惠 雷 張金萍 國 志 卞相麗

兒童急性淋巴細(xì)胞白血病(acute lymphoblastic leukemia，ALL)是兒童惡性疾病中比較常見的一類。惡性淋巴細(xì)胞不斷在患兒的血液、臟器官及骨髓克隆、增殖，從而引起異質(zhì)性紊亂性疾病。目前，導(dǎo)致兒童患有ALL的病因尚不清楚，但有研究表明基因遺傳和特定的環(huán)境在誘發(fā)兒童ALL中起著重要的作用[1]。ABCB1(adenosine triphosphate-binding cassette，subfamily B，member 1 gene)基因編碼的膜轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白P-糖蛋白(P-gp)屬于ATP結(jié)合盒(ABC)超家族的一員。其功能是將細(xì)胞代謝物等排出細(xì)胞。研究認(rèn)為，ABCB1基因位點(diǎn)多態(tài)性與多種病變存在相關(guān)[2]。C3435T SNP(rs1045642)是ABCB1編碼區(qū)最常見的多態(tài)位點(diǎn)之一，它位于第26號(hào)外顯子。盡管C/T的替換并不會(huì)引起編碼蛋白的改變，但其與血漿P-gp底物濃度的改變顯著相關(guān)。近年來，許多研究檢查了不同人群中ABCB1 C3435T多態(tài)性與兒童ALL風(fēng)險(xiǎn)的關(guān)系，但所得結(jié)果缺乏一致性[3-13]。本研究采用Meta分析方法全面評(píng)估ABCB1基因C3435T多態(tài)性與兒童ALL風(fēng)險(xiǎn)之間的關(guān)聯(lián)性。

1 材料與方法

1.1 資料搜索

在Embase、PubMed、Elsevier、CNKI、Wan Fang Data中檢索關(guān)于ABCB1 C3435T多態(tài)性與ALL風(fēng)險(xiǎn)相關(guān)性的文章。語言限制為中英兩種語言。檢索詞為“MDR1/ABCB1”、“兒童急性淋巴細(xì)胞白血病”、“childhood acute leukemia”、“基因多態(tài)性”、“polymorphism”、“variant”。此外，相關(guān)綜述文章的參考文獻(xiàn)和利用關(guān)鍵詞搜索出的文章再次通過手動(dòng)檢索確認(rèn)這些文章是否應(yīng)納入本研究。會(huì)議摘要和未發(fā)表的成果不納入本研究。

1.2 納入和排除標(biāo)準(zhǔn)

納入標(biāo)準(zhǔn)：文章是關(guān)于ABCB1基因C3435T多態(tài)性與ALL相關(guān)性的病例研究；文章提供足夠關(guān)于基因型或等位基因的數(shù)據(jù)用以計(jì)算95%CIs和ORs；文章清晰地闡述了病例的來源及對(duì)照組。

排除標(biāo)準(zhǔn)：文章中的數(shù)據(jù)不完整，無法進(jìn)行95%CIs和ORs計(jì)算；關(guān)于ABCB1基因和C3435T多態(tài)性與兒童ALL相關(guān)的評(píng)論、社論、細(xì)胞株研究。

1.3 納入文獻(xiàn)中數(shù)據(jù)提取

兩名研究人員分別從所選文獻(xiàn)中提取了以下數(shù)據(jù)：作者信息、發(fā)表時(shí)間、來源、樣本量、受試者的國籍和民族、遺傳檢測(cè)、哈迪·溫伯格遺傳平衡(handy weinberg equilibrium，HWE)。若在篩選過程中出現(xiàn)不同意見，可詢問第三方處理。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析

STATA軟件被用來分析數(shù)據(jù)，P<0.05認(rèn)為差異顯著。通過計(jì)算95%CIs和ORs來評(píng)估兒童ALL風(fēng)險(xiǎn)與ABCB1 C3435T多態(tài)性之間關(guān)聯(lián)的強(qiáng)弱。采用Ph來計(jì)算納入數(shù)據(jù)的異質(zhì)性：若有異質(zhì)性(Ph<0.05)，則用隨機(jī)效應(yīng)模型(DerSimonian和Laird方法)[14]，反之(Ph>0.05)，則用固定效應(yīng)模型(Mantel-Haenszel方法)[15]。運(yùn)用程序計(jì)算對(duì)照組的HWE。對(duì)沒有遵循HWE平衡的對(duì)照組(P<0.05)進(jìn)行敏感性分析[16]。Begg和Egger檢驗(yàn)法分別評(píng)估出版偏倚，P<0.05為差異顯著。

2 結(jié)果

2.1 納入文獻(xiàn)基本信息分析

納入的文獻(xiàn)共包括ALL兒童患者2755例，對(duì)照組兒童1681例。所包括的研究對(duì)象的主要特征如表1所示。所納入的文獻(xiàn)研究都是病例對(duì)照研究，其中9項(xiàng)是基于群體的對(duì)照研究，其余2項(xiàng)是基于醫(yī)院的對(duì)照研究。對(duì)照組和ALL組在年齡和性別上相似。按人群種族分類：5項(xiàng)研究關(guān)于亞洲兒童，6項(xiàng)研究關(guān)于高加索兒童。

2.2 Meta分析結(jié)果

分別分析了顯性(CC vs.CT+TT)、隱性(TT vs.CC+CT)、共顯性(CT vs.CC和TT vs.CC)模型的所有數(shù)據(jù)。結(jié)果表明，ABCB1 C3435T多態(tài)性與兒童ALL在共顯性和隱性模型下呈明顯相關(guān)性(TT vs CC：OR=1.45，95%CI=1.06～2.18，P=0.03；TT vs CT+CC：OR=1.54，95%CI=1.08～2.40，P=0.01)。將研究對(duì)象根據(jù)群體的種族分類進(jìn)行亞組分析。其結(jié)果顯示亞洲兒童ABCB1 C3435T多態(tài)性和ALL風(fēng)險(xiǎn)增加顯著相關(guān)(TT與CC：OR=2.05，95%CI=1.08～3.92，P=0.02；TT vs CT + CC：OR=2.24，95%CI=1.16～4.48，P=0.01)(表2)。

2.3 敏感性分析與出版偏倚

在所納入的文獻(xiàn)中，Bektas-KayhanK et al研究中的對(duì)照組基因型分布與HWE不一致。為了評(píng)估每個(gè)個(gè)體研究對(duì)匯總OR的影響，本研究從meta分析中逐次刪除單個(gè)研究來進(jìn)行敏感性分析。結(jié)果發(fā)現(xiàn)依次刪除單個(gè)研究對(duì)meta分析的統(tǒng)計(jì)學(xué)并沒有顯著改變，表明了meta分析結(jié)果的相對(duì)穩(wěn)定和可信性(圖1)。

用Begg's test和Egger's test來檢驗(yàn)出版偏倚。結(jié)果顯示meta數(shù)據(jù)在漏斗圖中呈對(duì)稱分布，無明顯偏倚性(Begg's test，P=0.732，Egger's test，P=0.845，圖2)。

3 討論

在ABCB1基因的29個(gè)外顯子中，其中28個(gè)外顯子被發(fā)現(xiàn)存在位點(diǎn)SNP[1]。位于ABCB1基因第26號(hào)的外顯子C3435T多態(tài)性盡管并不改變蛋白編碼序列中的異亮氨酸，但這個(gè)位點(diǎn)的多樣性與蛋白P-gp的表達(dá)水平、構(gòu)象及其與底物結(jié)合的特異性相關(guān)。此外，P-gp在腸道，腎肝臟的頂膜部位均有表達(dá)，且起到跨膜外流泵的作用，表明P-gp可能與藥物的吸收和清除有關(guān)[17]。在腫瘤細(xì)胞上和ALL患者的外周血細(xì)胞及造血干細(xì)胞中P-gp也有表達(dá)，表明ABCB1基因多態(tài)性影響著腫瘤和ALL的發(fā)展過程[18]。

表1 研究對(duì)象的Meta分析

注：a為群體的對(duì)照研究； b為醫(yī)院的對(duì)照研究。

表2 ABCB1 C3435T多態(tài)性與兒童ALL風(fēng)險(xiǎn)的meta分析

項(xiàng)目例數(shù)TT vs CC+CTOR(95%CI)PPhCC vs TT+CTOR(95%CI)PPh總體111.57(1.06,2.32)0.02<0.011.08(0.93,1.26)0.290.51高加索人61.14(0.94,1.39)0.180.070.98(0.81,1.19)0.650.61亞洲人52.25(1.11,4.55)0.02<0.011.14(0.91,1.44)0.250.24

注：Ph值用來檢測(cè)異質(zhì)性。假如Ph<0.05,分析時(shí)將選用隨機(jī)模型，反之，則選用固定模型。

圖1 ABCB1 C3435T多態(tài)性與兒童ALL危險(xiǎn)性關(guān)聯(lián)的敏感性分析

在以往關(guān)于ABCB1 C3435T多態(tài)性與ALL風(fēng)險(xiǎn)關(guān)系的研究中，結(jié)果存在很大的爭(zhēng)議性。一些研究顯示ALL的發(fā)生和愈合與ABCB1位點(diǎn)3435上的CC/TT純合子的豐度有關(guān)[3,12]，但不少研究也分別證明ABCB1 C3435T多態(tài)性與ALL的發(fā)生無顯著相關(guān)性[4-6,8,11,13]。為了綜合評(píng)價(jià)這個(gè)位點(diǎn)的多態(tài)性對(duì)白血病易感性的影響，本研究分析結(jié)果表明ABCB1 C3435T多態(tài)性在共顯性和隱性模型中與兒童患ALL呈正相關(guān)關(guān)系。種族亞群分析顯示這種相關(guān)性僅存在于亞洲兒童中，而不存在于高加索兒童中。由于不同種族人群的遺傳背景和生活習(xí)慣不同，今后在ABCB1 C3435T的多態(tài)性和兒童ALL關(guān)系的研究中還應(yīng)考慮其他遺傳因素和環(huán)境的影響。

盡管本研究包括了ABCB1 C3435T多態(tài)性與兒童ALL風(fēng)險(xiǎn)的最新研究，但仍有其不可避免的局限性。首先，納入研究的數(shù)據(jù)樣本量相對(duì)較小，這個(gè)因素在進(jìn)行亞組(按人群種族分類)分析時(shí)尤為突出；其次，數(shù)據(jù)研究的相對(duì)孤立，ALL的發(fā)生率受多項(xiàng)因素的影響，而在本研究OR的計(jì)算中并未將這些因素考慮在內(nèi)；再者，種族差異、實(shí)驗(yàn)對(duì)照組來源不同以及分析方法各異導(dǎo)致了meta分析中的顯著異質(zhì)性，而這些異質(zhì)性受研究對(duì)象年齡、性別、生活習(xí)慣和ALL種類的影響，但本研究中并未能剖析這些異質(zhì)性存在的原因。

本研究發(fā)現(xiàn)ABCB1 C3435T多態(tài)性在共顯性和隱性模型中與ALL的風(fēng)險(xiǎn)增加有關(guān)，且存在種族特異性。進(jìn)一步研究種族特異性遺傳基因、ABCB1 C3435T多態(tài)性和ALL發(fā)生率之間的關(guān)系將有助于臨床預(yù)防和治療兒童ALL。