處理NF-3為提高連作地黃產(chǎn)量的最佳處理，其對(duì)提高連作地黃品質(zhì)的影響不顯著;處理JH-3為提高連作地黃品質(zhì)的最佳處理，其對(duì)提高連作地黃產(chǎn)量的影響不顯著。聚核辛士力、農(nóng)大肥業(yè)菌肥均為復(fù)合生物菌肥，說(shuō)明復(fù)合生物菌肥有利于連作地黃產(chǎn)量和品質(zhì)的提高。不同種類菌肥混合施加不同水平對(duì)連作地黃產(chǎn)量和品質(zhì)的試驗(yàn)效果，有待進(jìn)一步研究。

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