張金瑞

（商丘工學(xué)院，河南 商丘 476000）

云芝（Coriolus versicolor），又名采絨革蓋菌、彩紋云芝、千層蘑、彩云革蓋菌等，具有較高藥用價(jià)值，是隸屬于多孔菌科（Polyporaceae） 云芝屬（Polystictus） 的大型真菌[1]。有研究指出其具有健脾利濕，清熱解毒的功效，并可用于治療濕熱黃疸，脅痛，納差，倦怠乏力等[2]。從云芝菌絲體中分離的糖肽類物質(zhì)已被證實(shí)是其主要活性物質(zhì)，也是國(guó)家藥監(jiān)局批準(zhǔn)的免疫增強(qiáng)類藥物[3]。已經(jīng)有云芝肝泰沖劑和云芝菌膠囊等藥物被投入臨床使用，主要可治療慢性遷延性肝炎，并且可以在調(diào)節(jié)免疫等綜合性的治療中發(fā)揮清熱解毒、消炎的作用[4]。

運(yùn)動(dòng)性疲勞是指在運(yùn)動(dòng)過(guò)程中或運(yùn)動(dòng)后產(chǎn)生的身體疲勞狀況，導(dǎo)致身體機(jī)能不能維持在特定水平或不能維持原本的運(yùn)動(dòng)強(qiáng)度[5-6]。研究發(fā)現(xiàn)，運(yùn)動(dòng)性疲勞的發(fā)生機(jī)制有4種，疲勞物質(zhì)的大量積累、能源物質(zhì)的過(guò)度消耗；、相關(guān)物質(zhì)生化狀態(tài)的改變和代謝調(diào)控失調(diào)[6]?？蛊诰褪茄泳彯a(chǎn)生疲勞或加快消除疲勞[5，7]，有效的抗疲勞能夠幫助運(yùn)動(dòng)員調(diào)整身體狀況，提升運(yùn)動(dòng)效果和運(yùn)動(dòng)能力，所以對(duì)抗運(yùn)動(dòng)性疲勞機(jī)制的研究十分必要[8]。

劉繼鵬等[9-10]、陳洪章等[11]、羅海吉等[12]和馬東曉等[13]的試驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，補(bǔ)充支鏈氨基酸不僅可以推遲運(yùn)動(dòng)性疲勞的出現(xiàn)，還可以提高機(jī)體運(yùn)動(dòng)耐力，適當(dāng)延長(zhǎng)機(jī)體運(yùn)動(dòng)時(shí)間。試驗(yàn)研究云芝中氨基酸的性質(zhì)特征，探討云芝氨基酸對(duì)運(yùn)動(dòng)員抗疲勞能力的增強(qiáng)作用。

1 材料和儀器

1.1 材料和試劑

試驗(yàn)動(dòng)物為清潔級(jí)雄性BALB/C小白鼠，體重約20 g，由揚(yáng)州大學(xué)比較醫(yī)學(xué)中心提供。設(shè)置飼養(yǎng)動(dòng)物溫度條件為20℃～24℃，相對(duì)濕度條件為60%～70%。在進(jìn)行正式試驗(yàn)前提前放小鼠于動(dòng)物房環(huán)境中適應(yīng)5 d。

試驗(yàn)中使用的云芝購(gòu)自藥店；血乳酸（LA）、超氧化物歧化酶（SOD）、肝糖原（HG） 測(cè)定試劑盒，由南京建成生物工程研究所提供。

1.2 試驗(yàn)儀器

X0-SM100超聲微波組合反應(yīng)系統(tǒng)，南京先歐儀器制造有限公司；L-8900全自動(dòng)氨基酸分析儀，日本日立公司；自制帶水泵游泳箱；電子天平，上海上平儀器有限公司；五金店購(gòu)買鉛皮；自制爬桿架；ACE全自動(dòng)生化分析儀，山東博科儀器有限公司；721分光光度計(jì)，南京華奧儀器有限公司；離心機(jī)，湖南恒諾儀器設(shè)備有限公司；勻漿器，寧波新芝生物科技股份有限公司；恒溫水浴箱，蘇州威爾試驗(yàn)用品有限公司；手術(shù)器械、灌胃器械，江蘇正康醫(yī)療器械有限公司。

2 試驗(yàn)方法

2.1 超聲波輔助提取云芝氨基酸

將云芝子實(shí)體經(jīng)干燥、粉碎后過(guò)80目篩，得到云芝干粉；取處理后的云芝干粉5.00 g，料液比為1∶30，加水混勻；將混勻物放入超聲功率為400 W的X0-SM 100超聲微波組合反應(yīng)系統(tǒng)中提取3 min，提取云芝中的氨基酸[14]，得到云芝氨基酸固體提取物濃度為 0.2 g·kg-1。

2.2 云芝中氨基酸種類分析

稱取經(jīng)2.1程序處理后的云芝干粉1 mg，加入0.1 mol·L-1的鹽酸50 mL混合，震蕩搖勻，約30 min后過(guò)濾；向?yàn)V液中加入8%的5-磺基水楊酸，充分混勻；后將混合物放入離心機(jī)1 000 r·min-1離心15 min后取上清液，微孔濾膜過(guò)濾后放入全自動(dòng)氨基酸分析儀進(jìn)行測(cè)定[15]。

2.3 云芝氨基酸對(duì)運(yùn)動(dòng)員抗疲勞能力的測(cè)定

2.3.1 動(dòng)物模型建立

設(shè)立5個(gè)不同的試驗(yàn)項(xiàng)目，分別為負(fù)重游泳試驗(yàn)、爬桿試驗(yàn)、血乳酸含量測(cè)定試驗(yàn)、超氧化物歧化酶活性測(cè)定試驗(yàn)和肝糖原含量測(cè)定試驗(yàn)，且每個(gè)項(xiàng)目都設(shè)計(jì)有不同給藥劑量的試驗(yàn)組、空白對(duì)照組和陰性對(duì)照組。

根據(jù)給藥劑量不同，將試驗(yàn)組分為低劑量組0.165 g·kg-1、中劑量組 0.338 g·kg-1、高劑量組 0.567 g·kg-1，每日用量為小鼠體重乘以設(shè)置劑量，劑量單位為云芝氨基酸固體提取物質(zhì)量除以小鼠體重，每天于上午9時(shí)左右灌胃1次；空白對(duì)照組灌胃同等劑量的蒸餾水，用量以低劑量組設(shè)置劑量為標(biāo)準(zhǔn)[16]；對(duì)照組小鼠不做灌胃處理。

2.3.2 小鼠負(fù)重游泳試驗(yàn)

取試驗(yàn)用小鼠40只，并將其隨機(jī)分為5組，每組8只。按2.3.1中劑量設(shè)計(jì)給不同組小鼠連續(xù)給藥30 d，最后1次灌胃30 min后將小鼠放入自制水箱中游泳，陰性對(duì)照組小鼠直接放入水箱中，水箱中溫度設(shè)置為（25±0.5）℃，在小鼠尾巴根部放置小鼠體重0.5%的鉛塊，觀察記錄小鼠從游泳開始至力竭的時(shí)間。力竭判斷的依據(jù)為：小鼠頭部沒入水中且10秒內(nèi)不浮出水面[17]。

2.3.3 小鼠爬桿試驗(yàn)

取試驗(yàn)用小鼠40只，并將其隨機(jī)分為5組，每組8只。按2.3.1中劑量設(shè)計(jì)給不同組小鼠連續(xù)給藥30 d，最后1次灌胃30 min后，為使小鼠肌肉處于靜力緊張狀態(tài)（當(dāng)做一個(gè)動(dòng)作姿勢(shì)時(shí)，不論是否使用重量，最后都能靜止不動(dòng)，并保持最大緊張度3 s～6 s） 可將小鼠放在有機(jī)玻璃棒上，陰性對(duì)照組小鼠直接放在有機(jī)玻璃棒上，觀察記錄小鼠因肌肉疲勞而從玻璃圓棒上跌落下來(lái)的時(shí)間，累計(jì)記錄3次。

2.3.4 小鼠相關(guān)血清生化指標(biāo)測(cè)定試驗(yàn)

迅速撈出2.3.2中游泳力竭的小鼠，眼球取血，分離血清，分別按試劑盒法結(jié)合比色法測(cè)LA含量、SOD活性。

2.3.5 小鼠肝糖原測(cè)定試驗(yàn)

將2.3.2中游泳力竭的小鼠立即撈出處死，取出其肝臟，精確稱量200 mg，勻漿離心，測(cè)定其肝糖原。

2.3.6 試驗(yàn)數(shù)據(jù)處理

試驗(yàn)數(shù)據(jù)均以平均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差表示。采用SPSS 16.0對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)處理，多組間數(shù)據(jù)比較方差分析，兩組間數(shù)據(jù)比較采用t檢驗(yàn)，P＜0.05時(shí)有顯著性差異。

3 試驗(yàn)結(jié)果

3.1 云芝氨基酸組成分析結(jié)果

經(jīng)全自動(dòng)氨基酸分析儀檢測(cè)得知，云芝中共計(jì)有17種氨基酸（色氨酸未測(cè)），如表1所示。

表1 云芝氨基酸組成分析Tab.1 Analysis of amino acid composition of Coriolus versicolor

從表1可以看出，云芝中谷氨酸占13.2%，亮氨酸占8.8%，丙氨酸占比8.8%，天冬氨酸占9.8%，其余13種氨基酸含量均占比不達(dá)5%。

3.2 小鼠負(fù)重游泳試驗(yàn)及爬桿試驗(yàn)結(jié)果

云芝氨基酸對(duì)小鼠負(fù)重游泳時(shí)間及爬桿時(shí)間的影響結(jié)果見表2。

表2 云芝氨基酸對(duì)小鼠負(fù)重游泳時(shí)間及爬桿時(shí)間的影響Tab.2 Effect of amino acid of Coriolus versicolor on weightbearing swimming time and pole climbing time in mice

由表2可知，灌胃不同劑量云芝氨基酸的3個(gè)試驗(yàn)組與灌胃生理鹽水的空白對(duì)照組及陰性對(duì)照組相比，負(fù)重游泳時(shí)間及爬桿時(shí)間均有顯著性差異（P＜0.05），且隨著云芝氨基酸劑量的增加，小鼠負(fù)重游泳時(shí)間及爬桿時(shí)間均有明顯延長(zhǎng)。

3.3 小鼠血清生化指標(biāo)試驗(yàn)結(jié)果

云芝氨基酸對(duì)小鼠血清生化指標(biāo)的影響見表3。

表3 云芝氨基酸對(duì)小鼠血清生化指標(biāo)的影響Tab.3 The effect of amino acid of Coriolus versicolor on serum biochemical index in mice

由表3可知，灌胃不同劑量的試驗(yàn)組與空白對(duì)照組及陰性對(duì)照組相比數(shù)值均有顯著性差異（P＜0.05），且隨著云芝氨基酸濃度的增加，血乳酸含量明顯降低，說(shuō)明云芝氨基酸可有效降低血乳酸含量；而隨著云芝氨基酸濃度的增加SOD的含量顯著增加，說(shuō)明云芝氨基酸對(duì)提高SOD活性有一定效果。

3.4 小鼠肝糖原含量測(cè)定試驗(yàn)結(jié)果

云芝氨基酸對(duì)小鼠肝糖原含量的影響情況見表4。

表4 云芝氨基酸對(duì)小鼠肝糖原含量的影響Tab.4 The effect of amino acid of Coriolus versicolor on liver glycogen content in mice

由表4可知，灌胃不同劑量的試驗(yàn)組與空白對(duì)照組及陰性對(duì)照組相比數(shù)值均有顯著性差異（P＜0.05），隨著云芝氨基酸濃度的增加，肝糖原含量顯著增加，說(shuō)明云芝氨基酸對(duì)提高肝糖原活性有一定效果。

4 討論

運(yùn)動(dòng)性疲勞是指機(jī)體由于運(yùn)動(dòng)而引起系統(tǒng)生理生化的改變從而導(dǎo)致機(jī)體運(yùn)動(dòng)能力暫時(shí)降低的現(xiàn)象[18]。小鼠負(fù)重游泳的時(shí)間和爬桿時(shí)間可以代表其運(yùn)動(dòng)耐力，即抗疲勞的能力[19]。試驗(yàn)結(jié)果顯示，服用云芝氨基酸的小鼠其負(fù)重游泳時(shí)間和爬桿時(shí)間均長(zhǎng)于對(duì)照組，表明云芝氨基酸在增強(qiáng)運(yùn)動(dòng)耐力方面具有一定效果。

隨著運(yùn)動(dòng)的進(jìn)行，機(jī)體中相關(guān)血乳酸的含量會(huì)逐漸升高，這是因?yàn)闄C(jī)體在無(wú)氧條件下運(yùn)動(dòng)會(huì)不斷地消耗能量從而積累血乳酸，導(dǎo)致機(jī)體疲勞，所以可以將血乳酸含量作為檢驗(yàn)小鼠抗疲勞能力的生化指標(biāo)[20]。此外在運(yùn)動(dòng)過(guò)程中，還會(huì)產(chǎn)生大量的氧自由基等代謝產(chǎn)物，氧自由基增多、脂質(zhì)過(guò)氧化反應(yīng)增強(qiáng)，會(huì)造成對(duì)組織細(xì)胞的損傷，引起運(yùn)動(dòng)性疲勞[21]。SOD是一種能夠有效清除自由基的特異性抗氧化酶，其活力的增強(qiáng)能加快自由基的清除，有助于阻斷脂質(zhì)過(guò)氧化，修復(fù)細(xì)胞，緩解疲勞[22]，所以SOD也是評(píng)價(jià)小鼠抗疲勞能力的重要生化指標(biāo)。而肝糖原是運(yùn)動(dòng)時(shí)能量的來(lái)源，為機(jī)體提供更多的能量從而達(dá)到抗疲勞的目的，因此肝糖原也是評(píng)價(jià)抗疲勞的生化指標(biāo)[23]。

通過(guò)上述試驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，服用云芝氨基酸的小鼠其血乳酸含量降低，SOD及肝糖原含量增加，說(shuō)明云芝氨基酸對(duì)小鼠的抗疲勞能力具有增強(qiáng)作用。

5 結(jié)論

綜上所述，云芝氨基酸能夠在一定程度上延長(zhǎng)負(fù)重游泳時(shí)間和爬桿時(shí)間，減少運(yùn)動(dòng)過(guò)程中血乳酸含量的累積，增加SOD及肝糖原含量，從而延緩疲勞的產(chǎn)生，加速疲勞的消除。因此，云芝氨基酸可以提高運(yùn)動(dòng)耐力，具有增強(qiáng)抗疲勞能力的效果。