馬兵 鄧博 劉丹 冷希崗 劉蘭霞

中國(guó)醫(yī)學(xué)科學(xué)院生物醫(yī)學(xué)工程研究所，天津300192

0 引 言

為阻止病原菌對(duì)機(jī)體的侵害，人們將病原微生物及其代謝產(chǎn)物經(jīng)人工減毒、滅活或利用基因工程等方法，制成用于預(yù)防傳染病的自動(dòng)免疫制劑，并稱之為疫苗。經(jīng)過(guò)處理的病原菌仍保留著能刺激機(jī)體免疫系統(tǒng)的特性，當(dāng)機(jī)體與之接觸后，免疫系統(tǒng)會(huì)產(chǎn)生一些保護(hù)物質(zhì)如細(xì)胞因子、免疫細(xì)胞等，之后當(dāng)機(jī)體再次接觸這種病原菌時(shí)，機(jī)體會(huì)依照原有記憶快速、大量地制造更多的保護(hù)物質(zhì)來(lái)保護(hù)機(jī)體。然而人造疫苗常出現(xiàn)抗原免疫原性較弱、引發(fā)的免疫應(yīng)答強(qiáng)度不夠和不良反應(yīng)較嚴(yán)重等問(wèn)題，于是人們開(kāi)始研制相應(yīng)的佐劑用以解決這些問(wèn)題[1]。

佐劑是一種非特異性免疫增強(qiáng)劑，當(dāng)其與抗原同時(shí)或預(yù)先注入機(jī)體時(shí)可增強(qiáng)機(jī)體對(duì)抗原的免疫應(yīng)答或改變免疫應(yīng)答類型。佐劑僅與少量抗原聯(lián)合使用，即可協(xié)助抗原引發(fā)更快速、更強(qiáng)烈且更持久的免疫應(yīng)答反應(yīng)，因此還可節(jié)約疫苗的生產(chǎn)成本。佐劑能激活抗原提呈細(xì)胞（antigen-presenting cells,APCs），并能促進(jìn)APCs 攝取抗原，刺激各種趨化因子和細(xì)胞因子的分泌，使CD4+T 分化為輔助性T 細(xì)胞 1（helper T cell 1，Th1）、Th2、Th17 等不同類型的細(xì)胞，從而引起下游的特異性免疫應(yīng)答[2]。佐劑還可使免疫應(yīng)答對(duì)主要組織相容性復(fù)合體Ⅰ類（major histocompatibility complex class Ⅰ,MHCⅠ）或 MHC Ⅱ和Th1 或Th2 類免疫反應(yīng)產(chǎn)生選擇性調(diào)節(jié)，這對(duì)機(jī)體抵抗細(xì)胞內(nèi)病原菌（如細(xì)菌、病毒和寄生蟲(chóng)）所致疾病具有非常重要的作用[3]。

佐劑可從自然界的天然產(chǎn)物中直接獲取，也可通過(guò)人工合成尋求新的類型。自然界中神秘而又豐富的資源為佐劑研究提供了一個(gè)巨大寶庫(kù)。本文將對(duì)一些已被發(fā)現(xiàn)和使用的天然來(lái)源的免疫佐劑進(jìn)行綜述，主要包括植物來(lái)源、動(dòng)物來(lái)源和微生物來(lái)源的免疫佐劑，論述它們的作用與臨床應(yīng)用進(jìn)展。

1 植物來(lái)源的免疫佐劑

1.1 皂苷

皂苷是苷元為三萜或螺旋甾烷類化合物的一類糖苷，具有多種生物活性和藥理活性。值得注意的是，皂苷可激活哺乳動(dòng)物的免疫系統(tǒng)，這使其作為免疫佐劑有著巨大的開(kāi)發(fā)潛能。其中應(yīng)用最廣泛的是從皂樹(shù)皮中提取的Quil A 及其衍生物QS-21，已在大量臨床試驗(yàn)中得以驗(yàn)證[4]。它們能特定地激活Th1 免疫應(yīng)答，并促進(jìn)細(xì)胞毒性T 淋巴細(xì)胞的產(chǎn)生來(lái)對(duì)抗外源性抗原，還可以誘導(dǎo)樹(shù)突狀細(xì)胞（dendritic cells,DCs）的成熟[5]。這使得它們成為制備某些疫苗或亞單位疫苗的理想材料，可用于直接殺滅胞內(nèi)病原菌，也可用于制備抗癌疫苗。然而，此類皂苷用作佐劑存在許多嚴(yán)重的缺陷，如含有劇毒、產(chǎn)生溶血反應(yīng)及在水相中穩(wěn)定性差等，這些不良反應(yīng)限制了其作為疫苗佐劑的應(yīng)用[6]。于是，人們對(duì)來(lái)自其他天然產(chǎn)物的皂苷佐劑展開(kāi)了大量研究。

人參中含有大量的人參皂苷，人參皂苷是人參的主要活性成分。研究結(jié)果發(fā)現(xiàn)，人參皂苷作為免疫佐劑也具有良好的效果。其中人參皂苷Rg1 可通過(guò)刺激 IgG、干擾素-γ（interferon-γ,IFN-γ）和白細(xì)胞介素-4（interleukin-4,IL-4）的產(chǎn)生，來(lái)增強(qiáng)小鼠對(duì)乙型肝炎表面抗原HBsAg 的免疫應(yīng)答[7]，還可激活DCs，誘導(dǎo)針對(duì)淋巴瘤的保護(hù)性細(xì)胞反應(yīng)[8]；人參皂苷Rg3 可用作常規(guī)癌癥治療的佐劑，發(fā)揮協(xié)同作用提高療效和減少不良反應(yīng)，這是通過(guò)誘導(dǎo)IFN-γ 和IL-2 的生成來(lái)實(shí)現(xiàn)的[9]；人參皂苷GS-R/菜籽油乳劑作為佐劑用于口蹄疫病毒疫苗中，能顯著增強(qiáng)Th1/Th2 免疫應(yīng)答，與商業(yè)油佐劑ISA 206 相比無(wú)顯著差別且黏度更低[10]。

除人參皂苷外，還有其他皂苷亦可用作免疫佐劑。Sun 等[11]從合歡的莖皮中提取總皂苷（AJSt），AJSt75 是其中最具輔助活性的部分，可通過(guò)在注射部位誘導(dǎo)細(xì)胞因子和趨化因子來(lái)改善抗原特異性的細(xì)胞和體液免疫反應(yīng)，同時(shí)引發(fā)Th1/Th2 反應(yīng)。為了增強(qiáng)亞單位疫苗的免疫原性，Zhao 等[12]將卵清蛋白（ovalbumin,OVA）與桔梗皂苷共同載入脂質(zhì)體中，再加入可溶性微針陣列中。該抗原佐劑遞送系統(tǒng)不僅可大大提高小鼠骨髓來(lái)源的DCs 對(duì)OVA 的吸收，降低桔梗皂苷的毒性，還可引起小鼠平衡的Th1和Th2 體液免疫反應(yīng)，增強(qiáng)小鼠的免疫應(yīng)答。除此之外，還有更多不同種類的皂苷及其衍生物在佐劑方面的應(yīng)用需要繼續(xù)探索開(kāi)發(fā)。

1.2 多糖

植物多糖，又稱植物多聚糖，是植物細(xì)胞代謝產(chǎn)生的聚合度超過(guò)10 的聚糖，在自然界中普遍存在，包括淀粉、纖維素、多聚糖和果膠等。天然多糖具有內(nèi)在的免疫調(diào)節(jié)、抗腫瘤和降糖降脂等功能，其生物相容性和生物可降解性良好，低毒且安全。近年來(lái)，許多研究結(jié)果均證實(shí)植物多糖可用作免疫佐劑。多糖佐劑可激活巨噬細(xì)胞、T 淋巴細(xì)胞、B 淋巴細(xì)胞和自然殺傷（natural killer,NK）細(xì)胞，并促進(jìn)免疫相關(guān)分子（如細(xì)胞因子、抗體和補(bǔ)體分子）的分泌，以增強(qiáng)體液免疫、細(xì)胞免疫和黏膜免疫，達(dá)到殺傷腫瘤的作用[13]。多糖佐劑主要包括殼聚糖、葡聚糖、甘露糖等。

殼聚糖（chitosan）顆?？稍黾?IL-1b、IL-6 和腫瘤壞死因子-α（tumor necrosis factor-α，TNF-α）的釋放，并促進(jìn)CD4+T 和CD8+T 細(xì)胞的增殖分化，有效刺激體液免疫和細(xì)胞免疫，誘導(dǎo)天然和適應(yīng)性免疫反應(yīng)[14]。殼聚糖還具有緩釋和控釋的作用，可延長(zhǎng)抗原或藥物在胃腸道中的作用時(shí)間。Almasian 等[15]制備了含有大腸桿菌Stx2B 蛋白的殼聚糖納米顆?？诜呙?，并用其免疫BALB/c 小鼠，結(jié)果證實(shí)殼聚糖納米粒在胃腸道中能保護(hù)抗原免于降解并控制抗原釋放，被免疫小鼠體內(nèi)的IgG 和IgA 滴度顯著增加。

葡聚糖（glucan）可增強(qiáng)機(jī)體對(duì)疫苗的免疫應(yīng)答，提高血清抗體滴度以及 IL-2 和 IFN-γ 的水平[16]。此外，Mirza 等[17]發(fā)現(xiàn)葡聚糖顆粒的內(nèi)部中空腔可裝載不同的化合物（包括蛋白質(zhì)抗原），并輸送至巨噬細(xì)胞和DCs。因此，葡聚糖既可用作佐劑，又可用作靶向呈遞抗原的遞送系統(tǒng)。

甘露糖（mannose）的佐劑功能可能取決于其與巨噬細(xì)胞和DCs 表面甘露糖結(jié)合凝集素和甘露糖受體家族的其他C 型凝集素的結(jié)合，從而激活補(bǔ)體，發(fā)揮調(diào)理吞噬作用。Yang 等[18]將脂質(zhì)納米粒與合成的CpG 寡脫氧核苷酸（CpG-ODN）和甘露糖偶聯(lián)，然后負(fù)載H22 肝癌裂解液，開(kāi)發(fā)出一種新型脂質(zhì)納米粒M/CpG-ODN-H22 Lipo，該脂質(zhì)納米?？蛇x擇性靶向DCs，顯著誘導(dǎo)DCs 的成熟，并降低調(diào)節(jié)性T 細(xì)胞的比例，上調(diào)脾臟中的IFN-γ 陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)與血清IgG 水平，有效抑制小鼠肝腫瘤的生長(zhǎng)并延長(zhǎng)其生存期。

此外，菊粉、黃芪多糖以及當(dāng)歸多糖（angelica sinensis polysaccharide,ASP）等作為免疫佐劑均有著重要應(yīng)用。Gu 等[19]將 OVA 與 ASP 封裝于聚乳酸-羥基乙酸共聚物[poly（lactic-co-glycolic acid），PLGA]納米顆粒中，結(jié)果顯示，使用ASP-PLGA/OVA 納米顆粒免疫小鼠可顯著促進(jìn)淋巴細(xì)胞的增殖，提高CD4+T與CD8+T 細(xì)胞的比例，同時(shí)可誘導(dǎo)強(qiáng)烈的長(zhǎng)期IgG免疫應(yīng)答，并上調(diào)Th 相關(guān)細(xì)胞因子的水平。由此可見(jiàn)，ASP-PLGA/OVA 納米顆?？纱碳こ掷m(xù)而強(qiáng)烈的抗體應(yīng)答并誘導(dǎo)細(xì)胞免疫應(yīng)答。

1.3 蜂膠

蜂膠是蜜蜂從植物芽孢或樹(shù)干上采集的樹(shù)脂，并混入其上腭腺、蠟腺的分泌物加工而成的一種具有芳香氣味的膠狀固體物。其主要成分為黃酮類、類黃酮類化合物，具有抗菌、抗病毒、抗腫瘤和增強(qiáng)機(jī)體免疫功能等生物學(xué)作用，是一類良好的疫苗佐劑。蜂膠佐劑具有天然、毒性低、穩(wěn)定性好、價(jià)格低廉等優(yōu)點(diǎn)。此外，蜂膠在抗腫瘤方面也有著重要作用，其可增強(qiáng)機(jī)體的抗氧化狀態(tài)及對(duì)病原體的免疫檢測(cè)能力，并調(diào)節(jié)腫瘤微環(huán)境[20]。目前，在我國(guó)蜂膠佐劑多用于動(dòng)物疫苗，并取得了顯著療效。希望隨著對(duì)蜂膠生物學(xué)功能研究的深入，可早日將其應(yīng)用于人類疫苗。

2 動(dòng)物來(lái)源的免疫佐劑

2.1 細(xì)胞因子

細(xì)胞因子是由多種細(xì)胞經(jīng)刺激而合成、分泌的一類具有廣泛生物學(xué)活性的小分子蛋白質(zhì)。其主要化學(xué)成分為蛋白質(zhì)或糖蛋白，具有調(diào)節(jié)固有免疫和適應(yīng)性免疫的功能。隨著人們對(duì)疫苗研究的深入，發(fā)現(xiàn)細(xì)胞因子能增強(qiáng)疫苗的特異性免疫反應(yīng)，故其作為一種新型免疫佐劑受到了廣泛關(guān)注。細(xì)胞因子包括IL、IFN、粒細(xì)胞-巨噬細(xì)胞集落刺激因子（granulocyte macrophage colony factor, GM-CSF）、TNF 和趨化因子等，下文將逐一進(jìn)行介紹。

2.1.1 IL

IL 是由白細(xì)胞分泌的一類細(xì)胞因子，也是種類最多的一類細(xì)胞因子佐劑。其中，IL-1 最早作為免疫佐劑應(yīng)用，其可促進(jìn)B 細(xì)胞增殖，提高IL-2 水平，達(dá)到增強(qiáng)機(jī)體初次和再次免疫應(yīng)答的目的[21]；IL-2 可調(diào)節(jié)T 細(xì)胞生長(zhǎng)，誘導(dǎo)分泌更多的IL-12 和TNF-α并上調(diào)免疫應(yīng)答反應(yīng)，可用作基于DCs 的免疫佐劑[22]，但其毒性較大，導(dǎo)致應(yīng)用受限；IL-12 的相對(duì)分子質(zhì)量小，在極低濃度時(shí)便具有顯著活性，可誘導(dǎo)Th0 細(xì)胞向Th1 細(xì)胞分化，促進(jìn)IFN-γ 的分泌，并激活NK細(xì)胞和細(xì)胞毒性T 淋巴細(xì)胞的活性，主要參與機(jī)體的細(xì)胞免疫[23]；IL-15 主要由巨噬細(xì)胞和DCs 分泌，其作用為增強(qiáng)并維持記憶性CD8+T 細(xì)胞的功能，并調(diào)節(jié)記憶性CD8+T 細(xì)胞和NK 細(xì)胞的數(shù)量[24]；IL-18可誘導(dǎo)T 細(xì)胞和NK 細(xì)胞的活化，NK 細(xì)胞進(jìn)而通過(guò)TNF-α 和 IFN-γ 刺激 DCs 產(chǎn)生高水平的趨化因子[25]。

2.1.2 IFN

IFN 由單核細(xì)胞和淋巴細(xì)胞產(chǎn)生，主要參與機(jī)體早期的免疫應(yīng)答，其可分為 IFN-α、IFN-β 和 IFN-γ 3 類。IFN-α 由 NK 細(xì)胞和 T 細(xì)胞產(chǎn)生，可通過(guò)上調(diào)共刺激分子和MHC 分子的表達(dá)刺激DCs 的成熟。Zhao 等[26]將 GM-CSF、IFN-α 與重組乙型肝炎病毒疫苗組合制成單一制劑，對(duì)小鼠進(jìn)行4 次疫苗接種后，小鼠血清中的HBeAg 和HBsAg 均被清除，同時(shí)乙型肝炎病毒陽(yáng)性肝細(xì)胞減少了95%，且肝臟中浸潤(rùn)著大量CD8+T 細(xì)胞。IFN-γ 主要由活化的NK 細(xì)胞在IL-12 的共刺激作用下產(chǎn)生，其可提高APCs 表面MHC Ⅱ類分子的表達(dá)，并促進(jìn)抗原提呈給Th 細(xì)胞來(lái)調(diào)控免疫應(yīng)答[27]。

2.1.3 GM-CSF

GM-CSF 能增強(qiáng)單核細(xì)胞、粒細(xì)胞、嗜酸性細(xì)胞和巨噬細(xì)胞的功能，提高機(jī)體抗腫瘤及抗感染免疫力，故受到研究者的廣泛關(guān)注。GM-CSF 還可促進(jìn)APCs 表達(dá)MHC Ⅱ類分子和共刺激分子B7，增強(qiáng)抗原特異性CD8+T 細(xì)胞應(yīng)答。IL-2 和GM-CSF 具有協(xié)同效應(yīng)，在誘導(dǎo)腫瘤特異性免疫反應(yīng)中發(fā)揮重要作用，通過(guò)構(gòu)建IL-2-GM-CSF 融合蛋白，既能維持IL-2和GM-CSF 的生物活性，又能克服兩者聯(lián)合使用的局限性[28]。

2.1.4 TNF

TNF 主要由活化的單核和巨噬細(xì)胞產(chǎn)生，具有殺傷和抑制腫瘤細(xì)胞的作用。TNF-α 可作為誘導(dǎo)劑刺激機(jī)體分泌IL-1 和IL-6 等細(xì)胞因子，并參與機(jī)體的炎癥反應(yīng)，受到了研究者的廣泛關(guān)注。文獻(xiàn)報(bào)道，將LIGHT（TNF 超家族中的一員）質(zhì)粒與HIV-1 Nef DNA 疫苗對(duì)BALB/c 小鼠進(jìn)行聯(lián)合免疫，可增強(qiáng)小鼠的特異性免疫反應(yīng)[29]。

2.1.5 趨化因子

趨化因子是指能吸引白細(xì)胞移行至感染部位的一些低相對(duì)分子質(zhì)量的蛋白質(zhì)，在炎癥反應(yīng)中具有重要作用。除此之外，趨化因子還可調(diào)節(jié)淋巴細(xì)胞的發(fā)育。Liu 等[30]采用趨化因子CXCL11 裝配了一種腫瘤選擇性溶瘤病毒vvDD，vvDD-CXCL11 可誘導(dǎo)脾臟和其他淋巴器官中產(chǎn)生腫瘤特異性IFN-γ 的CD8+T 細(xì)胞系統(tǒng)性增加，增強(qiáng)機(jī)體系統(tǒng)性抗腫瘤免疫反應(yīng)，這表明CXCL11 能增強(qiáng)溶瘤病毒和癌癥疫苗的治療效力。Hartoonian 等[31]將CC 趨化因子配體20表達(dá)質(zhì)粒（pCCL20）作為丙型肝炎病毒核心DNA 疫苗的佐劑共同接種BALB/c 小鼠，接種后小鼠體內(nèi)的IFN-γ/IL-4 比值升高，IL-2 釋放增加，小鼠的脾細(xì)胞和淋巴細(xì)胞均發(fā)生增殖，表明CCL20 趨化因子能增強(qiáng)丙型肝炎病毒核心DNA 疫苗免疫中Th1 介導(dǎo)的細(xì)胞和體液免疫，是一類有潛力的免疫佐劑。

總的來(lái)說(shuō)，細(xì)胞因子在調(diào)節(jié)天然免疫應(yīng)答和適應(yīng)性免疫應(yīng)答中發(fā)揮著重要作用，但其毒性與使用劑量密切相關(guān)，且具有免疫原性弱不能有效刺激機(jī)體產(chǎn)生免疫應(yīng)答等缺點(diǎn)，在一定程度上限制了其在免疫佐劑方面的應(yīng)用。隨著對(duì)細(xì)胞因子研究的深入，可將多種細(xì)胞因子聯(lián)合使用或?qū)⒓?xì)胞因子基因連接至免疫原蛋白的基因上，以提高其佐劑效應(yīng)。

2.2 DCs

DCs 疫苗旨在誘導(dǎo)或增強(qiáng)針對(duì)腫瘤抗原的有效抗腫瘤免疫反應(yīng)，其特點(diǎn)是采用最強(qiáng)的APCs——DCs 作為疫苗佐劑，促進(jìn)腫瘤抗原被有效攝取并提供共刺激信號(hào)[32]。DCs 疫苗可與細(xì)胞因子IL-12[33]或TNF-α[34]配伍使用，將 IL-12 或 TNF-α 基因轉(zhuǎn)染進(jìn)入DCs，可激發(fā)DCs 的免疫刺激和抗原提呈功能，還可逆轉(zhuǎn)DCs 的耐受問(wèn)題。盡管DCs 疫苗的安全性及其誘導(dǎo)抗腫瘤反應(yīng)的能力已得到驗(yàn)證，但因缺乏大規(guī)模良好的Ⅱ/Ⅲ期臨床試驗(yàn)，限制了其臨床應(yīng)用。

3 微生物來(lái)源的免疫佐劑

3.1 病毒

病毒樣顆粒（virus-like particles, VLPs）不含病毒基因組但保留病毒衣殼結(jié)構(gòu)，其結(jié)構(gòu)與天然病毒顆粒類似。VLPs 具有很強(qiáng)的免疫原性，可通過(guò)模擬病毒感染途徑來(lái)激活機(jī)體的免疫系統(tǒng)，產(chǎn)生免疫應(yīng)答[35]。VLPs 可誘導(dǎo) DCs 成熟，促進(jìn)抗原提呈，并分泌IFN 等細(xì)胞因子，介導(dǎo)體液免疫。此外，可將VLPs 與其他佐劑靈活結(jié)合，若VLPs 自身免疫原性弱，在其表面連接佐劑則可顯著增強(qiáng)其免疫效應(yīng)。Gogesch等[36]以模塊化方式將模型抗原OVA 和非經(jīng)典佐劑GM-CSF 連接在鼠白血病病毒（MLV）衍生的VLPs表面，結(jié)果表明OVA 和GM-CSF 的模塊化MLV-VLPs能靶向誘導(dǎo)CD11b+APCs 的擴(kuò)增，促進(jìn)抗原特異性T 細(xì)胞的活化和體外增殖。

3.2 細(xì)菌

3.2.1 細(xì)菌樣顆粒

與 VLPs 類似，細(xì)菌樣顆粒（bacterium-like particles，BLPs）也是一種無(wú)生命活性的球形顆粒，其主要成分為乳酸乳球菌肽聚糖殼。人體的某些固有免疫細(xì)胞，如DCs 和巨噬細(xì)胞，在與BLPs 混合后能產(chǎn)生細(xì)胞因子IL-6 和TNF-α，并可增強(qiáng)這些細(xì)胞對(duì)BLPs 的吞噬[37]。BLPs 也可作為佐劑結(jié)合抗原，通過(guò)與Toll 樣受體作用來(lái)激活機(jī)體的固有免疫系統(tǒng)，同時(shí)增強(qiáng)抗原特異性黏膜免疫應(yīng)答和全身免疫應(yīng)答，是一種良好的黏膜免疫疫苗佐劑。與普通注射疫苗相比，黏膜免疫疫苗無(wú)需注射，給藥方便，在引起全身免疫應(yīng)答的同時(shí)還能誘導(dǎo)局部黏膜免疫應(yīng)答，這樣不僅可預(yù)防機(jī)體對(duì)病原體的感染，還可減少病原體在局部黏膜定植，更有利于群體免疫[38]。但目前常用的亞單位疫苗多有免疫原性弱的缺陷，可通過(guò)佐劑和基于顆粒性的載體系統(tǒng)增強(qiáng)黏膜疫苗的免疫原性。Srivastava 等[39]則選擇了具有較強(qiáng)黏膜佐劑活性的霍亂毒素、大腸埃希菌腸毒素和白喉毒素等細(xì)菌毒素來(lái)增強(qiáng)黏膜免疫抗原的免疫反應(yīng)性。綜上所述，BLPs 通過(guò)其出色的抗原展示和免疫激活性質(zhì)，為黏膜疫苗的研發(fā)提供了良好的思路。

3.2.2 細(xì)菌芽孢

芽孢桿菌是細(xì)菌的一科，其特點(diǎn)是能形成芽孢（內(nèi)生孢子）來(lái)抵抗外界的有害因子。細(xì)菌芽孢可用作黏膜和熱穩(wěn)定的疫苗輸送系統(tǒng)。由于芽孢表面帶有負(fù)電荷，且表面層具有疏水性，這為吸附蛋白抗原提供了一個(gè)很好的平臺(tái)。在低pH 條件下，可通過(guò)靜電作用力和疏水作用力促進(jìn)孢子與蛋白抗原的結(jié)合。Copland 等[40]將枯草芽孢桿菌孢子用含有結(jié)合分枝桿菌抗原的融合蛋白1（FP1）包裹，制成疫苗Spore-FP1。與單獨(dú)使用傳統(tǒng)卡介苗的小鼠相比，增加了Spore-FP1 黏膜增強(qiáng)免疫的小鼠體內(nèi)的Th1、Th17 和調(diào)節(jié)性T 細(xì)胞型細(xì)胞因子增多，血清和肺黏膜表面抗原特異性IgG 和IgA 滴度升高，并在肺實(shí)質(zhì)內(nèi)發(fā)現(xiàn)了CD69+/CD103+組織駐留記憶T 細(xì)胞。此外，有研究結(jié)果發(fā)現(xiàn)，滅活的芽孢與活芽孢具有相同的佐劑效應(yīng)。因此，將芽孢用于改善某些疫苗的免疫原性及遞送生物治療分子具有良好的安全性。

3.2.3 細(xì)菌鞭毛蛋白

細(xì)菌鞭毛是某些細(xì)菌菌體上細(xì)長(zhǎng)而彎曲的具有運(yùn)動(dòng)功能的蛋白質(zhì)附屬絲狀物。其所含的鞭毛蛋白作為病原相關(guān)分子模式，可通過(guò)與宿主的Toll 樣受體5 直接相互作用激活先天免疫和適應(yīng)性免疫；獨(dú)特的結(jié)構(gòu)特征賦予了其靈活而有效的佐劑活性，可誘導(dǎo)并增強(qiáng)抗原特異性免疫反應(yīng)[41]。Xiao 等[42]研究了3 種鼠傷寒沙門氏菌鞭毛蛋白FljB、FliC 和FljB'-FliC 作為狂犬病疫苗佐劑的效用，結(jié)果發(fā)現(xiàn)，與單獨(dú)接種狂犬病毒滅活疫苗（whole-killed rabies vaccine, WKRV）或接種具有 FliC 或 FljB′-FliC 的WKRV 相比，F(xiàn)ljB 可使WKRV 誘導(dǎo)更強(qiáng)的體液和細(xì)胞免疫應(yīng)答，且用WKRV 和FljB 共同免疫的小鼠產(chǎn)生的針對(duì)狂犬病毒的中和抗體水平更高，故FljB 是一種有效的狂犬病疫苗佐劑。Kim 等[43]則發(fā)現(xiàn)呈遞鞭毛蛋白的病毒樣顆粒（Flag VLPs）具有獨(dú)特的佐劑作用，可誘發(fā)對(duì)不良免疫原性流感病毒M2e 蛋白疫苗的Th1 型體液和細(xì)胞免疫反應(yīng)，經(jīng)Flag VLPs 和M2e5x 蛋白疫苗共同免疫的小鼠其血清和黏膜中的IgG2a 同型抗體水平更高，且與明礬佐劑相比，其能誘導(dǎo)產(chǎn)生可分泌IFN-γ 和粒酶 B 的CD4+效應(yīng) T 細(xì)胞，起到清除肺部病毒和保護(hù)的作用。

4 展 望

疫苗是預(yù)防和治療疾病的一種重要手段，佐劑作為一種免疫增強(qiáng)劑，可通過(guò)增強(qiáng)機(jī)體的免疫應(yīng)答來(lái)抵御外界病原微生物的侵害。天然來(lái)源的免疫佐劑大多具有易獲取、毒性低、穩(wěn)定性高等特點(diǎn)。盡管目前許多新型合成佐劑不斷出現(xiàn)，但自然界仍是一個(gè)值得深入挖掘和探索的寶庫(kù)，尤其是我國(guó)自古便對(duì)天然動(dòng)、植物藥材頗有研究，研究人員可借助古人的智慧繼續(xù)探索。此外，可將天然佐劑進(jìn)行再加工和處理，改善其靶向性，降低其毒性，還可將幾種佐劑聯(lián)合應(yīng)用，利用它們之間的協(xié)同作用來(lái)增強(qiáng)免疫。隨著對(duì)天然佐劑的深入研究，一定會(huì)有更多的研究成果實(shí)現(xiàn)臨床轉(zhuǎn)化，造福于人類。

利益沖突所有作者均聲明不存在利益沖突