★ 陳祥云 彭財(cái)英 潘玲玲 盧健 陳圣加 舒積成*

（江西中醫(yī)藥大學(xué) 南昌 30004）

南天竹（Nandina domestica），小檗科（Berberidaceae）南天竹屬（Nandina）小灌木，別名：南天竺，紅杷子，天燭子，紅枸子，鉆石黃，天竹，蘭竹等［1］。主要分布在湖北、江蘇、浙江、安徽、江西、山東、廣西、云南、四川等省，具有觀賞、生態(tài)、藥用等多種價(jià)值［2］。南天竹的次生代謝產(chǎn)物為生物堿、黃酮、揮發(fā)油類(lèi)等，而生物堿成分為主要的活性成分，具有降壓，抗痙攣，抗菌，止咳平喘，解毒等作用［3］。文獻(xiàn)及本課題組研究發(fā)現(xiàn)，南天竹提取物對(duì)抗腫瘤藥三氧化二砷具有較好的減毒作用［4-5］。另外，本課題組前期研究結(jié)果顯示，南天竹總生物堿對(duì)三氧化二砷所致心毒具有明顯拮抗作用［6］。因此，有必要對(duì)南天竹總生物堿提取純化工藝進(jìn)行優(yōu)化，為南天竹的進(jìn)一步開(kāi)發(fā)和利用提供參考。

1 儀器與材料

1.1 儀器 UV-2550 型紫外分光光度計(jì)；電子分析天平（北京塞多利斯儀器有限公司）；恒溫水浴鍋（杭州庚雨儀器有限公司，HH-ZK2 型）；R501 旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器（杭州庚雨儀器有限公司）；KQ-250DB 型數(shù)控超聲波清洗器（昆山市超聲儀器有限公司）；MH-1000 型可調(diào)式電熱套（北京科偉永興儀器有限公司）；SHB-Ⅲ循環(huán)水式多用真空泵（杭州庚雨儀器有限公司）；低溫冷卻液循環(huán)泵（杭州康雨儀器有限公司，DLSB-5/20 型）；電熱恒溫鼓風(fēng)干燥箱（上海精宏實(shí)驗(yàn)設(shè)備有限公司、太倉(cāng)精宏儀器設(shè)備，DHG-9070A 型）。

1.2 試劑與試藥 南天竹購(gòu)于江蘇蘇州，經(jīng)江西中醫(yī)藥大學(xué)付小梅教授鑒定；鹽酸小檗堿對(duì)照品（北京賽百草科技有限公司，純度：≧98%，批號(hào)：633658）；D101、HPD-722、AB-8、NKA- Ⅱ、NKA-9、ADS-17 型大孔吸附樹(shù)脂、732 陽(yáng)離子樹(shù)脂（河北滄州寶恩化工有限公司）；溴甲酚綠（上海馨晟試化工科技有限公司，批號(hào)：20160908）；溴百里香酚藍(lán)（上海馨晟試化工科技有限公司，批號(hào)：20160602）；其它化學(xué)試劑均為分析純。

2 方法與結(jié)果

2.1 南天竹中總生物堿提取條件研究

2.1.1 總生物堿的含量測(cè)定方法的確定 對(duì)照品溶液的制備 精密稱取鹽酸小檗堿對(duì)照品約12.8mg，置50mL 容量瓶中，加甲醇溶解并稀釋至刻度，搖勻，精密量取1mL 至25mL 容量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，配成濃度為10.24μg·mL-1的鹽酸小檗堿對(duì)照品溶液。

酸性染料的配制 溴甲酚綠：稱取0.1g 溴甲酚綠粉末于研缽中，加入2.8mL 的NaOH，研磨至粉末充分溶解后，加入200mL 的蒸餾水稀釋?zhuān)迫刖呷膹V口瓶中備用。溴百里香酚藍(lán)：稱取0.1g 溴百里香酚藍(lán)粉末于研缽中，加入3.2mL 的NaOH，研磨至粉末充分溶解后，加入200mL 的蒸餾水稀釋?zhuān)迫刖呷膹V口瓶中備用。

酸性染料比色法 精密吸取一定量的供試品溶液，用pH=5.0 的磷酸二氫鉀緩沖液4mL 溶解，轉(zhuǎn)移至含有酸性染料3mL 的分液漏斗中，搖勻靜置30min，加入氯仿5mL，震搖靜置10min，取氯仿層，萃取兩次，合并。

測(cè)試波長(zhǎng)確定 取1mL 對(duì)照品溶液分別用2種顯色劑，顯色后，經(jīng)5mL 氯仿分2 次萃取，氯仿定容至25mL，氯仿萃取液作為2 種測(cè)試液，以無(wú)水甲醇為空白對(duì)照，在200～600nm 進(jìn)行全波長(zhǎng)掃描，確定最大波長(zhǎng)。結(jié)果表明：經(jīng)過(guò)顯色劑顯色后，兩者在417nm 處均具有穩(wěn)定吸收，因此選擇417nm為測(cè)試波長(zhǎng)。

酸性染料的選擇 取2mL 對(duì)照品溶液，在測(cè)試波長(zhǎng)處，分別測(cè)定溴甲酚綠、溴百里香酚藍(lán)2 種不同顯色劑吸光度的大小，結(jié)果顯示，在417nm 處，溴甲酚綠作為顯色劑測(cè)得吸光度值相對(duì)較大，因此確定最佳顯色劑為溴甲酚綠。

酸性染料用量的確定 取2mL 對(duì)照品溶液，分別置于不同的25mL 容量瓶中，加入配置好的顯色劑溶液1.0、1.5、2、2.5、3mL，分別加入pH=5.0 的磷酸二氫鉀緩沖液4mL 溶解，搖勻靜置30min，加入氯仿5mL，震搖靜置10min，取氯仿層，萃取兩次，合并，測(cè)試波長(zhǎng)下測(cè)吸光度，結(jié)果如圖1 顯示，隨著酸性染料用量的增加，吸光度值逐漸遞增，為保證結(jié)果準(zhǔn)確，優(yōu)選最佳用量為3mL。

圖1 酸性染料用量試驗(yàn)數(shù)據(jù)

圖2 緩沖液pH值試驗(yàn)數(shù)據(jù)

緩沖溶液pH 值 取2mL 對(duì)照品溶液，分別置于不同的25mL 容量瓶中，加入配置好的顯色劑溶液，分別加入pH=5.0，5.5，6.0，6.5，7.0 的磷酸二氫鉀緩沖液4mL 溶解，搖勻靜置30min，加入氯仿5mL，震搖靜置10min，取氯仿層，萃取兩次，合并，測(cè)試波長(zhǎng)下測(cè)吸光度，結(jié)果如圖2 顯示，隨著PH 值的增加，吸光度值逐漸減小，由測(cè)定效果上來(lái)看，選出最佳pH 為5.0。

緩沖溶液用量的確定 取2mL 對(duì)照品溶液，分別置于不同的25mL 容量瓶中，加入配置好的顯色劑溶液，分別加入pH=5.0 的磷酸二氫鉀緩沖液2.5，3，3.5，4，4.5mL 溶解，搖勻靜置30min，加入氯仿5mL，震搖靜置10min，取氯仿層，萃取兩次，合并，測(cè)試波長(zhǎng)下測(cè)吸光度，結(jié)果如圖3 顯示，緩沖劑用量的吸光度值差別不大，且數(shù)值均較大，推測(cè)樣品量過(guò)大影響了結(jié)果，但從細(xì)小的差距中，可以選出最佳pH 緩沖溶液用量為4.5mL。

圖3 緩沖液用量試驗(yàn)數(shù)據(jù)

2.1.2 含量測(cè)定方法學(xué)考察 線性關(guān)系考察 精密吸取對(duì)照品溶液1、2、3、4、5mL，按照最佳顯色方法測(cè)定，以甲醇作為對(duì)照，用紫外分光光度計(jì)在測(cè)試波長(zhǎng)417nm 處測(cè)其吸光度，以對(duì)照品濃度（C）為橫坐標(biāo)，吸光值A(chǔ) 值為縱坐標(biāo)，進(jìn)行線性回歸，結(jié)果見(jiàn)圖4。

圖4 線性關(guān)系

由圖4，得出標(biāo)準(zhǔn)曲線為Y=0.0161X-0.0279，r=0.9992，在10.24～51.20μg·mL-1范圍內(nèi)鹽酸小檗堿的線性關(guān)系良好。

精密度試驗(yàn) 精密吸取樣品溶液2mL，顯色后，測(cè)定吸光度。測(cè)定6 次。由試驗(yàn)結(jié)果得出其精密度RSD=0.144%，證明儀器精密度良好。

重復(fù)性試驗(yàn) 分別精密吸取樣品溶液2mL，制備6 份供試品溶液，顯色后測(cè)定吸光度。由數(shù)據(jù)RSD=2.66% 可得，其儀器重復(fù)性良好。

穩(wěn)定性試驗(yàn) 精密吸取樣品溶液2mL，分別在0，20，40，60，80，100，120，160，180 min，顯色后測(cè)定其吸光度。結(jié)果顯示，在3 h 內(nèi)，吸光度值的平均值為0.3934，RSD=0.246%，因此可視儀器的穩(wěn)定性良好。

加樣回收試驗(yàn) 精密量取樣品溶液2mL，共6份，每份分別加入對(duì)照品溶液2.5mL，作為供試品溶液，顯色后測(cè)定吸光度。結(jié)果顯示，平均回收率96.38%，RSD=2.61%，其加樣回收試驗(yàn)良好。

2.1.3 提取方法考察 本試驗(yàn)研究考察超聲提取、回流提取和滲漉提取3 種方法對(duì)總生物堿提取得率的影響。

超聲提取法 稱取藥材細(xì)粉50.00g，量取12倍（600mL）75%乙醇，浸泡1h，在溫度31℃，超聲功率為100W 的條件下進(jìn)行超聲提取，提取2 次，每次1h，將兩次超聲提取的提取液合并，減壓回收乙醇，在70℃水浴下濃縮的浸膏，將得到的浸膏放入真空干燥箱中干燥至恒重后，放冷后，進(jìn)行稱重。制備供試品，顯色后測(cè)定吸光度。

回流提取法 稱取藥材細(xì)粉50.00g，量取12倍（600mL）75%乙醇，浸泡1h，進(jìn)行回流提取2次，每次1h，兩次提取的提取液合并，減壓回收乙醇，在70℃水浴下濃縮的浸膏，將得到的浸膏放入真空干燥箱中干燥至恒重后，放冷后，進(jìn)行稱重。制備供試品，顯色后測(cè)定吸光度。

滲漉提取法 稱取藥材粉末50.00g，量取適量75%乙醇，浸泡1d，進(jìn)行充分的膨脹，將濕潤(rùn)膨脹后的藥材，少量多次轉(zhuǎn)移至自制的滲漉筒內(nèi)，加入600mL 75%乙醇浸漬24～48h，以0.6mL·min-1速度進(jìn)行滲漉，不斷添加溶劑，保證溶劑高出藥材，收集滲漉液，減壓回收乙醇，在70℃水浴下濃縮的浸膏，將得到的浸膏放入真空干燥箱中干燥至恒重后，放冷后，進(jìn)行稱重。制備供試品，顯色后測(cè)定吸光度。

供試品制備與測(cè)定 取提取物浸膏約0.20g，置100mL 具塞錐形瓶中，精密加入甲醇液50mL，稱重，超聲處理30min，放冷，稱重，用甲醇液補(bǔ)足重量。過(guò)濾，精密量取續(xù)濾液1mL 于25mL 容量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻，即得。以甲醇液為空白對(duì)照，于417nm 波長(zhǎng)處測(cè)定A 值，從標(biāo)準(zhǔn)曲線上，計(jì)算出供試品溶液中鹽酸小檗堿的濃度。結(jié)果表明對(duì)比3 種提取方法，滲濾提取藥材中的生物堿最純，但其提取的總量要小于回流提取，且時(shí)間最長(zhǎng)，而超聲提取雖方法簡(jiǎn)單易操作，但其提取的效率較其他兩者不高。從提取總量上來(lái)看，提取方法優(yōu)選回流提取法。見(jiàn)表1。

表1 考察試驗(yàn)結(jié)果

2.1.4 最佳工藝確定 正交試驗(yàn)設(shè)計(jì) 單因素試驗(yàn)考察中得出醇濃度在65%時(shí)，提取時(shí)間為1.0h，提取3 次時(shí)，料液比為1∶10，總生物堿提取量最好，根據(jù)醇濃度、料液比、時(shí)間、提取次數(shù)對(duì)總生物堿得率的影響，按照L9（34）表進(jìn)行試驗(yàn)，各因素、水平見(jiàn)表2。

表2 正交表

正交試驗(yàn) 稱取藥材，共9 份，各50.00g，采用上述優(yōu)先的最佳提取方法—回流提取，以提取物中總生物堿的含量為考察指標(biāo)，優(yōu)選提取工藝。按因素水平表設(shè)計(jì)的條件進(jìn)行回流提取，提取液濾過(guò)，濾液合并，測(cè)定生物堿及小檗堿的含量，計(jì)算提取率。結(jié)果顯示，在影響回流提取南天竹總生物堿的四個(gè)因素（醇濃度、提取時(shí)間、料液比、提取次數(shù)）中，根據(jù)極差值Ri 及方差分析，各因素對(duì)南天竹總生物堿提取率影響的主次順序?yàn)镈＞C＞B＞A，即提取次數(shù)影響最大，其次為提取時(shí)間，可得出最佳的提取工藝為A2B1C2D3，即75%乙醇，1∶8 的料液比，提取3 次，每次1h。見(jiàn)表3。

表3 正交試驗(yàn)結(jié)果

（續(xù)表）

2.1.5 驗(yàn)證試驗(yàn) 同一批藥材稱取3 份各50g，按照得到的最佳工藝條件提取，回收溶劑濃縮得浸膏，取浸膏0.2g 制備供試品，顯色后測(cè)定吸光度，計(jì)算總生物堿量，實(shí)驗(yàn)平行3 次。如表4。結(jié)果，南天竹總生物堿的提取工藝穩(wěn)定，得率平均為2.53%。

表4 驗(yàn)證試驗(yàn)結(jié)果

2.2 南天竹總生物堿純化條件研究

2.2.1 樹(shù)脂的選擇及預(yù)處理 樹(shù)脂的預(yù)處理 大孔樹(shù)脂：用95%乙醇浸泡24h，充分溶脹，用乙醇洗至溶液加適量蒸餾水無(wú)白色渾濁現(xiàn)象時(shí)為止（取1mL 流出液加5mL 蒸餾水），最后用蒸餾水洗至無(wú)醇味，備用。陽(yáng)離子樹(shù)脂：稱取適量陽(yáng)離子樹(shù)脂，用去離子水浸泡2h，去離子水洗至無(wú)色顯中性，用2%HCl 沖洗至顯酸性，再用去離子水洗至顯中性，用2%NaOH 沖洗至顯堿性（pH=8～9），將顯堿性的陽(yáng)離子樹(shù)脂用去離子水洗至顯中性，用2%HCl 沖洗至顯酸性，再用去離子水洗至顯中性，備用。

樹(shù)脂的篩選 為較大程度的模擬生產(chǎn)過(guò)程，聯(lián)系實(shí)際應(yīng)用，本實(shí)驗(yàn)采用靜態(tài)吸附以及動(dòng)態(tài)吸附法選擇樹(shù)脂，分別用相同體積樹(shù)脂以及相同質(zhì)量的樹(shù)脂進(jìn)行比較。備選樹(shù)脂分別為大孔樹(shù)脂D101、ADS-17、NKA-9、NKA- Ⅱ、AB-8、HPD-722、陽(yáng)離子樹(shù)脂732。

2.2.2 上樣溶液的制備 最佳提取工藝回流提取，匯總提取液，回收乙醇后，蒸干，去適量加水稀釋?zhuān)频脻舛葹?mg·mL-1的生藥液，備用。

2.2.3 靜態(tài)吸附 稱取不同型號(hào)大孔吸附樹(shù)脂1.0 （濕），置100mL 燒杯中，加樣品溶液20mL，每隔5min 振搖10s，持續(xù)2h，然后靜置24h，充分吸附后，濾過(guò)，測(cè)定吸附前后溶液的吸光度值，計(jì)算靜態(tài)吸附率。吸干經(jīng)靜態(tài)飽和吸附總生物堿后的各型號(hào)樹(shù)脂表面水分，精密加入95%乙醇25mL，每隔5min 振搖10s，持續(xù)2h，測(cè)定洗脫液中總生物堿的質(zhì)量濃度，計(jì)算飽和吸附量和解吸率。結(jié)果顯示，ADS-17 的吸附率較低，D101、NKA-Ⅱ、AB-8、732 陽(yáng)離子樹(shù)脂的解析率較其他前兩者低，從吸附率以及解析率來(lái)看，優(yōu)選NKA-9 與HPD-722 兩種進(jìn)行動(dòng)態(tài)實(shí)驗(yàn)。見(jiàn)表5。

飽和吸附量=（原料液質(zhì)量濃度×原料液體積-流出液質(zhì)量濃度×流出液體積） /濕樹(shù)脂的量

吸附率=飽和吸附量/原料液中總堿的量× 100%

解吸率=洗脫液質(zhì)量濃度×洗脫液體積/飽和吸附量×100%

表5 靜態(tài)吸附結(jié)果

表6 動(dòng)態(tài)吸附結(jié)果

2.2.4 動(dòng)態(tài)吸附實(shí)驗(yàn) 準(zhǔn)確稱取樹(shù)脂適量，經(jīng)預(yù)處理合格后濕法裝柱，準(zhǔn)確吸取上樣液10mL，以流速0.5mL·min-1上柱，預(yù)吸附2h。先用9 倍蒸餾水以1.0mL·min-1流速洗脫，至洗脫液無(wú)色，再以80%乙醇0.5mL·min-1流速洗脫，洗脫至近無(wú)色，分別收集洗脫液，經(jīng)濃縮干燥后得干燥物，計(jì)算各洗脫部分的總生物堿含量。結(jié)果顯示：綜合靜態(tài)吸附實(shí)驗(yàn)及動(dòng)態(tài)實(shí)驗(yàn)結(jié)果，HPD-722 比吸附量以及比洗脫量均略高于NKA-9，因此得出最佳樹(shù)脂類(lèi)型為HPD-722。見(jiàn)表6。2.2.5 動(dòng)態(tài)吸附因素考察 上樣液濃度考察 準(zhǔn)確稱取處理好的樹(shù)脂3 份，每份樹(shù)脂30g（濕重），濃度分別為8mg·mL-1（10mL），4mg·mL-1（20mL），2mg·mL-1（40mL） 的上柱液各 1 份，以0.5mL·min-1流速動(dòng)態(tài)上樣，然后用 6 倍蒸餾水以0.5mL·min-1流速洗脫，至洗脫液無(wú)色，再以 8 倍 80% 乙醇以0.5mL·min-1流速洗脫，至洗脫液無(wú)色，分別收集洗脫液。測(cè)定總生物堿含量，計(jì)算吸附率及洗脫率。結(jié)果顯示：對(duì)比三者得到生物堿的純度，得出濃度4mg·mL-1為最佳上樣液濃度。

最大上樣量 準(zhǔn)確稱取處理好的樹(shù)脂30 g（濕重），取濃度為4mg·mL-1的上樣液，以0.5mL·min-1的流速加入樹(shù)脂中，用容器收集流出液，每10mL一管，測(cè)定收集液中的總生物堿的含量，繪制關(guān)于吸附的動(dòng)態(tài)曲線。結(jié)果顯示，當(dāng)上樣量的體積在20mL 左右的時(shí)候，生物堿類(lèi)物質(zhì)開(kāi)始泄露增加，為減少損失，提高回收率，本實(shí)驗(yàn)選用最大上樣量為35mL。結(jié)果見(jiàn)圖5。

圖5 動(dòng)態(tài)吸附泄漏曲線

圖6 動(dòng)態(tài)洗脫濃度曲線

醇濃度考察 取處理好的樹(shù)脂30g（濕重），制備樣品溶液，吸取樣品溶液20.0mL，以0.5mL·min-1流速動(dòng)態(tài)上樣，上樣完畢后靜置2h。然后用6 倍蒸餾水以0.5mL·min-1流速洗脫，至水洗脫液無(wú)色；再依次用 8 倍的35%、50% 、65%、80%、90%乙醇溶液進(jìn)行洗脫，收集洗脫液。測(cè)定洗脫液總生物堿含量，計(jì)算不同濃度乙醇的洗脫率。結(jié)果顯示，隨著醇濃度的增加，洗脫率增加，醇濃度80% 以上時(shí)增加減少，洗脫效果接近，成本考慮，選擇80%為最佳洗脫醇濃度。結(jié)果見(jiàn)圖6。

洗脫用水體積 取處理好的樹(shù)脂30g（濕重），吸取樣品溶液，以0.5mL·min-1流速動(dòng)態(tài)上樣，靜置2h，分段收集滲出液，計(jì)算滲出液中的總生物堿含量。結(jié)果顯示，隨著洗脫水體積的增加，濃度逐漸降低，從節(jié)約方面考慮，當(dāng)水洗脫體積達(dá)到6 倍的時(shí)候，洗脫完全。因此最佳洗脫體積為6 倍。結(jié)果見(jiàn)圖7。

圖7 動(dòng)態(tài)洗脫用水體積曲線

圖8 動(dòng)態(tài)洗脫醇體積曲線

醇洗脫量 取處理好的樹(shù)脂30g（濕重），吸取樣品溶液20.0mL，以0.5mL·min-1流速動(dòng)態(tài)上樣，上樣后靜置2h。然后用6 倍蒸餾水以0.5mL·min-1流速洗脫，再用80%乙醇以0.5mL·min-1流速進(jìn)行洗脫，分段收集滲出液，計(jì)算洗脫液中總生物堿的含量。結(jié)果表明，隨著體積的增加，濃度逐漸降低，對(duì)比總體及實(shí)驗(yàn)時(shí)間的考慮，當(dāng)醇洗脫體積達(dá)到10 倍時(shí)，洗脫完全，因此，最佳洗脫體積為10 倍，結(jié)果見(jiàn)圖8。

上樣流速 取質(zhì)量濃度為4mg·mL-1的4 份上樣液20mL，緩緩加上，流速分別為0.5，1，2，3mL·min-1。上樣完成后，靜置2h，用6 倍蒸餾水洗脫，收集上樣流出液和水洗脫液。測(cè)定總生物堿含量，計(jì)算吸附率。結(jié)果表明，隨著流速的增大，吸附率開(kāi)始下降，雖流速慢，吸附率大，但耗時(shí)較長(zhǎng)，經(jīng)綜合考慮，選流速為2mL·min-1。

醇洗流速 按上述所確定的最優(yōu)條件上樣，先用6 倍水洗脫后，用 80% 乙醇 10 倍洗脫，流速分別為0.5，1，2mL·min-1，收集洗脫液。測(cè)定總生物堿含量。結(jié)果，隨著流速的增加，洗脫率逐漸降低，醇洗流速0.5mL·min-1與1mL·min-1的結(jié)果差距不大，綜合考慮時(shí)間及純度比較，最佳醇洗流速為1mL·min-1。

2.2.6 驗(yàn)證試驗(yàn) 取處理好的樹(shù)脂30g（濕重），按大孔樹(shù)脂預(yù)處理下，濕法裝柱并洗去雜質(zhì)。制備樣品溶液，吸取樣品溶液15.0mL，以0.5mL·min-1流速動(dòng)態(tài)上樣，上樣完畢后靜置 2 h。然后按照得到的最佳純化工藝進(jìn)行純化，收集洗脫液，測(cè)定總生物堿含量。實(shí)驗(yàn)平行3 次。如表7。結(jié)果，HPD722 大孔樹(shù)脂純化南天竹中總生物堿效果明顯，總生物堿可從提取液中15.02%含量提升到70%以上。

表7 純化驗(yàn)證試驗(yàn)結(jié)果

3 討論

目前，對(duì)南天竹總生物堿的含量測(cè)定方法未見(jiàn)報(bào)道，南天竹生物堿主要是小檗堿類(lèi)和原小檗堿類(lèi)衍生物。文獻(xiàn)檢索發(fā)現(xiàn)，與上述母核結(jié)構(gòu)相類(lèi)似的總生物堿含量測(cè)定的方法多采用酸性染料比色法［7-8］，該法主要針對(duì)生物堿類(lèi)藥物，樣品用量少，靈敏度高，具有一定的專(zhuān)屬性和準(zhǔn)確度［9］。故本實(shí)驗(yàn)在文獻(xiàn)的基礎(chǔ)上，優(yōu)先出南天竹總生物堿含量測(cè)定具體工藝。運(yùn)用此方法需按照嚴(yán)格步驟操作，盡量減少人為誤差。試驗(yàn)中所配制的酸性染料不宜使用時(shí)間過(guò)長(zhǎng)，為保證數(shù)據(jù)偏差，建議在1 周內(nèi)使用。生物堿于酸性染料形成的絡(luò)合物易見(jiàn)光分解，注意避光。進(jìn)行紫外測(cè)定時(shí)，濃度過(guò)大測(cè)量結(jié)果的誤差增大，因此濃度不易過(guò)大。

本實(shí)驗(yàn)以小檗堿作為對(duì)照品，采用酸性染料比色，經(jīng)正交試驗(yàn)得出，回流提取法為南天竹總生物堿的最佳提取方法，且最佳提取工藝為75%乙醇，1∶8 的料液比，提取3 次，每次1h。通過(guò)對(duì)影響大孔樹(shù)脂吸附及解吸的各種因素系統(tǒng)研究，證明HPD-722 型樹(shù)脂對(duì)于南天竹總生物堿具有吸附快、解吸較易、流體流動(dòng)性能好、操作簡(jiǎn)單和周期短等優(yōu)勢(shì)，因而有利于規(guī)模化生產(chǎn)。經(jīng)HPD-722 處理后的南天竹干浸膏中總生物堿的含量可達(dá)70% 以上。南天竹總生物堿含量明顯提高。結(jié)果可為南天竹總生物堿相關(guān)制劑工藝奠定了良好基礎(chǔ)，為大生產(chǎn)提供科學(xué)參考。

在進(jìn)行樹(shù)脂靜態(tài)試驗(yàn)篩選時(shí)，樹(shù)脂用量從節(jié)約樣品以及實(shí)驗(yàn)時(shí)間上考慮，不易用量過(guò)多，建議與樣品量比為1∶20。為保證測(cè)量準(zhǔn)確，樣品用量要高于樹(shù)脂的吸附量。不論靜態(tài)還是動(dòng)態(tài)試驗(yàn)，要保證樹(shù)脂有足夠的時(shí)間進(jìn)行充分吸附，建議靜置24 h。隨著吸附洗脫次數(shù)的增加，樹(shù)脂內(nèi)雜質(zhì)增多，吸附力降低，考慮生產(chǎn)成本，保證總生物堿的回收率及純度，建議使用3～4 次后必須對(duì)樹(shù)脂進(jìn)行再生處理。