劉婕妤

（甘肅省華亭市農(nóng)業(yè)農(nóng)村局 動(dòng)物疫病預(yù)防控制中心，甘肅 華亭 744100）

布魯氏菌病是由布魯氏菌病引起的人畜共患的一種慢性傳染病。其特征是生殖器官和胎膜發(fā)炎，引起流產(chǎn)、不育和各種組織的局部病灶。布魯氏菌病是我國(guó)二類疫病，本病在華亭市各鄉(xiāng)（鎮(zhèn)）均有不同程度的流行發(fā)展趨勢(shì)，給養(yǎng)羊業(yè)造成了嚴(yán)重?fù)p失。本文對(duì)布病虎紅平板凝集與試管凝集試驗(yàn)方法進(jìn)行了比較，以便為畜間布病檢測(cè)提供科學(xué)依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 材料

華亭動(dòng)物疫病預(yù)防控制中心實(shí)驗(yàn)室，2017年1月-2019年9月采集的2 888份牛羊血清樣品。試驗(yàn)試劑均為山東綠都生物科技有限公司生產(chǎn)。

1.2 方法

對(duì)采集的血清樣品先采用布病虎紅平板凝集試驗(yàn)進(jìn)行陽(yáng)性初篩，再用布病試管凝集試驗(yàn)進(jìn)行結(jié)果定性。

1.2.1 虎紅平板凝集試驗(yàn) 潔凈的玻璃板，其上劃4 cm2的方格，將玻璃板上各格標(biāo)記待檢血清號(hào)（待檢血清應(yīng)新鮮，無(wú)明顯蛋白凝塊，無(wú)溶血和無(wú)腐敗氣味），在玻璃板上先滴加抗原0.03 ml，然后按順序滴加相應(yīng)的血清0.03 ml，即可直接用滴加血清的槍頭攪動(dòng)血清和抗原使之混合，再棄去槍頭，進(jìn)行下一個(gè)待檢血清的檢測(cè)，以此類推。每次試驗(yàn)應(yīng)設(shè)陰、陽(yáng)性對(duì)照。

結(jié)果判定：待檢血清在室溫條件下4 min內(nèi)出現(xiàn)沙粒狀的凝集現(xiàn)象為陽(yáng)性，出現(xiàn)均勻的粉紅色現(xiàn)象為陰性。

1.2.2 試管凝集試驗(yàn)

1.2.2.1 稀釋被檢血清 牛稀釋用1:50、1:100、1:200、1:400（4個(gè)稀釋度 ）；羊1:25、1:50、1:100、1:200（4個(gè)稀釋度)。

1.2.2.2 加抗原 將0.5 ml抗原（1:20）加入已稀釋好的各血清管中，并振搖均勻，各反應(yīng)管反應(yīng)總量為1 ml。

1.2.2.3 設(shè)立對(duì)照 每次試驗(yàn)都應(yīng)設(shè)立對(duì)照。陰、陽(yáng)性血清對(duì)照：加抗原的方法與待檢血清相同（陽(yáng)性血清的最高稀釋度應(yīng)超過(guò)其效價(jià)滴度）；抗原對(duì)照：在0.5 ml稀釋液中，加0.5 ml抗原（1：20）。

1.2.2.4 比濁管的配置 此次試驗(yàn)均配制比濁管，根據(jù)抗原抗體凝集程度，作為判定結(jié)果的參考依據(jù)。

1.2.2.5 結(jié)果判定 根據(jù)出現(xiàn)凝集反應(yīng)的強(qiáng)度進(jìn)行判斷，出現(xiàn)50%以上的凝集（參照比濁管的清亮度）即可判定為陽(yáng)性。

2 結(jié)果

對(duì)采集的2 888份血清樣品進(jìn)行檢測(cè)發(fā)現(xiàn)，虎紅平板凝集檢出陽(yáng)性家畜20例，后對(duì)該20例血清進(jìn)行試管凝集定性檢測(cè)，發(fā)現(xiàn)只有19例。因此，兩次檢測(cè)試驗(yàn)結(jié)果發(fā)現(xiàn)陽(yáng)性符合情況并不完全一致，由此可推斷，布病平板凝集試驗(yàn)有出現(xiàn)假陽(yáng)性的可能。為了提高試驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確度，可對(duì)布病平板凝集初篩的陽(yáng)性血清再進(jìn)行試管凝集定性確診。

3 分析

虎紅平板凝集試驗(yàn)和試管凝集試驗(yàn)簡(jiǎn)便易行。虎紅平板凝集試驗(yàn)有較高的敏感性，且操作較試管凝集試驗(yàn)簡(jiǎn)便、成本低廉、出結(jié)果快的優(yōu)點(diǎn)，可用于大規(guī)模的普查。試管凝集試驗(yàn)具有較高的特異性，操作較虎紅平板凝集試驗(yàn)繁瑣、費(fèi)時(shí)費(fèi)力、出結(jié)果慢，因此在工作中應(yīng)把兩種試驗(yàn)結(jié)合起來(lái)，先用虎紅平板凝集試驗(yàn)篩查，陽(yáng)性標(biāo)本再由試管凝集試驗(yàn)進(jìn)行復(fù)核以作出準(zhǔn)確的判斷。